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念珠菌优势抗体检测方法的建立及临床诊断价值评估被引量：9: 2013年; 目的侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)是免疫功能损伤或低下患者常见的感染和死亡原因,近年来检测IC患者血清中特异性抗体的血清学诊断方法成为研究热点。本文旨在建立检测念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)、果糖二磷酸醛羧酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)特异性抗体的ELISA方法,评估其在IC早期诊断中的应用价值。方法利用基因重组技术获得的Eno、Fba1重组蛋白作为包被抗原,建立测定人血清相应抗体的ELISA,并对方法的敏感性、特异性进行考查。结果建立了检测IC患者血清抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA,cut-off值分别为吸光度(A)值0.370和0.610。ELISA结果显示,IC患者血清中的抗Eno、抗Fba1抗体水平明显高于健康对照和非IC患者对照(P<0.001)。抗Eno和抗Fba1对诊断IC的敏感性和特异性分别为72.3%(73/101)和98%(196/200),87.1%(88/101)和96%(192/200),联合检测可提高敏感性至91.0%。且与细菌感染及其他真菌感染患者(如曲霉病)无交叉反应。IC患者中40.6%(41/101)可以在血培养阳性前检测到抗Eno、49.5%(50/101)可以在血培养阳性前检测到抗Fba1。结论建立了检测抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA法,检测念珠菌菌丝相分泌蛋白IgG抗体特异性和灵敏度良好,在念珠菌感染诊断中具有潜在临床应用价值。; 马春芳陆静芬孔倩倩韩丹丹廖红李芳秋; 关键词：念珠菌烯醇化酶 ELISA

健康人外周血烟曲霉硫氧还蛋白还原酶抗原特异性T淋巴细胞检测与结果评价被引量：2: 2014年; 目的为评估烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)抗原是否具有免疫保护作用,文中建立并优化检测健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中TR抗原特异性T淋巴细胞(TR/AST)分泌干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)与白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测技术,以探讨TR抗原特异性T淋巴细胞在侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)中的作用。方法采用方阵滴定法优化ELISPOT反应条件。以烟曲霉TR为特异性刺激物,阳性细胞刺激剂为对照,用ELISPOT技术检测20名健康人外周血PBMC分泌IFN-γ、IL-4的阳性斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)频数。结果方阵滴定法结果显示,10μg TR抗原、健康人PBMC终浓度为3×105/孔时ELISPOT检测结果最佳。20名健康人特异性分泌IFN-γ和IL-4的SFC频数分别为15(3.5,59.5)个和0(0,0)个,IFN-γ的SFC频数显著高于IL-4,差异有统计学意义(P<0.001)。TR可刺激所有20名健康人产生IFN-γ应答,其中9例产生强IFN-γ应答(SFC>20个/3×105PBMC),占45%;而19名健康人在TR刺激后不产生IL-4应答,仅1例产生弱IL-4应答(SFC=1)。结论烟曲霉TR抗原诱导的T细胞免疫以Th1型免疫应答占绝对优势,因此,该抗原具有成为保护性抗原的潜能。; 史利宁胡毓安廖红韩雪韩丹丹李晓军李芳秋; 关键词：烟曲霉硫氧还蛋白还原酶 T淋巴细胞酶联免疫斑点检测

假丝酵母菌属感染评分预测外科ICU患者侵袭性真菌感染: 2014年; 目的采用假丝酵母菌属评分(CS)以预测普通外科ICU患者侵袭性假丝酵母菌病(IC),弥补血培养方法的不足。方法采集2011年6月-2013年5月普通外科ICU 307例患者资料及微生物检验结果,结合临床诊疗实际,参考国外假丝酵母菌属感染评分标准(CS=2×脓毒症+1×外科手术+1×全肠外营养+1×假丝酵母菌属定植),以CS=3作为预测假丝酵母菌属感染的临界值,并将评分结果与真菌培养结果进行比较分析。结果 307例ICU患者中,CS≥3者145例占47.2%;确诊IC感染患者34例,感染率为11.1%;CS≥3的确诊感染IC患者33例,占总体确诊感染IC患者总数的97.1%。结论假丝酵母菌属评分方法早期预测ICU患者侵袭性假丝酵母菌病具有一定的价值,对临床预防性应用抗真菌药物有一定的指导意义。; 廖红张国勇李芳秋李伟韩丹丹刘倩; 关键词：假丝酵母菌属

