王钧
- 作品数：9 被引量：38H指数：4
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胃癌腹膜高转移潜能细胞系的建立及其生物学特性被引量：10
- 2006年
- 目的利用人胃癌细胞系(GC9811)在裸小鼠体内反复接种建立一株具有腹膜高转移潜能的胃癌细胞系(GC9811P),并对其生物学特性进行观察,为实验研究提供模型。方法采用胃癌细胞系(GC9811)在裸小鼠腹腔内反复接种,行体外培养腹膜转移灶筛选高转移亚系,绘制细胞生长曲线,光镜、电镜下观察细胞形态,利用流式细胞仪、染色体分析等方法,研究该高转移亚系的细胞周期、增殖、染色体核型等生物学特性。结果母本细胞系GC9811腹膜转移形成率为33.3%(3/10),而GC9811P腹膜转移形成率为100%。两种细胞系腹膜结节组织学形态大体相似。增殖速度较母系加快。细胞周期分析G1期53.5%、G2期12.5%、S期37.1%。且遗传学特性包括染色体形态仍为人类核型,众数维持在104～126之间,占70%。结论具有腹膜高转移的胃癌细胞系GC9811P的建立及裸小鼠体内实验模型,为研究胃癌腹膜转移机制及探索新的治疗途径提供了极为有用的工具。
- 白飞虎李来生郭新宁杨力翟惠虹聂勇战王钧吴开春樊代明
- 关键词：胃癌腹膜转移细胞系
- 人胃癌腹膜高转移潜能细胞系的基因表达分析被引量：1
- 2010年
- 目的:比较人胃癌细胞系与其腹膜高转移潜能细胞系的基因表达谱,寻找与胃癌腹膜转移相关的基因表达改变。方法:采用基因芯片技术,比较遗传背景相同但转移力有明显差异的两个细胞系GC9811和GC9811-P,分析其基因表达谱的差异。选取部分基因行RT-PCR进一步验证基因芯片的准确性。结果:在11901个候选基因中,筛选出248个(2.1%)差异表达基因。GC9811-P与GC9811相比,表达上调的基因有218个,下调的有30个,包括DNA合成和错配修复基因如H3F3A、细胞增生基因、蛋白合成与修饰基因、信号传导基因和离子通道与运输蛋白相关基因等。半定量RT-PCR对PTEN、S100A4和ZNRD1基因检测结果验证了基因芯片数据的可靠性。结论:胃癌腹膜转移是多基因作用的综合结果,筛选的基因对预测胃癌腹膜转移和抗转移干预措施可能有指导意义。
- 白飞虎杨力王钧惠亮亮苗雨吴开春樊代明
- 关键词：细胞系腹膜转移
- 与胃癌腹膜高转移细胞表面受体特异性结合的多肽片段的研究被引量：5
- 2006年
- 目的利用噬菌体随机肽库筛选与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽,为肿瘤细胞的靶向性治疗筛选药物和载体。方法利用噬菌体随机十二肽库对人胃癌细胞系GC9811和其腹膜高转移亚系GC9811P进行3轮差异筛选、富集,获得与胃癌腹膜高转移细胞亲和的噬菌体克隆。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其与GC9811P和GC9811细胞的亲和力,提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定,获得与胃癌腹膜高转移细胞亲和的多肽序列并予合成。利用荧光染色和流式细胞仪鉴定噬菌体克隆和合成肽与胃癌腹膜高转移细胞的体内外的结合特异性。结果筛选及ELISA结果显示得到与GC9811P细胞特异性结合并内化入癌细胞的噬菌体克隆,测序结果示45%的被检噬菌体展示相同的多肽序列SMSIASPYIALE,推测SMSI是胃癌腹膜高转移细胞特异性结合肽的基序。合成的多肽与细胞共孵育48h或多肽药物浓度达5μmol/L时,显示出明显的结合能力。平均荧光强度分别为17.19±0.42和16.89±0.31(每组实验为3个样本均值),与对照组无关肽PC的平均荧光强度(4.33±0.53)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。合成的多肽与细胞共孵育72h或多肽药物浓度达10μmol/L时细胞的平均荧光强度为23.58±0.71和24.95±0.15(每组实验为3个样本均值),与对照组无关肽PC的平均荧光强度(4.16±0.24)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠体内试验说明合成的多肽可与GC9811P细胞成瘤的组织结合而不与GC9811及其他细胞成瘤的组织结合。结论筛选噬菌体随机肽库获得能与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽序列SMSIASPYIALE;合成的多肽与胃癌腹膜高转移细胞有特异亲和力,为进一步临床胃癌早期腹膜转移诊断和治疗提供高度特异性和敏感性的理想标志物和靶向载体。
