耿艳艳
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 染色体外同源重组结合细胞质注射途径研制转基因小鼠
- 2004年
- 以绵羊 β 乳球蛋白基因 (β Lactoglobulin ,β LG)为转基因表达框架 ,将人G CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor,hG CSF)基因与报告基因 增强型绿色荧光蛋白 (EnhancedGreenFluorescenctProtein ,EGFP)基因作为双表达单元拼接到 β LG基因的第一外显子处 ,并在G CSF基因两侧引入同源重组位点loxP、lox2 2 72 ,将打靶基因表达构件 β LG hG CSF IRES EGFP(总长 9 3kb)分为两段进行构建 ,片段Ⅰ (长 5 9kb)与片段Ⅱ (长 5 6kb)两段重叠部分为 2 2kb。向小鼠受精卵细胞质共注射构件片段Ⅰ、Ⅱ和NLS(核定位信号 ) 3个基因片段。对仔鼠进行整合与表达的检测。PCR Southern杂交检测结果表明 ,片段Ⅰ的整合率为 6 2 3% (86 /138) ,片段Ⅱ的整合率为 5 4 3% (75 /138) ,片段Ⅰ、Ⅱ共整合 (包括两片段分别整合和染色体外同源重组两种情况 )的小鼠为 6 2只 ,整合率为 4 4 9% (6 2 /138) ,其中在双阳性转基因小鼠中发生染色体外同源重组的几率为 80 6 % (5 0 /6 2 )。RT PCR Southern检测了 10只发生染色体外同源重组的转基因雌性小鼠 ,hG CSF基因的表达率为 90 % (9/10 ) ,EGFP基因的表达率为 10 0 % (10 /10 ) ,通过对其乳汁紫外吸收光谱的检测 ,EGFP基因的表达率为 5 0 % (5 /10 )。
- 耿艳艳端家忠李勇宁涛张靖溥
- 关键词：转基因小鼠Β-乳球蛋白基因EGFP
- 染色体外同源重组与细胞质注射技术研制转基因动物
- 转基因动物技术与动物体细胞克隆技术的结合,开创了生物高新技术的新领域.转基因动物作为一种生物反应器,尤其是乳腺生物反应器,仍为高新技术领域的研究热点.其中研究的焦点集中在基因定位整合(打靶)、转基因途径的有效性、转基因动...
- 耿艳艳
- 关键词：转基因小鼠Β-乳球蛋白基因EGFP人粒细胞
- 文献传递
