魏梅梅
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项上海市科学技术发展基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析
- 2013年
- 为解析日本血吸虫精氨酸酶的功能,本研究克隆了SjARG基因、长度为1095 bp,并将该基因克隆一到原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET-28a-SjARG,并在大肠杆菌中成功表达,Western blot显示重组蛋白具有良好的抗原性;通过酶活性分析显示,重组蛋白SjARG在添加Mn2+后活性得到提高,酶活性大小为502 U/mg,Km值为82.7mM。该研究结果为进一步深入研究该基因的表达特性、酶学性质以及候选疫苗分子研究方面提供了基础。
- 艾德宙韩艳辉洪炀熊雅念魏梅梅孟培培黄莉妮伍妙梨林矫矫傅志强
- 关键词：日本血吸虫精氨酸酶酶活性
- 日本血吸虫章鱼胺受体基因的克隆表达及分析被引量：2
- 2013年
- 为克隆日本血吸虫章鱼胺受体(SjOAR)基因,揭示其表达情况以及表达产物的分布情况,利用PCR方法克隆了SjOAR基因。Blast分析表明,该基因与终末宿主对应的肾上腺素受体基因的同源性较低。利用大肠杆菌表达了受体蛋白的保守区段。Western-blot分析结果表明,重组蛋白能被成虫抗原抗血清识别,其特异性抗体也能识别天然受体蛋白。实时定量RT-PCR分析结果显示,SjOAR基因在血吸虫的童虫和成虫中转录差异不大。免疫组化观察显示,该受体蛋白在日本血吸虫体被下方的肌层和生殖系统中分布较多。结果表明,日本血吸虫章鱼胺受体有作为抗血吸虫药物研究靶标的潜力。
- 孟培培魏梅梅熊雅念黄莉妮艾德宙洪炀伍妙梨程相朝林矫矫傅志强
- 关键词：日本血吸虫转录
- 日本血吸虫dysferlin基因的克隆及重组蛋白免疫原性的分析被引量：1
- 2013年
- 为评估日本血吸虫dysferlin重组蛋白(rSjDF)的免疫原性,利用PCR技术扩增SjDF基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-SjDF,诱导表达重组蛋白rSjDF,并用重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗体。应用间接免疫荧光技术对SjDF进行蛋白组织定位。应用Western-blot、ELISA及Bio-Plex悬液芯片技术检测重组蛋白诱导的免疫反应。间接免疫荧光试验表明SjDF主要分布于血吸虫体被表膜。Western-blot结果显示rSjDF能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有良好的免疫原性。rSjDF能诱导小鼠产生高水平的特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体和IL-2、IL-4、IL-12p70、IL-10、IFN-g等细胞因子。结果表明,制备的重组抗原能刺激小鼠产生较强的免疫反应,为筛选新的血吸虫疫苗候选分子奠定了基础。
- 熊雅念魏梅梅洪炀黄莉妮孟培培艾德宙韩艳辉傅志强林矫矫
- 关键词：日本血吸虫DYSFERLIN基因克隆免疫应答
- 日本血吸虫SjIrV1的基因特性及免疫保护效果
- 2013年
- 钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列,BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1 cDNA编码序列一致,荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达,其中在35 d和42 d成虫中表达量较高,在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒pET28a(+)-SjIrV1,在大肠杆菌中成功诱导表达,重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过高效液相色谱法(RP-HPLC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹(Western blotting)分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别,SjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果表明SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。
- 魏梅梅熊雅念洪炀黄莉妮孟培培艾德宙张旻傅志强刘升发林矫矫
- 关键词：日本血吸虫钙结合蛋白免疫原性免疫保护
- 日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析
- 题组在前期日本血吸虫体被表膜蛋白研究中鉴定到精氨酸酶,为进一步阐明日本血吸虫精氨酸酶(SjARG)的特性和生物学功能,应用PCR克隆了SjARG基因,构建了重组表达质粒pET-28a-SjARG,在大肠杆菌BL21(DE...
- 艾德宙傅志强韩艳辉洪炀熊雅念魏梅梅孟培培黄莉妮伍妙梨林矫矫
- 关键词：兽医学日本血吸虫精氨酸酶酶活性
- 日本血吸虫重组抗原及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种日本血吸虫重组抗原，该重组抗原包含：日本血吸虫PGMRC2蛋白的SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明还公开了该日本血吸虫重组抗原的制备方法及其在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。本发明...
- 林矫矫吴秀娟傅志强洪炀张旻韩艳辉李学珍赵彬王飞魏梅梅王馨茁李长健曹晓丹
- 文献传递
- 日本血吸虫章鱼胺受体基因克隆表达及分析
- 目的：克隆日本血吸虫章鱼胺受体编码基因,了解其表达和分布情况.方法:利用PCR技术扩增日本血吸虫章鱼胺受体基因,利用大肠杆菌表达该受体蛋白,纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.通过RT-PCR、Western-blot以...
- 孟培培傅志强魏梅梅熊雅念黄莉妮艾德宙洪炀伍妙梨程相朝林矫矫
- 关键词：动物医学血吸虫基因克隆蛋白表达
- 文献传递
- 日本血吸虫视黄酸X受体2全长cDNA的克隆及初步分析被引量：1
- 2012年
- 目的克隆编码日本血吸虫视黄酸X受体2(SjRXR2)蛋白的全长cDNA,并对其进行初步研究。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得SjRXR2蛋白全长编码cDNA。利用生物信息学技术,对基因结构进行初步分析。利用实时荧光定量(Real time)PCR技术对该基因在日本血吸虫不同时期虫体中的转录情况进行分析。应用在线抗体表位预测软件获得SjRXR2配体结合区抗原性较强的一个多肽序列,合成该多肽片段,并免疫小鼠制备抗血清。利用Western blot技术分析该蛋白在日本血吸虫中的表达。结果采用RACE技术成功获得了SjRXR2蛋白全长编码cDNA,总长度为5 960bp,其完整开放阅读框为4 308 bp,编码1 435个氨基酸,预测分子量为159 kDa。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白质序列具有核受体家族2的典型结构域特征,且与曼氏血吸虫RXR2有较高的相似性。Real time PCR分析表明,该基因在21、42 d龄日本血吸虫虫体内有较高的转录水平。Western blot分析表明,小鼠SjRXR2多肽免疫血清可特异性识别日本血吸虫虫体150 kDa蛋白。结论成功获得了编码SjRXR2蛋白的全长cDNA,并制备了针对该蛋白的特异性多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 邱春辉刘升发洪炀傅志强张旻魏梅梅艾德宙林矫矫
- 关键词：日本血吸虫CDNA末端快速扩增技术
