王春婷
- 作品数：35 被引量：217H指数：9
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>
- 嗅神经鞘细胞的培养纯化及体外生长特性被引量：26
- 2001年
- 采用原代培养的方法,从2.5月成年大鼠的嗅球分离培养嗅神经鞘细胞(OECs),培养6天后,用阿糖胞昔(Ara-C)抑制,差速贴壁,Forskolin和BPE营养物质处理。根据P75蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征分析了所得细胞的纯度。同时对不同培养时期的OECs的形态进行观察和纯化后的活力测定。实验结果显示:(1)这种纯化方法简单,经济,快捷,所得的OECs纯度可达95％以上,并且随培养时间延长,细胞仍保持较高的纯度。(2)在培养早期2天到5天主要以巨噬细胞状、多极状、不规则状为主,培养中期7天到20天主要以扁平的双极、三极为主。晚期20天以后呈现双极、三极形态,其突起上有许多细小的棘突。(3)其中以培养早中期细胞的活力较好,培养20天以后,细胞活力较差。本研究为以OECs作为移植材料对促进神经再生的研究获得丰富的细胞来源奠定了基础。
- 杨浩王春婷程华玲鞠躬
- 关键词：嗅神经鞘细胞细胞培养神经再生体外生长纯化
- 自组装肽包裹嗅神经鞘细胞抑制脊髓损伤后胶质瘢痕形成并促进轴突再生被引量：3
- 2009年
- 目的研究自组装肽包裹嗅神经鞘细胞(OECs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后轴突再生的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,行脊髓T_(10)节段背侧横断术,动物随机分为4组,每组10只。SAP-OECs组于间隙内移植SAP包裹的OECs悬液,SAp、OECs对照组同法分别移植等量SAP及DF12-OECs悬液;单纯全切对照组不做处理。术后2或4周过量麻醉处死动物,脊髓损伤节段连续冰冻矢状切片。行抗GAP-43和GFAP免疫组织化学和免疫荧光双标染色。结果SAP-0ECs组损伤区内有大量GAP-43免疫反应纤维,SAP组相较OECs及单纯半切对照组则可见相当数量GAP-43免疫反应纤维。OECs及单纯半切对照组损伤区周围可见一条致密度的GFAP阳性的反应性星形胶质细胞条带,而SAP组GFAP免疫反应纤维比对照组少,且多于SAP-OECs组。此外激光共聚焦显微镜下观察SAP-OECs组在损伤后4周GAP-43免疫反应纤维能通过位于脊髓损伤区尾端的GFAP阳性区域。结论自组装肽包裹嗅鞘细胞可以抑制脊髓损伤后胶质疤痕形成并促进轴突再生。
- 王春婷贺诗华游思维鞠躬
- 关键词：嗅神经鞘细胞脊髓损伤轴突再生
- 培养胚胎神经干细胞移植入纹状体后的形态学观察被引量：1
- 2003年
- 本研究的目的是 :将体外培养的小鼠胚胎大脑皮层和脊髓的神经干细胞经单细胞悬液微移植后观察其在大鼠纹状体的存活、迁移和分化的状况。实验在无血清条件下将这些细胞扩增、培养再经活细胞荧光染料 Di I标记后 ,采用微移植的方法 ,通过脑立体定位仪上用微玻璃针将干细胞分别植入成年大鼠双侧纹状体的对称部位。大鼠存活 8周后 ,经灌注固定、恒冷箱切片 ,在荧光显微镜下观察标记的移植细胞的迁移状况 ;用星形胶质细胞特异性抗体观察移植区 GFAP的表达 ,以显示移植细胞分化状况。结果表明 :来源于胚胎小鼠大脑皮层和脊髓的体外培养神经干细胞经微移植后 ,均可在成年大鼠脑内纹状体区域存活 ,移植的神经干细胞可向周围的脑实质内迁移 ,迁移细胞沿特定的纹状体结构分布。神经干细胞主要分化成星形胶质细胞。本实验结果提示 ,移植的神经干细胞可在脑实质内存活、迁移和分化。
- 许汉鹏苟琳杨浩王春婷鞠躬
- 关键词：神经干细胞体外培养荧光标记
- 嗅鞘细胞的培养纯化及形态学特征被引量：32
- 2002年
