王澜
- 作品数：13 被引量：30H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新的GFP/DNA双标记流式细胞技术被引量：3
- 2004年
- 目的 :为了检测细胞转染了带绿色荧光蛋白 (GFP)标记的融合基因后细胞周期的改变 ,以研究目的基因与细胞周期的关系 ,建立GFP/DNA双标记流式细胞技术。方法 :①以小鼠脾细胞为模型 ,以不同浓度的多聚甲醛(PFA)预固定细胞不同时间 ,再换用 70 %乙醇固定细胞 2 4h以上 ,观察不同固定方法对细胞周期检测的影响 ;②以Ad EGFP感染的Hep 2细胞为模型 ,观察不同固定方法对细胞周期、GFP阳性细胞检出率和GFP的荧光强度的影响 ;③用最佳固定方法观察转染p2 1/WAF1/CIP1 EGFP融合基因的 2 93细胞的细胞周期 ,以验证方法的可靠性。结果 :0 .5 %PFA预固定 6 0min ,再换用 70 %乙醇固定细胞 ,不影响细胞周期检测 ,而且GFP荧光强度和转染效率的检测最佳。以此方法固定细胞 ,GFP/DNA双标记流式细胞技术检测了转染 p2 1/WAF1/CIP1 EGFP融合基因的2 93细胞的细胞周期 ,可观察到p2 1表达阳性的细胞发生了G0 /G1期阻滞。结论 :优化的细胞固定方法可以有效地阻止GFP从细胞内流出 ,建立的GFP/NDA双标记流式细胞技术可以用于研究带GFP标签的基因表达蛋白与细胞周期的关系。
- 董波饶亚岚鲁茁壮王澜从玉文陈肖华张军权高荣莲王治东毛秉智
- 关键词：细胞周期流式细胞术绿色荧光蛋白基因表达转染
- 贮存温度对携带HGF基因的重组腺病毒Ad-HGF稳定性的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 :探讨不同温度对重组腺病毒Ad_HGF保存时间的影响。方法 :以含 10 %甘油的Hanks液保存Ad_HGF(携带人肝细胞生长因子基因 )、Ad_GFP(携带绿色荧光蛋白基因 ) ,用快速细胞病变 (CPE)法、ELISA方法、流式细胞仪分别检测在不同贮存温度 (- 6 0℃ ,- 2 0℃ ,4℃ ,2 5℃和 37℃ )、不同保存时间的重组腺病毒对其感染滴度、目的基因表达和转染细胞效率的影响。结果 :- 6 0℃保存最长时间 4 4个月 ,其转染效率、HGF蛋白表达、病毒滴度未见明显下降 ;- 2 0℃保存 12个月各指标未见明显变化 ;4℃冰箱保存 2个月 ,其各项指标已有所下降 ,但不是很明显 ,而保存 7个月时 ,其转染效率、HGF蛋白表达量及病毒滴度均明显下降 ;2 5℃和 37℃保存 ,除病毒滴度外 ,其余指标呈逐日下降趋势。结论 :该病毒保存于 - 2 0℃以下性能是稳定的 ,可以满足临床贮存和应用条件。
- 哈小琴王澜劳妙芬吴祖泽
- 关键词：重组腺病毒肝细胞生长因子稳定性
- 腺病毒受体及其介导基因转导的分子机制研究
- 2002年
- 腺病毒载体 (AdV)是一种重要的基因转导系统。腺病毒依两种不同的受体侵入靶细胞 :Ad纤维蛋白与CAR作用 ,介导病毒黏附细胞 ;Ad五邻体基底蛋白与整合素αvβ3 及αvβ5结合 ,促进病毒内化。靶细胞的CAR和整合素αvβ3 及αvβ5表达水平与AdV介导的基因转导效率直接相关 ,受体低表达限制AdV的转导率。动力蛋白调节Ad进入靶细胞 ,整合素聚集与肌动蛋白相关。Ad侵入靶细胞需要的信号通路包括GTP酶Pho家族成员P13K和肌动蛋白单纤维聚合。
- 王澜吴祖泽
- 关键词：腺病毒受体基因转导信号通路分子机制肌动蛋白
- 重组腺病毒Ad-HGF体外感染成纤维细胞后转染效率及表达的检测被引量：2
- 2004年
- 押检测携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒Ad-HGF在体外对成纤维细胞的感染效率以及感染细胞对目的蛋白的表达。以不同感染复数(m.o.i.)(25,50,100,200)的Ad-GFP感染NIH3T3细胞,48h时用流式细胞仪检测转染效率;以50m.o.i.感染NIH3T3细胞后48h,用ELISA和Western印迹杂交法分别检测感染上清中HGF的表达。分别以50m.o.i.的Ad-GFP和Ad-HGF感染原代培养人瘢痕成纤维细胞,以检测重组腺病毒对原代培养人瘢痕成纤维细胞的转染效率和其对HGF的表达。结果表明,当m.o.i.为50时,重组腺病毒对NIH3T3细胞的转染效率已达95%以上;HGF的表达量可达每2×106细胞249ng;并可检测到HGF蛋白的一特异杂交带。以50m.o.i.的Ad-GFP感染原代培养人瘢痕成纤维细胞,72h时GFP表达达高峰,此时转染效率可高达36.75%。Ad-HGF感染原代培养人瘢痕成纤维细胞后HGF的表达在72h时达高峰,表达量可达每3.3×105细胞66ng。初步认为重组腺病毒可有效地介导HGF基因转染正常或瘢痕成纤维细胞,且感染细胞可有效表达目的蛋白。
- 哈小琴王澜劳妙芬吴祖泽
- 关键词：腺病毒转染成纤维细胞肝细胞生长因子
- 重组腺病毒介导人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因对恶性肿瘤生物治疗的临床前研究
- 恶性肿瘤因其高发病率、高死亡率近年来一直是严重危害人类健康的重要疾病之一。目前临床上常用的治疗方法(手术、化疗和放疗)都存在一定的局限性，因此需要探索新的更加有效的治疗方法。本室构建的携带人野生型p53基因和肿瘤免疫相关...
