祁军
- 作品数：22 被引量：88H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- McCune-Albright综合征1例
- 2009年
- 祁军陈安民郭风劲
- 关键词：MCCUNE-ALBRIGHT综合征骨纤维结构不良阴道不规则流血内分泌异常发育缓慢身材矮小
- 骨骺干细胞复合多孔β-磷酸三钙支架体外培养的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的 观察免疫磁珠分选的骨骺干细胞（PSCs）诱导后向软骨特性方向分化并与多孔β-磷酸三钙（β-TCP）材料复合体外培养,探讨其构建组织工程化骺板的可行性.方法 免疫磁珠分选系统分离纯化PSCs体外培养并用免疫细胞化学方法对其进行鉴定,诱导其向软骨细胞特性方向分化,免疫荧光染色及甲苯胺兰染色检测诱导后细胞Ⅱ型胶原及软骨特征基质表达情况.诱导后的PSCs与多孔β-磷酸三钙支架复合培养后扫描电镜观察其粘附增殖及形态学改变.结果 免疫磁珠系统分选的PSCs体外培养增殖迅速,阳性细胞率超过90％,诱导后的PSCsⅡ型胶原免疫荧光染色及甲苯胺兰染色阳性.细胞接种支架后在多孔β-磷酸三钙支架表面生长增殖良好并分泌细胞外基质.结论 免疫磁珠分选系统分离的PSCs经诱导后向软骨细胞功能方向分化,与多孔β-磷酸三钙支架复合有望构建组织工程化骺板.
- 谢虎郭风劲张继平李永忠孙淑珍祁军
- 关键词：骨骺干细胞Β-磷酸三钙骺板
- 壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架的生物相容性研究被引量：7
- 2008年
- 制备壳聚糖/纳米羟基磷灰石(CS/nHA)分层复合支架,对其进行细胞毒性评价。分离培养大鼠软骨细胞接种于支架,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长情况。动物皮下埋植试验观察其组织相容性。实验结果证实壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架具有良好的生物相容性,有望成为较好的骨软骨组织工程支架。
- 祁军陈安民郭风劲孙淑珍谢柏臻张伟凯张树威
- 关键词：壳聚糖纳米羟基磷灰石生物相容性
- 动态压应力促进软骨前体干细胞Sox9和细胞外基质表达的实验研究被引量：3
- 2016年
- 目的：研究间断性动态压应力对体外培养的大鼠软骨前体干细胞Sox9及软骨特异性细胞外基质表达的影响。方法细胞免疫磁珠分选并体外培养大鼠软骨前体干细胞（PSC），使用自行设计制备的细胞压力装置对细胞进行间断性（1 d刺激12 h，分别1 d，3 d和7 d）的压应力刺激（90 mmHg，1 mmHg=0.133 kPa），未刺激组为对照组，采用荧光实时定量聚合酶链反应检测各组细胞的Sox9和软骨特异性细胞外基质（Ⅱ型胶原）的基因表达情况，Western印迹检测细胞Sox9和Ⅱ型胶原蛋白表达水平并进行分析。结果在动态压应力刺激下，软骨前体干细胞各时间点Sox9和Ⅱ型胶原的基因表达水平明显增加并高于对照组（P〈0.05）；压力刺激1 d，3 d和7 d后，于对照组相比，其Sox9和Ⅱ型胶原mRNA表达水平分别增加了约1.9倍和2.1倍，3.5倍和3.4倍以及4.6倍和4.3倍。1 d压力组Sox9和Ⅱ型胶原蛋白表达与对照组无明显差异（P〉0.05），3 d和7 d时间点的蛋白表达增加并高于对照组（P〈0.05）；Sox9和Ⅱ型胶原基因和蛋白表达水平都随着压应力刺激时间增加而增加。结论间断性动态压应力可以明显增加大鼠软骨前体干细胞Sox9和Ⅱ型胶原的表达，并可能会促进软骨前体干细胞向软骨细胞的分化。
- 李昆朋张雯李忠马金柱祁军杜宇郭风劲
- 关键词：细胞外基质干细胞
- 短周期动态压应力通过Ca^2＋通道调控生长板软骨细胞Sox9及Ⅱ型胶原表达被引量：1
- 2016年
- 目的研究短周期动态压应力对体外培养的大鼠生长板软骨细胞Sox9、Ⅱ型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响，探讨L-型钙离子通道是否参与该力学信号转导过程。方法分离并体外培养两周龄SD大鼠生长板软骨细胞，传代后的生长板软骨细胞分为4组：对照组、单纯压应力组、硝苯地平组及压应力联合硝苯地平组。其中对照组不施加力学及药物干预，单纯压应力组通过四点弯曲力学加载仪予以周期性压应力（2 000 με，1.0 Hz）干预，硝苯地平组添加L-型钙离子拮抗剂硝苯地平（10 μmol/L）但不施加力学干预，压应力联合硝苯地平组添加硝苯地平（10 μmol/L）并施加周期性压应力干预（2000 με，1.0 Hz）。实验处理6 h，运用荧光定量PCR及Western blot方法检测各组细胞的Sox9、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达情况。各组细胞行Fluo-3/AM染色，激光共聚焦显微镜观察并分析细胞内钙离子的荧光强度。