- 目的 建立体外培养纯化嗅鞘细胞 (Olfactoryensheathingcells,OECs)的模型 ,观察OECs生长状态和形态学变化 ,为研究神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法 以原代培养的方法分离、培养成年大鼠嗅球OECs,再用阿糖胞苷抑制 ,P75抗体吸附方法纯化及Forskolin和牛垂体提取液 (bovinepituitaryextract,BPE)营养物质综合作用。根据P75免疫组化学染色结果统计所得OECs的纯度 ,同时对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果 (1)此纯化方法所得的OECs纯度可达 95 %以上 ,细胞增殖速度较快 ,且细胞纯度不因培养时间的延长而明显下降。 (2 )未纯化前细胞形态多变 ,主要为巨噬细胞状、双极和多极状 ;纯化后 2～ 4天 ,OECs多呈双极或多极状 ;突起短小 ;4天后 ,OECs以突起细长的双极和三极为主 ,细胞走向一致 ,呈平行排列。结论 P75抗体吸附方法纯化效率高 ,Forskolin和BPE能够促进细胞的增殖 。
- 杨浩游思维王春婷鞠躬
- 关键词：形态学嗅鞘细胞神经损伤神经再生细胞移植
- 用IBX对醋酸去氢表雄酮选择性脱氢合成3β-乙酰氧基-雄甾-Δ^(5,15)-二烯-17-酮被引量：2
- 2008年
- 以醋酸去氢表雄酮为起始原料,于温度为65~70℃的DMSO-甲苯混合溶剂中,反应时间为22h,利用二碘酰基苯甲酸(IBX)对醋酸去氢表雄酮的选择性脱氢简便高效地合成了曲螺酮关键中间体3β-乙酰氧基-雄甾-Δ5,15-二烯-17-酮;探讨了IBX与醋酸去氢表雄酮的摩尔比对目标化合物的收率影响。实验表明,在n(IBX)∶n(醋酸去氢表雄酮)=1.5∶1.0时,目标化合物的收率最佳,达到73%。目标化合物经紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱、质谱及元素分析测试技术确证了其化学结构。
- 贺诗华王春婷
- 关键词：IBX中间体
- 促细胞黏附生长的自组装肽水凝胶
- 2005年
- 随着细胞与组织工程的迅猛发展,能够促进细胞黏附、生长和分化的生物材料基质支架的研究日益重要。具有生物相容性且含水量超过99%的自组装肽水凝胶因其很好地符合理想的生物材料基质支架标准而备受重视。这类自我互补的两亲寡肽含50%的带电残基,并且以交替的离子亲水性和不带电的氨基酸残基周期性重复为特征;在其寡肽的氨基末端可用直接固相合成法修饰几个短序列生物活性模体进行功能化,用以促进不同细胞的黏附生长和靶向定位。现对自组装肽水凝胶的结构特征、自组装机制、对细胞黏附生长的影响以及未来自组装肽生物材料设计的目标进行综述。
- 王春婷贺诗华鞠躬
- 关键词：生物材料基质支架
- 纤维蛋白胶包裹嗅神经鞘细胞促进脊髓轴突再生的实验研究被引量：12
- 2003年
- 目的 观察纤维蛋白胶 (FG)包裹嗅神经鞘细胞 (OECs)植于成年大鼠脊髓全横断断端间隙内对损伤轴突再生的促进作用。 方法 成年雄性SD大鼠 16只 ,行脊髓T11节段全横断术。FG OECs组于间隙内移植FG包裹的OECs ,FG对照组移植等量的FG ,OECs对照组移植等量DF12 OECs悬液 ,单纯全切对照组未做任何移植 ,每组动物 4只。术后 2周处死动物 ,脊髓损伤区冰冻水平切片 ,荧光显微镜下观察OECs的存活及迁移 ,并行抗神经丝 (NF)和生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)抗体免疫组织化学染色。 结果 OECs及单纯全切对照组脊髓两断端连接较差 ,而FG对照组及FG OECs组两断端连接良好。FG、OECs及单纯全切对照组损伤区可见少量NF及GAP 4 3免疫反应纤维 ;FG OECs组间隙内OECs大量存活 ,并迁移至两侧脊髓实质内 ,大量NF及GAP 4 3免疫反应纤维通过间隙。 结论 FG包裹的OECs可在成年大鼠脊髓全横断断端间隙内存活并迁移至脊髓实质内 。