- 白飞虎王钧赵澎涛曹姗姗雷婷李颖吴开春樊代明
- 关键词：噬菌体肽库
- 胃癌组织中COX-2和VEGF表达及其相关性研究被引量：10
- 2005年
- 目的探讨环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growthfactor,VEGF)在人胃癌组织中表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测53例人胃癌组织中COX-2、VEGF和CD34的表达,并以40例正常胃粘膜标本作为对照。对CD34阳性血管进行微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数。对COX-2和VEGF的表达采用半定量计分法判定,并结合临床资料进行统计学分析。结果53例人胃癌组织中,COX-2表达阳性者44例,阳性率为83.0%;VEGF表达阳性者45例,阳性率为84.9%。COX-2表达与VEGF表达相关显著(P<0.05)。并且,COX-2和VEGF的表达与TNM分期(P<0.05,P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01,P<0.05)和远处转移(P<0.01,P<0.05)相关。COX-2/VEGF同高表达组中MVD值(79.5±25.8)高于COX-2/VEGF同低表达组中的MVD值(45.0±13.9),差异非常显著(P<0.01)。结论胃癌组织中COX-2与VEGF共表达,并相互协同促进肿瘤血管生成和转移。
- 唐红卫王钧孙力军宁晓喧谢华红毕锋吴开春樊代明
- 关键词：胃癌环氧合酶-2血管内皮生长因子血管生成
- 人血管生成素-1对血管内皮细胞增殖及凋亡影响的研究
- 2004年
- 目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin—1,Ang-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilican vein endothelia cell,HU-VEC)增殖和凋亡的影响,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制。方法:构建.pcDNA3.1-V5-HisC-Ang-1真核表达载体,并瞬时转染293细胞;取新生儿脐带经胶原酶消化等方法分离培养HUVEC;分别通过MTT比色和细胞计数法,分析Ang-1瞬时转染上清对HUVEC增殖的影响;通过流式细胞仪分析在血浆饥饿实验条件下,Ang-1对HUVEC凋亡的影响。结果:成功克隆了Ang-1基因,构建了其正义真核表达载体,并在293细胞中瞬时表达;成功进行了HUVEC的原代分离及传代培养;MTT法检测HUVEC增殖结果:只加培养液组、加空载体转染上清组、加Ang-1转染上清组HUVEC OD490值分别为0.36±0.11,0.40±0.03,0.68±0.10(P<0.05);细胞计数法检测结果依次为:(10.13±2.06)×104,(8.7±1.73)×104,(15.03±1.98)×104(P<0.05)。流式细胞仪检测HUVEC凋亡率依次为:21％,19％和6％。结论:Ang-1能显著促进血管内皮细胞体外增殖,抑制血浆饥饿时HUVEC的凋亡。
- 王钧吴开春张德新幺立萍樊代明
- 关键词：血管生成素血管生成凋亡脐静脉内皮细胞
- 人血管生成素-1基因转染对胃癌细胞体内致瘤力及血管生成的影响被引量：7
- 2005年
- 目的 研究人血管生成素 1 (Ang1 )基因转染人胃癌细胞系SGC790 1后 ,对肿瘤细胞生物学特性以及对小鼠体内致瘤力和血管生成的影响 ,探讨其在胃癌发生及血管生成中的作用。方法构建重组正、反义Ang1真核表达载体 ,采用脂质体转染法 ,将重组载体转染人胃癌细胞系SGC790 1 ,分别得到正、反义载体稳定转染的细胞株 7Ang1 +和 7Ang1 - ,并以半定量PCR及Westernblot方法鉴定转染效果。以MTT比色试验绘制生长曲线 ;以流式细胞仪检测细胞周期分布。通过裸鼠成瘤实验 ,比较转染前后小鼠体内成瘤能力的差别 ,并检测肿瘤组织微血管密度 (MVD) ,判定血管生成程度。