- 王澜
- 关键词：抑癌基因P53巨噬细胞集落刺激因子恶性肿瘤
- 文献传递
- 重组腺病毒介导多重基因对喉癌的治疗研究被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨携带p5 3、B7 1和GM CSF基因的重组腺病毒 (BB 1 0 2 )对荷瘤裸鼠体内人喉癌细胞的基因治疗效果。方法 建立喉癌裸鼠模型 ,瘤内注射BB 1 0 2、Ad GFP和PBS ,观察肿瘤生长情况 ,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果 经多因素析因方差分析 ,实验组与对照组肿瘤重量和瘤体积差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。经治疗后 ,实验组肿瘤中未发现突变型 p5 3的表达 ,Ki6 7阳性表达率极低 ;光镜和透射电镜下可见肿瘤细胞凋亡。结论 BB 1 0 2可在喉癌细胞中有效表达 ,抑制其生长 ,诱导其凋亡 ,在喉癌基因治疗中具有较好的应用前景 。
- 雷磊邱兆华王澜王荣光韩东一杨伟炎吴祖泽
- 关键词：腺病毒抑癌基因P53粒细胞巨噬细胞集落刺激因子喉肿瘤
- 腺病毒携带p53、GM-CSF、B7-1基因转染乳腺癌细胞诱导抗肿瘤免疫的研究被引量：2
- 2003年
- 秦燕吴祖泽宋三泰王澜吴世凯
- 关键词：腺病毒P53基因B7-1基因基因转染
- 携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对犬心肌缺血的基因治疗被引量：6
- 2004年
- 为了进一步研究重组腺病毒Ad-HGF对心肌缺血的治疗效果及其安全性,在体外实验和大鼠实验的基础上制作了犬心肌缺血的模型,从3个方面评价Ad-HGF对心肌缺血的治疗效果.首先,通过冠状动脉造影观察侧支循环形成的情况,发现治疗组动物的侧支循环比对照组丰富;然后,对心脏切片进行TTC染色,并通过图像分析确定缺血区面积,结果显示治疗组动物的缺血区明显小于对照组;最后,从心肌中回收彩色微球计算局部心肌血流量,结果显示治疗组动物的局部心肌血流量基本恢复到了结扎前的水平.另外,在长期毒性研究中,用中和方法检测了腺病毒抗体产生的情况,发现腺病毒抗体在第4次注射后产生,达到高峰后缓慢下降,于停药12周后消失.总之,Ad-HGF对心肌缺血的治疗是有效的,同时也会诱导机体产生抗体中和体内的腺病毒,这可能是腺病毒载体的清除机制.
- 吴丹莉张友荣劳妙芬袁丽珍王澜哈小琴吴祖泽
- 关键词：肝细胞生长因子心肌缺血基因治疗重组腺病毒中和性抗体
- 重组腺病毒介导人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因对恶性肿瘤生物治疗的临床前研究
- 恶性肿瘤因其高发病率、高死亡率近年来一直是严重危害人类健康的重要疾病之一。目前临床上常用的治疗方法(手术、化疗和放疗)都存在一定的局限性,因此需要探索新的更加有效的治疗方法。本室构建的携带人野生型p53基因和肿瘤免疫相关...
- 王澜
- 关键词：抑癌基因P53
- 腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因对Lewis肺癌的治疗作用被引量：2
- 2006年
- 目的:体内观察腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因的抗肿瘤及协同化疗或放疗的作用。方法:建立C57小鼠的Lew is肺癌模型,瘤内注射不同剂量的上述三个基因重组的腺病毒,确定重组腺病毒治疗小鼠Lew is肺癌的有效剂量;与此同时观察有效剂量的重组腺病毒和放疗或化疗协同作用。结果:腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因治疗小鼠Lew is肺癌的有效剂量为5×108pfu,该重组腺病毒与放疗或化疗联合应用可以显著提高小鼠Lew is肺癌对放疗或化疗的敏感性。结论:腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因对小鼠Lew is肺癌具有良好的治疗作用;该重组腺病毒联合放疗或化疗可以显著提高小鼠Lew is肺癌对放疗或化疗的敏感性。
- 邵晓婷吴彬毕建进老妙芬王澜吴祖泽
- 关键词：腺病毒基因肺肿瘤
