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罗非鱼颗粒蛋白前体cDNA序列与表达分析被引量：2: 2010年; 颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)在先天免疫反应调控及个体生长发育过程中均有重要作用。通过对罗非鱼外周血白细胞全长cDNA文库筛选得到的序列进行生物信息学分析,获得罗非鱼Pgrn全长cDNA序列(GenBank登录号为GQ241348)。该cDNA克隆总长843bp,包含一个完整的开放阅读框,编码206个氨基酸,其中推定信号肽20个氨基酸,两个GRN重复单位均56个氨基酸。研究采用实时定量PCR(Real-time RT-PCR)方法对感染海豚链球菌后奥尼罗非鱼、尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼和吉富罗非鱼4种组织(脑、肝脏、脾脏和头肾)Pgrn mRNA表达情况进行分析。结果显示,Pgrn mRNA在攻毒后4种罗非鱼4种组织中表达均有上调趋势,并且在脾中的表达量最高,提示PGRN在鱼类先天免疫反应调控中起重要作用。另外,奥尼罗非鱼在感染海豚链球菌后6h的脑和肝脏、6h和12h的脾脏和头肾中Pgrn mRNA表达均下调,然后表达升高,这种表达变化在其他三种鱼中不明显,这也许是奥尼罗非鱼抗病力较强的一个原因。研究为从分子水平探讨PGRN在罗非鱼先天免疫反应中的作用机制提供了数据,也为罗非鱼的抗病选育提供了参考分子标记。; 王瑞陈明黄钧李超甘西余晓丽黄婷梁万文; 关键词：罗非鱼实时定量PCR 抗病育种基因表达分析

创伤弧菌和哈氏弧菌快速检测方法: 本发明提供了一种创伤弧菌和哈氏弧菌快速检测方法，目的是为了有利于控制创伤弧菌和哈氏弧菌在海水养殖动物中传播与爆发，采用了现代先进双重聚合酶链反应技术，设计创伤弧菌和哈氏弧菌特异性引物V<Sub>1</Sub>和H<Sub...; 陈福艳黄婷陈晓汉杨学明梁万文程光平韦友传欧阳贤华陈明余晓丽王瑞李莉萍雷爱莹; 文献传递

用链球菌疫苗免疫罗非鱼前后其差异表达基因的鉴定与分析被引量：5: 2009年; 采用抑制性差减杂交技术(SSH)成功构建了罗非鱼O reochrom is nilotica被链球菌Streptococcus iniae疫苗免疫前后正、反两个淋巴细胞cDNA差减文库,富集了免疫过程中表达谱发生变化的淋巴细胞基因,并对文库进行了斑点杂交筛选、测序和ESTs初步分析。结果表明:文库富集了高丰度的差异表达基因,阳性率较高。正向文库中筛选得到21个免疫期间表达丰度上调的基因,其中1个基因与罗非鱼已知基因具有相似性,10个基因与其他鱼类已知基因相似,1个基因与其他物种已知基因具有相似性,9个为未知新基因;负向文库中筛选得到24个免疫期间表达丰度下调的基因,其中3个与罗非鱼已知基因具有相似性,15个与其他鱼类已知基因相似,6个为未知新基因。进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白、防御相关蛋白、肿瘤免疫相关蛋白和淋巴细胞相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度升高,提高了机体免疫抵抗力。负向文库功能基因包括细胞免疫相关蛋白、感染相关蛋白和肿瘤发生相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度降低,可以降低机体感染和发病几率。; 李超陈明李莉萍黄维义余晓丽黄婷张彬雷爱莹陈福艳梁万文; 关键词：罗非鱼链球菌疫苗差减文库免疫相关基因

罗非鱼免疫前后白细胞cDNA差减文库的构建及鉴定被引量：9: 2010年; 为筛选罗非鱼链球菌疫苗免疫前后白细胞表达变化基因及探讨鱼类白细胞免疫机理,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,以链球菌疫苗免疫前后罗非鱼白细胞cDNA为材料,构建了罗非鱼免疫前后正、负2个cDNA差减文库,并采用地高辛(DIG)标记差减文库cDNA作为探针,进行差异表达片段的筛选鉴定。结果显示:2个文库重组率均在90%以上,插入片段在300～900 bp,接头连接效率超过50%,差减效率非常高效,阳性率均超过70%。杂交筛选后正、负文库各挑选30个阳性克隆进行测序组装聚类,正、负文库各获得16和18条非冗余EST(unigene),所得序列经GenBank同源性分析,正、负文库各有10和11条unigene获得功能注释,且各有6和7条unigene没有同源性匹配,为未知新基因。; 李超陈明李莉萍黄维义余晓丽黄婷张彬雷爱莹陈福艳梁万文; 关键词：罗非鱼链球菌差减文库