结果 7Ang1 -组细胞Ang1在蛋白及mRNA水平的表达均下调。体内成瘤实验结果显示 ,空载体对照组、7Ang1 +组和 7Ang1 -组瘤体的平均重量 ( x±s)分别为 6 2 4 .0 0± 77.78,6 5 2 .6 7± 1 32 .0 7和2 93.0 0± 95 .5 4 ,7Ang1 -组的细胞成瘤性显著低于 7Ang1 +组和空载体对照组 (P <0 .0 1 )。空载体对照组、7Ang1 +组和 7Ang1 -组肿瘤组织的MVD( x±s)分别为 8.4 4± 1 .33,8.78± 1 .92和 6 .0 0± 1 .73,7Ang1 -组细胞的血管生成显著减少 (P <0 .0 1 )。结论 Ang1在胃癌形成和发展中可能通过诱生血管起促进作用 ,通过反义技术可部分阻断这种作用。
- 王钧吴开春张德新幺立萍樊代明
- 关键词：人血管生成素-1基因转染SGC7901人胃癌细胞MRNA水平脂质体转染法
- 抗转移多肽对人胃癌腹膜高转移细胞侵袭转移的抑制作用被引量：3
- 2006年
- 目的研究多肽PⅢ对人胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P腹膜转移的作用。方法利用体外细胞基质粘附和体外细胞侵袭实验,分别检测多肽PⅢ对GC9811-P细胞粘附及侵袭能力。体内实验采用胃浆膜下裸鼠原位接种转移模型,观察多肽PⅢ对胃癌细胞GC9811-P腹膜转移能力的影响。裸鼠分多肽PⅢ治疗组、0．9%氯化钠溶液对照组各12只,荷瘤鼠衰竭处死后观察腹膜转移率、转移灶数目及原发瘤质量。结果40μg多肽PⅢ孵育2h时粘附抑制率达86．3%,多肽PⅢ与GC9811-P细胞共同孵育对层粘连蛋白粘附的抑制作用呈时间依赖性。多肽PⅢ与GC9811-P细胞共孵育48h后侵袭抑制率达81．4%。将肿瘤细胞原位接种于裸鼠后给予多肽PⅢ治疗,与对照组比较腹膜转移灶的数目分别为(3．2±6．5)个和(26．3±5．2)个,腹膜转移率明显下降(P＜0．01)；而原发瘤质量分别为(1．9±1．2)g和(2．1±1．0)g,两者间差异无统计学意义(P＞0．05)。结论多肽PⅢ明显抑制人胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P粘附、侵袭和腹膜转移作用。
- 白飞虎王钧高娟韩霜夏琳靳斌翟惠虹吴开春樊代明
- 关键词：胃肿瘤肿瘤转移腹膜多肽
- 重组小鼠MIG趋化因子的高效真核表达及免疫活性测定被引量：2
- 2006年
- 目的克隆小鼠CXC趋化因子干扰素-γ诱生单核因子(MIG)并在杆状病毒表达系统中进行高效表达,进而对MIG蛋白进行纯化和活性鉴定。方法从小鼠脑组织中用RT-PCR的方法扩增出小鼠MIG基因的全长cDNA,在克隆入Bac-to-Bac杆状病毒表达载体后在High-Five昆虫细胞中进行分泌型表达;表达产物经S-Sepharose进行了纯化并进行了生化鉴定;最后对纯化的重组小鼠MIG蛋白进行了钙离子内流诱发试验和淋巴细胞趋化测定以鉴定其免疫活性。结果成功克隆了小鼠MIG基因并在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中进行了高效表达,其表达蛋白主体相对分子质量约为15 000;经过单步S-Sepha-rose纯化法就可获得纯度为85%以上的重组小鼠MIG蛋白,产量为10 mg/L;该蛋白该纯化蛋白在体外具有诱导小鼠T淋巴细胞钙离子内流和吸引、趋化小鼠脾细胞的活性。结论小鼠MIG蛋白可在杆状病毒表达系统中高产量分泌表达并可用S-Sepharose纯化法直接纯化;小鼠重组MIG蛋白具有激活、趋化淋巴细胞的生物活性;rmMIG纯化蛋白的大量制备为进一步研究小鼠MIG蛋白在炎症、免疫器官的成熟和其它疾病中的功能和作用提供了有利的工具。
- 张德新王钧杨静华Reuven Rabinovici樊代明
- 关键词：MIGCXC趋化因子杆状病毒趋化
- 人血管生成素-1基因的克隆及原核、真核表达载体的构建
- 2003年
- 血管生成素 (angiopoietin)是近年来发现的与血管生成、抑制密切相关的新分子。为研究其在肿瘤血管生成及转移中的作用 ,利用PCR技术从人胎盘组织中得到血管生成素 1基因 ,并亚克隆至pRSETC原核表达载体及pcDNA3 1 V5 HisC真核表达载体 ,成功地构建了原核及正反义真核表达载体 ,为下一步研究其对消化道肿瘤血管生成的影响打下了基础。
- 王钧吴开春张德新幺立萍樊代明
- 关键词：血管生成血管生成素聚合酶链反应