- 孟晓梅王春婷游思维刘惠玲杨浩焦西英刘飞史明鞠躬
- 关键词：纤维蛋白胶嗅神经鞘细胞脊髓轴突再生脊髓全横断脊髓损伤
- 嗅成鞘细胞条件培养基对PC12细胞促分化作用及对分化后细胞损伤的保护作用被引量：4
- 2006年
- 目的研究嗅成鞘细胞条件培养基(OECCM)对PC12细胞促分化作用及其对-OH自由基损伤分化后细胞的保护作用。方法采用原代分离培养的方法培养和纯化嗅成鞘细胞,收集其培养上清作为OECCM,然后用其培养PC12细胞,培养3 d后,进行细胞形态学观察及-βtubulin免疫细胞化学染色,同时在同一批细胞中加入100μmol/L FeSO4和50μmol/L H2O2作用20 min,再用OECCM继续培养48 h,然后进行MTT对细胞活性进行检测和存活细胞计数。结果用OECCM培养的PC12细胞长有突起,形态酷似神经元,并且-βtubulin免疫细胞化学染色呈阳性,而对照组细胞在同样培养时间里,没有明显的形态变化,-βtubulin染色呈阴性。用FeSO4和H2O2产生的-OH自由基对分化后的PC12细胞进行损伤,发现继续用OECCM培养后,反映细胞活性的A值为0.346 5±0.032,对照组0.201 8±0.034(P<0.01);同时两组细胞存活数目的百分比分别为:实验组为(56.7±5.9)%,对照组为(23.8±7.4)%(P<0.01)。结论嗅成鞘细胞可以分泌有促PC12细胞分化作用的分子和对分化后的细胞在损伤时有保护作用的分子。
- 杨浩王春婷许汉鹏李静雯游思维鞠躬
- 关键词：嗅成鞘细胞细胞分化PC12细胞
- 芍药苷对培养小鼠皮层神经元的保护作用被引量：22
- 2002年
- 目的 探讨芍药苷是否促进培养皮层神经细胞的存活 ,并对抗兴奋性氨基酸海人藻酸 (KA)所致的神经损伤。方法 解剖分离 15d胚胎小鼠皮层神经细胞 ,接种于 2 4孔板中加药培养 ,台盼蓝染色细胞 ,相差显微镜及免疫组织细胞化学方法进行形态学观察。结果 ①加入芍药苷 2 0 .8和 4 1.6mg·L- 1培养 4d增加神经细胞存活数量 ,降低死亡率。②加入KA 5 0 μmol·L- 1作用 30min ,神经元肿胀 ,失去折光性 ,核偏位 ,死亡率增高。预先加入芍药苷2 0 .8和 4 1.6mg·L- 1培养 4d ,可对抗KA所致的神经损伤。结论 芍药苷可增加神经细胞存活数量 ,降低死亡率 ,对抗KA所致的兴奋性神经损伤。
- 吴玉梅许汉鹏王春婷杨浩鞠躬
- 关键词：芍药苷小鼠皮层神经元
- 中枢神经系统不同部位来源的神经干细胞在体外生长特性的比较被引量：9
- 2004年
- 目的 比较相同发育阶段中枢神经系统不同部位来源的神经干细胞在体外的生长特性。 方法 胚胎小鼠 (E14 )于无菌条件下分别分离并收集皮层、纹状体、间脑、中 后脑和脊髓 ,各部分制备成单细胞悬液 ,接种在添加有纤维细胞生长因子 (FGF)的无血清培养液内 ,神经干细胞克隆生成后 ,经免疫细胞化学方法鉴定细胞特性 ,并在相同条件下进行传代 ,相差显微镜下观察克隆生成和细胞的迁移特性。 结果 在添加有纤维细胞生长因子的无血清培养液中 ,少量接种的单个细胞会增殖并形成悬浮于细胞培养液中的细胞克隆。这些克隆具有生成新克隆并分化成神经元和胶质细胞的能力。在相同发育阶段 ,皮层、纹状体、间脑均可生成悬浮的克隆 ,其中皮层生成的速度最快 ,纹状体、间脑较慢 ,中 后脑、脊髓生成克隆的速度最慢 ;生成克隆后 ,皮层克隆的贴壁能力最差 ,贴壁的克隆少有细胞从其底部迁出 ,纹状体、间脑克隆较易贴壁 ,贴壁克隆底部有明显的细胞迁出 ,中 后脑、脊髓生成的克隆不易悬浮 ,很快贴壁 ,在贴壁克隆的底部有大量的细胞迁出。 结论 在无血清培养液中 ,神经干细胞可在体外增殖、传代并分化生成神经元和胶质细胞 ,不同部位来源的神经干细胞在体外生成克隆的速度和细胞迁移性不同 ,这可能同体内特定部位细胞的?
- 许汉鹏苟琳杨浩王春婷吴玉梅鞠躬
- 关键词：神经干细胞体外培养细胞迁移克隆小鼠