创伤弧菌和哈氏弧菌双重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2: 2013年; 根据创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的溶细胞毒素基因序列和哈氏弧菌(Vibrio harveyi)的toxR基因序列,分别设计并合成两对特异性引物,通过PCR反应条件优化,测试两种菌的特异性和敏感性,建立双重PCR方法,同时快速检测V.vulnificus和V.harveyi。结果表明:纯培养V.vulnificus和V.harveyi的检测灵敏度分别是12 cfu/mL和18 cfu/mL,与无乳链球菌、海豚链球菌、副溶血弧菌及美人发光杆菌无交叉反应;此PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性,具快速、高效等优点,对细菌V.vulnificus和V.harveyi诊断与防治具有较好的临床应用性。; 陈福艳程光平欧阳贤华陈晓汉梁万文韦友传黄婷杨学明陈明王瑞李丽萍韦明利; 关键词：双重PCR 创伤弧菌哈氏弧菌

一种罗非鱼用口服疫苗免疫佐剂及其应用: 本发明公开了一种罗非鱼用口服疫苗免疫佐剂及其应用，这种罗非鱼用口服疫苗免疫佐剂是重组罗非鱼热休克蛋白70蛋白，简称tHSP70，利用热休克蛋白70特异性上下游引物克隆罗非鱼热休克蛋白70基因，构建tHSP70酵母表达系统...; 陈明王瑞梁万文王秋华李超黄婷雷爱莹李莉萍甘西陈晓汉; 文献传递

HSP70在罗非鱼链球菌病口服免疫的应用基础研究: 陈明王瑞梁万文甘西雷爱莹李莉萍王秋华李超黄婷陈福艳梁绍秋唐佳有; 1、课题来源与背景：链球菌病对罗非鱼养殖危害严重，药物只能在早期起到控制病情的辅助性作用，随着耐药和抗药性的产生和积累，造成该病几乎是“无药可治可防”。注射型疫苗因操作问题限制了其生产应用，传统疫苗通过口服免疫因不能诱导...; 关键词：; 关键词：罗非鱼链球菌病疫苗口服免疫

斑点叉尾鮰爱德华氏病疫苗研究与应用: 梁万文余晓丽陈明黄婷李莉萍雷爱莹张彬陈福艳王瑞; 任务来源：2007年2月，广西科技厅将广西科技研发计划项目“技术引进消化吸收再创新及产业化开发”所属课题“斑点叉尾鮰爱德华氏病疫苗研究与应用”下达给广西水产研究所承担(桂科计字[2007]18号)。于2007年6月与项目...; 关键词：; 关键词：斑点叉尾鮰爱德华氏病网箱养殖

广西罗非鱼链球菌病流行菌株PCR鉴定和PFGE基因型分析被引量：27: 2013年; 为获知近年广西罗非鱼链球菌病流行菌种及其基因型变化信息,采用特异PCR方法对2006—2012年从广西发病罗非鱼分离获得的77株临床菌株进行鉴定,并通过脉冲电场凝胶电泳(PFGE)对2006—2011年分离获得的37株流行菌株进行基因型分析。结果显示,其中20株鉴定为海豚链球菌其余57株鉴定为无乳链球菌。2006—2007年获得的19株流行菌株中有18株为海豚链球菌(94.7%),仅1株无乳链球菌;2009—2012年分离的58株流行菌株中56株为无乳链球菌(96.6%),仅2株海豚链球菌。PFGE图谱聚类显示,海豚和无乳链球菌分别聚类为两个大分支,20株海豚链球菌共产生4种PFGE带型,带型相似度为83.9%～100%;17株无乳链球菌共产生5种PFGE带型,带型相似度为47.4%～100%。研究表明,广西罗非鱼链球菌病流行菌种已从过去(2008年前)以海豚链球菌为主转变为现在(2009—2012年)以无乳链球菌为主;流行菌株PFGE基因型存在多样性。; 李莉萍王瑞黄婷黄维义梁万文李健黄彦雷爱莹甘西陈明; 关键词：罗非鱼海豚链球菌基因型

凡纳滨对虾及养殖水体中弧菌的分离鉴定被引量：5: 2013年; 采用TCBS选择培养基从广西钦州市、防城港市等地的凡纳滨对虾及养殖水体中分离纯化得到8株细菌,对分离菌株进行生理生化特性鉴定,并对全部菌株16S rRNA基因序列及部分菌株的HSP60基因序列进行克隆、测序,运用Mega 4.1软件中的Neighbor-Joining法构建系统进化树。选取河流弧菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌各1株对凡纳滨对虾成虾进行人工感染试验。结果表明,菌株S被鉴定为河流弧菌,菌株M1、M2、M3、水1、水2、水3被鉴定为溶藻弧菌、菌株H1被鉴定为哈氏弧菌;溶藻弧菌对对虾成虾的致病性最强,其次是哈氏弧菌。; 何苹萍赵永贞陈秀荔张彬黄婷彭敏杨春玲杨彦豪李咏梅陈晓汉; 关键词：凡纳滨对虾弧菌

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黄婷

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