侵袭性真菌感染的菌种分布和药敏分析被引量：3: 2015年; 侵袭性真菌感染的主要病原菌有假丝酵母菌属、隐球菌属和曲霉菌属。随着抗真菌药物的广泛应用,真菌耐药情况的变化也逐渐引起临床关注[1]。本研究对南京军区南京总医院2010-2012年3年间就诊患者中发生院内侵袭性真菌感染的病例进行了病原学及体外药物敏感性的回顾性分析,结果如下。1材料与方法1.1菌株来源356株真菌分离自2010年1月至2012年12月间南京军区南京总医院住院和急诊重症监护病房（ICU）收治的302例临床疑似侵袭性真菌感染患者的无菌部位标本（包括脓液）。; 李伟李芳秋韩丹丹廖鸿张国勇王颖黄梅; 关键词：真菌侵袭性真菌感染药物敏感性

检测3种侵袭性真菌感染相关抗体的蛋白质芯片法被引量：2: 2013年; 目的用念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)及烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)3种基因重组蛋白质,建立检测这3种蛋白质特异性抗体的蛋白质芯片法,并进行临床应用评价。方法用重组Eno、Fba1和TR作为固相抗原构建蛋白质芯片。对芯片制备及血清中相应抗体测定的反应条件进行优化。对方法的重复性、稳定性及特异性进行考察,并测定临床确诊的侵袭性念珠菌病(IC)、侵袭性曲霉病(IA)患者血清中的相应抗体。结果蛋白质芯片以硝酸纤维素膜为固相载体,以Tris-HCl为载样液,重组Eno、Fba1、TR最适点阵浓度分别为0.5 mg/mL、0.04 mg/mL和1.0 mg/mL,用含50 g/L脱脂奶粉的PBS溶液封闭,待测血清稀释度为1∶10。抗Eno抗体和抗Fba1抗体诊断IC的敏感性和特异性分别为67.6%(71/105)和96.5%(299/310),64.8%(68/105)和90.3%(280/310);联合检测抗Eno抗体和抗Fba1抗体,可将敏感性提高至81.0%。抗TR抗体诊断IA的敏感性为71.4%(30/42),特异性为98.1%(366/373)。结论建立了同时检测两种真菌的3种不同抗体的蛋白质芯片方法,敏感性尚可,可用于高危人群的筛查。; 马春芳李芳秋胡毓安史利宁韩丹丹廖红李伟; 关键词：蛋白质芯片抗体侵袭性念珠菌病侵袭性曲霉病

血清抗烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ肽段IgG类抗体ELISA法的建立及初步应用被引量：2: 2014年; 目的建立检测人血清中抗烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ(dipeptidyl peptidasesⅤ,DPPⅤ)肽段IgG类抗体(抗DPPⅤ)的ELISA法,评估其对侵袭性曲霉病(IA)的早期诊断价值。方法用重组烟曲霉DPPⅤ肽段作为包被抗原,建立检测血清中抗DPPⅤ的ELISA法,检测105例IA患者、200例非IA患者及200例健康人血清中抗DPPⅤ水平,确定cut off值,考查方法的精密度和特异性。部分IA患者抗DPPⅤ结果与抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)抗体(抗TR)检测和曲霉半乳甘露聚糖(GM)检测结果对比,评价其临床应用价值。结果以建立的ELISA法检测吸光度(A)值为6.688、0.709的2份抗DPPⅤ抗体阳性血清,批内变异系数(CV)为4.1%和8.0%,批间CV为7.1%和10.7%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率>90%。以A值0.542为cut off值,对IA诊断的敏感性为66.7%,特异性为90.7%。非中性粒细胞缺乏的IA患者抗DPPⅤ阳性率(75.3%,55/73)高于中性粒细胞缺乏的IA患者(46.9%,15/32),差异有统计学意义(χ2=8.11,P<0.05);92例IA患者血清抗DPPⅤ、抗TR和GM测定总阳性率分别为63.0%、60.9%和73.9%,差异无统计学意义(P>0.05);中性粒细胞缺乏的IA患者GM阳性率(89.7%)显著高于抗DPPⅤ、抗TR的阳性率(41.4%和34.5%),χ2分别为14.96、18.75,P均<0.01。抗DPPⅤ与抗TR联合检测阳性率达到82.6%,抗DPPⅤ、抗TR和GM试验三者联合检测的阳性率可提高到96.7%。结论检测抗DPPⅤ抗体的ELISA法精密度和特异性较好,对侵袭性曲霉感染具有潜在的辅助诊断价值,联合多个指标检测可提高诊断的敏感性。; 韩丹丹李芳秋史利宁张国勇李伟胡毓安; 关键词：侵袭性曲霉病烟曲霉二肽基肽酶间接酶联免疫吸附试验

