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抗KDR单链抗体阻断VEGF/KDR通路的活性研究被引量：1: 2014年; 为了阻断VEGF与KDR的结合,抑制VEGF结合KDR后介导的内皮细胞迁移和血管新生,实验室已经从全人源噬菌体展示抗体库中筛选得到几种抗KDR的单链抗体,从中挑选一种亲和力较高的抗体命名为AK506进行周质表达,纯化后经SDS-PAGE鉴定,可获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升发酵液1 mg。经表面等离子共振技术测定,AK506与KDR胞外区相互作用的平衡解离常数为7.99×10-9nmol/L。细胞ELISA分析显示,AK506与内皮细胞表面膜受体KDR的结合呈剂量依赖性。采用细胞划痕损伤修复实验和鸡胚尿囊膜实验证明,AK506可以显著抑制内源性VEGF诱导的血管内皮细胞迁移和新血管生成,具有进一步研究开发用于抗肿瘤血管生成治疗的潜力。; 李海鑫陈治国陈晨金海珍张娟王旻; 关键词：血管内皮生长因子受体2 单链抗体

重组人组织因子的表达纯化及复性研究: 2016年; 利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,h TF),并进行纯化及复性研究。构建插入目的基因的p ET28a(+)-h TF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导其表达,菌体经超声裂解、离心收集包涵体,用8 mol/L尿素溶解包涵体、Ni-NTA纯化,采用透析复性和柱上复性两种方式获得复性的重组人HTF。柱上复性和透析复性均获得具有生物活性的重组人h TF,但柱上复性的复性率为72%,明显高于透析复性的复性率16%。成功构建高表达人重组h TF的工程菌,通过柱上复性获得高纯度具有生物活性的重组人h TF蛋白,为h TF的研究奠定了基础。; 徐艺菲李佳萌齐永陈红霞潘英李素芹李素梅陈晨王新国张玉彬李越希; 关键词：纯化复性

肺炎支原体MP559融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定: 采用生物信息学软件对肺炎支原体表面膜蛋白Pl,P116及P30进行抗原表位分析,筛选其中抗原表位较富集的优势抗原片段作为目的蛋白；优化筛选的基因序列,使其能在合适的原核表达载体中进行高效表达.构建重组质粒pET28a(+...; 陈晨; 关键词：肺炎支原体融合蛋白原核表达蛋白纯化抗血清制备

腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性被引量：1: 2017年; 目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。; 王新国齐永潘英李素芹李佳萌陈红霞李素梅陈晨徐艺菲张玉彬李越希; 关键词：人腺病毒抗原表位嵌合蛋白抗原性免疫原性

双羰基还原酶催化的两步羰基还原反应(英文)被引量：1: 2010年; 双羰基还原酶(diketoreductase)选择性催化β,δ-二羰基酯底物还原生成相应的双羟基产物,其对映体过量(ee)和非对映体过量(de)均大于99.5%。为阐明该独特酶促反应的催化机制,研究了双羰基还原酶催化的双羰基反应过程及其反应特征。通过反应历程监测发现在双羰基还原及其逆反应过程中均生成两个单羟基中间产物。这两种单羟基中间产物经反相C18色谱法分离纯化,并采用手性分析鉴定了其立体化学特征。两个中间产物可以作为双羰基还原酶的底物被选择性还原,但具有不同的反应速率。反应温度和底物浓度对中间体的形成和消失有较大的影响。此外,初级稳态动力学显示两个中间产物的消除反应速率也不尽相同。结果表明,双羰基还原酶催化的双羰基还原是一个伴有中间产物的生成与消失的两步反应过程,并且反应速率有所不同。; 吴旭日陈晨刘楠陈依军

沙门氏致病菌标准阳性模板的构建及实时荧光定量聚合酶链式反应检测被引量：1: 2014年; 目的:构建重组质粒作为标准阳性模板,建立食品中沙门氏致病菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法。方法:以致病性沙门氏菌inv A基因上特异性片段为目标,设计并合成引物和Taq Man探针,将目标片段连接到PGM-T载体上构建重组质粒,建立实时荧光定量检测体系,并考察方法的灵敏性、特异性、重复性和准确性。结果:构建出致病性沙门氏菌特异性基因片段的重组质粒,能够作为实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法的标准阳性模板,标准曲线方程为Y=-3.151 lg X+42.86(R2=0.999),灵敏度80拷贝反应体系,能特异区分沙门氏菌与类型的细菌,同时,批内和批间的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。结论:本方法能够实现对食品中致病性沙门氏菌进行定性定量检测。; 陈晨邵彪陈刚黄伟东; 关键词：TAQMAN探针

基因多态性与慢性乙肝患者对α干扰素应答的相关性分析被引量：2: 2018年; 乙型肝炎（hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的传播广、治愈难、危害性大的流行性肝病之一。每年都有约50万人死于HBV长期感染所导致的肝硬化和肝癌。α干扰素（interferon alpha,IFN-α）是治疗慢性乙型肝炎的一线用药,过往研究表明,乙肝患者对IFN-α治疗应答存在差异,乙肝病毒基因型、谷丙转氨酶（ALT）水平等都会影响IFN-α的治疗效果。; 陈晨童梅姚文兵姚文兵; 关键词：慢性乙肝患者干扰素应答基因多态性血清转换 CHB Α干扰素

海洋放线菌WBF16活性代谢产物色霉素A_2发酵条件优化被引量：8: 2010年; 链霉菌属假浅灰链霉菌的新变种(WBF16)是分离自山东省威海市毕家疃海域的一株放线菌。为提高其代谢产物色霉素A2的产量,对其发酵条件进行优化,单因素和正交试验结合确定了其产生色霉素A2的优化培养基为:可溶性淀粉20.0 g,黄豆粉20.0 g,葡萄糖10.0 g,海盐25 g,蒸馏水1 000 mL。发酵条件为:发酵温度28℃,起始pH7.0,接种量为5%,发酵时间为7 d。优化后发酵液中色霉素A2为优化前的2.1倍,达到1.23 mg/L。; 陈晨陆园园刘承伟邢莹莹奚涛; 关键词：海洋放线菌抗肿瘤活性

埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2016年; 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均>90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。; 李素梅齐永潘英李素芹李佳萌徐亭亭陈晨王新国徐艺菲李越希; 关键词：VP1蛋白原核细胞多克隆抗体

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陈晨

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