使用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果单纯压应力组生长板软骨细胞的Sox9的mRNA与蛋白表达水平较对照组分别增加（82.97±24.95）%和（79.67±26.03）%，差异有统计学意义（P〈0.05）；Ⅱ型胶原的mRNA与蛋白表达水平较对照组分别增加（118.93±34.40）%和（95.93±29.87）%，差异有统计学意义（P〈0.05）。压应力联合硝苯地平组生长板软骨细胞的Sox9、Ⅱ型胶原的mRNA与蛋白表达水平低于单纯压应力组（P〈0.05），但高于硝苯地平组（P〈0.05）。激光共聚焦显微镜能清晰观察到细胞内钙离子染色后产生的荧光，但各组平均荧光强度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论适当的短时间周期性压应力能上调生长板软骨细胞Sox9及Ⅱ型胶原mRNA与蛋白的表达水平，钙离子通道可能参与该力学信号转导过程。
- 张津铭陈安民吕正涛李兴艳郭风劲祁军
- 关键词：软骨细胞钙通道
- 不同浓度血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的诱导效果比较被引量：6
- 2008年
- 背景:血清成分复杂,其中不仅存在促细胞生长因子,同时也存在细胞生长抑制因子,因此合适的血清浓度对于体外培养细胞的增殖和分化至关重要。目的:比较不同浓度的胎牛血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完成。材料:纯系清洁级新生24h内的SD大鼠8只,用于制备骨骺干细胞。胎牛血清为Gibco公司产品。方法:免疫磁珠分离纯化FGFR-3阳性的骨骺干细胞,稳定传至第3代后,分别用含1.25%,2.5%,5%,10%胎牛血清的软骨诱导培养基进行干预,诱导14d。主要观察指标:BrdU-ELISA法检测细胞增殖活性。应用免疫荧光染色和RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原的表达。结果:骨骺干细胞向软骨细胞诱导14d后,10%胎牛血清组细胞增殖活性显著高于1.25%,2.5%,5%胎牛血清组(P<0.05);10%胎牛血清组Ⅱ型胶原免疫荧光染色阳性程度及Ⅱ型胶原mRNA的表达均明显强于其他3组。结论:含10%胎牛血清的软骨诱导液更有利于骨骺干细胞向软骨细胞方向分化。
- 张树威陈安民宋登新谢伯臻王江祁军易磊郭风劲
- 关键词：骨骺干细胞血清浓度分化软骨细胞
- 高迁移率族蛋白1在骨关节炎滑膜细胞中的表达及意义被引量：4
- 2015年
- 目的比较OA与正常膝关节滑膜细胞中高迁移率族蛋白1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)的差异,探讨HMGB1在OA中的作用。方法取OA与正常膝关节滑膜组织,采用组织块培养法分离培养关节滑膜细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫荧光染色、免疫组织化学染色以及Western blot检测比较两种滑膜细胞HMGB1表达差异。构建HMGB1小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)的真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 si RNA,转染至OA滑膜细胞中(si RNA转染组),以Pgenesil-1质粒转染至OA滑膜细胞(空载体转染组),以OA滑膜细胞(未转染组)作为对照。Western blot检测各组OA滑膜细胞中HMGB1蛋白的表达,ELISA法检测各组滑膜细胞培养上清液中IL-1β及TNF-α含量。结果原代培养的OA与正常膝关节滑膜细胞呈长梭状,为成纤维细胞样细胞。免疫组织化学染色及免疫荧光染色观察示,OA滑膜细胞中HMGB1以细胞质分布为主、细胞核中较少,而正常滑膜细胞则相反。Western blot检测示,OA滑膜细胞中HMGB1高表达,表达量为0.687±0.025,显著高于正常滑膜细胞的0.172±0.030(t=32.159,P=0.000)。酶切鉴定显示成功构建si RNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 si RNA。Western blot检测显示,si RNA转染组HMGB1蛋白表达为0.134±0.048,显著低于空载体转染组的0.581±0.032及未转染组的0.514±0.069(P<0.05)。ELISA法检测si RNA转染组IL-1β及TNF-α含量均显著低于空载体转染组及未转染组(P<0.05)。结论膝关节滑膜细胞中HMGB1表达的上调和表达位置的改变(从细胞核移位至细胞质)与OA密切相关,应用si RNA技术抑制HMGB1表达可明显降低OA滑膜细胞分泌IL-1β和TNF-α的能力,延缓OA的炎性反应。
- 宋登新曹云丁徐何小文黄涛赵毅祁军
- 关键词：骨关节炎滑膜细胞小干扰RNA高迁移率族蛋白1
- 下调Ezrin表达对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响被引量：4