白念珠菌1,6-二磷酸果糖醛缩酶定量检测方法的建立及其在侵袭性念珠菌感染小鼠模型中的应用: 目的建立双抗体夹心ELISA 定量检测白念珠菌1,6-二磷酸果糖醛缩酶(fructose-1,6-bisphosphatealdolase,Fba),获得不同免疫状态侵袭性念珠菌感染(IC)小鼠Fba 的感染动力学资料...; 胡毓安李芳秋史利宁李伟张国勇韩丹丹廖红年娜

白色念珠菌H3K4甲基转移酶N端肽段抗体的ELISA检测方法建立: 2013年; 目的建立检测人血清中抗白色念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段（N—terminal region of histone 3 lysine 4 methyhransferase，Setl-208p）IgG类抗体的ELISA方法，评估其在侵袭性念珠菌病（invasive candidiasis，IC）患者中的早期诊断价值。方法收集IC患者（105例）、定植患者（37例）、细菌感染患者（25例）、其他真菌感染患者（10例）以及健康体检者（200例）血清，用Setl-208p作为包被抗原，血清1：500稀释，以羊抗人IgG-HRP为二抗，测定人血清中相应的抗Setl-208p抗体水平，确定cut-off值并考查方法的敏感度、特异度和准确度。结果以重组Setl-208p抗原建立的ELISA法精密度良好，批内变异系数（coefficient of variation，CV）为5．5％，批间CV为10．4％。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为91．8％，根据ROC曲线，选择吸光度（absorbance，A）值0．40作为cut off值，对IC的诊断敏感度为79．2％，特异度为90％，且与细菌感染及其他真菌感染病人（如曲霉）无非特异交叉反应。此外，IC患者中抗Setl-208p抗体阳性率（76．1％，80／105）显著高于念珠菌定植者抗Setl-208p抗体阳性率（32．4％，12／37）（χ^2=22．9，P〈0．01）。结论建立了检测抗白念珠菌抗Setl-208p抗体的ELISA法，在IC早期诊断中具有潜在应用价值。; 孔倩倩马春芳蔡迁廖红韩丹丹史利宁李芳秋; 关键词：念珠菌 ELISA 血清学诊断

抗烯醇化酶抗体与(1-3)-β-D-葡聚糖检测诊断侵袭性念珠菌病的临床比较被引量：7: 2014年; 目的比较抗烯醇化酶抗体(抗-Eno)检测与(1-3)-β-D-葡聚糖(BG)检测对侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的诊断价值。方法留取临床为诊断IC而送检BG测定的患者血样,用ELISA法测定抗-Eno抗体,以真菌培养结果为基础,分析比较两种血清学方法诊断IC的效能。结果 210例患者为研究对象。15例患者经念珠菌培养确诊IC,确诊感染率7.1%;BG阳性54例,阳性率为25.7%;抗-Eno阳性33例,检出阳性率为15.7%。抗-Eno和G试验诊断IC感染的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为46.7%、86.7%、21.2%、95.5%和33.3%、74.9%、9.3%、93.6%。两种血清学方法联合检测,敏感性提高至66.7%。结论抗-Eno对IC的诊断性能优于G试验;联合两种血清学方法,能有效提高敏感性。; 廖红李芳秋张国勇李伟韩丹丹刘倩; 关键词：侵袭性念珠菌病

重组烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ片段的原核表达被引量：1: 2013年; 目的筛选抗原性强的烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ(dipeptidyl peptidasesⅤ,DPPⅤ)肽段并进行原核细胞表达。方法通过生物信息学分析技术,从DPPⅤ全长序列中选取抗原决定簇密集的片段,采用生物合成和PCR技术,获得其肽段相应的DNA序列,并克隆至测序载体;DNA测序验证后构建重组表达质粒,转染原核表达宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后用Talon亲和层析柱纯化;western blot分析产物免疫反应性。结果 DPPⅤ19～144p及DPPⅤ145～447p在大肠埃希菌中均以包涵体形式表达,DPPⅤ19～447p以可溶性蛋白质形式表达。western blot结果表明筛选出的DPPⅤ肽段均可与侵袭性曲霉病(IA)患者血清发生抗原抗体反应。结论成功表达烟曲霉二肽基肽酶不同抗原决定簇分布的3个肽段,且重组片段均具有良好免疫反应性。; 韩丹丹史利宁李芳秋胡毓安廖红李伟张国勇; 关键词：烟曲霉肽段原核表达

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韩丹丹

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