- 2008年
- 目的研究Ezrin蛋白对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响。方法采用前列腺癌PC-3细胞系作为研究对象,针对Ezrin蛋白的编码序列设计小干扰RNA片段,重组为shRNA表达载体转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆,RT-PCR和Western blot分别检测Ezrin在基因和蛋白水平表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化。结果PCR和Western blot显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用,转染后的前列腺癌细胞生长速度明显减慢,细胞周期显示处于分裂期的细胞比例由(24.58±4.23)%下降到(18.65±2.21)%,处于G1期的细胞数量则由(58.69±3.48)%上升到(66.54±4.13)%。穿过人工基底膜的细胞数量也由(38.6±5.4)减少为(24.5±2.7)(P<0.01)。结论Ezrin对于前列腺癌细胞的增殖和运动能力有重要影响,可能成为肿瘤治疗的重要靶点。
- 谢柏臻陈安民郭风劲宋登新朱波祁军陈超
- 关键词：EZRINSHRNA前列腺癌
- LY294002抑制P13K／Akt通路对人骨肉瘤类肿瘤干细胞增殖的影响被引量：12
- 2011年
- 目的分离鉴定人骨肉瘤类肿瘤干细胞并探讨LY294002对其增殖的作用。方法采用无血清培养法从人骨肉瘤MG-63细胞中分离培养人骨肉瘤类肿瘤干细胞，免疫组织化学检测干细胞表面标志CD44及CD133的表达，CCK-8法观察加入不同浓度磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）抑制剂LY294002（5、10和20umol／L）后对其增殖的影响，并用Westernblot检测总蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的变化。结果无血清培养法可用于分离人骨肉瘤类肿瘤干细胞，人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44及CD133呈阳性表达。LY294002可显著抑制其增殖，细胞生长抑制率平均分别为12．54％、14．92％和19．91％（P〈0．05），作用可能与通过抑制P13K进而抑制Akt的磷酸化有关。结论LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞的增殖具有抑制作用。
- 宫晨郭风劲秦亮祁军尹德龙姚斌
- 关键词：骨肉瘤肿瘤干细胞P13K/AKT通路
- 大鼠骨骺干细胞免疫纯化和Sox9基因真核表达载体的克隆构建被引量：4
- 2008年
- 目的:Sox9基因是一种重要的早期胚胎发育相关基因,是前软骨细胞浓聚所必需的因子,其促进成骨但同时可以抑制骨骺细胞的终末分化,以延长软骨发育成熟过程,延迟软骨发育,抑制软骨细胞凋亡,有利于骨骼在生长发育阶段形成复杂的形状和结构。从骨骺干骨细胞中克隆得Sox9基因,并构建其真核表达载体。方法:实验于2007-03/07在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料:出生<24h纯系清洁级新生SD大白鼠,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:参考游洪波等方法,采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的大鼠骨骺干细胞,以FGFR-3抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定。提取骨骺干细胞总RNA,以RT-PCR方法获得Sox9基因的全长,插入pGEM○R-TEasyVectorSystem克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pEGFP-IRE2构建重组复合质粒。结果:免疫组织化学证实,显微取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞。从骨骺干细胞中提取的总RNA经电泳可得28s、18s和5s共3条带,测吸光度值为0.2635,A260/A280为1.8741,说明提取的总RNA完整性较好,纯度高,符合RT-PCR的要求。PCR产物经电泳可得到约2000bp的特异性条带,与预期大小一致。经限制性内切酶酶切图谱分析DNA序列测定证实的目的基因已经插入重组质粒,成功地构建了Sox9质粒。结论:成功地分离纯化了骨骺干细胞,克隆出Sox9基因并构建了Sox9基因的真核表达载体,为进一步研究Sox9的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础。
- 张伟凯陈安民郭风劲黄晖祁军
- 关键词：骨骺干细胞SOX9基因质粒
