- 副黏病毒Tianjin株重组血凝素-神经氨酸酶单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用被引量：4
- 2008年
- 目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测104例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本。结果:获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株G7H4D3、G7D9G3和G7G7E7。3株单克隆抗体与副黏病毒Tianjin株有较高结合活性,与甲、乙型流感病毒,新城疫病毒(NDV),人副流感病毒(hPIV)1型、3型、肺炎支原体均无交叉反应性。ELISA相加试验和阻断试验表明,3株单抗识别相同或相近表位区域,识别的表位在抗病毒免疫应答中处于免疫优势地位。双抗体夹心ELISA法检测阳性率为1.92%(2/104)。结论:与RT-PCR和间接ELISA法比较,双抗体夹心ELISA法,具有敏感性高、特异性强的优点,适于临床检测使用。副黏病毒Tianjin株是婴幼儿下呼吸道感染的重要致病因子之一。
- 李霞李晓眠石立莹袁立军王卿王文秀李梅侯凯
- 关键词：单克隆血凝素类神经氨酸酶重组蛋白质类
- 副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′末端序列测定及分析被引量：1
- 2008年
- 目的测定副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′末端序列,分析其前导区一级及二级结构与功能的关系。方法从感染病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,利用cDNA末端快速扩增(RACE)法分别扩增基因组3′和5′端cDNA片段,并克隆至pGM-T载体中,然后分别测定插入片段的核苷酸序列,用DNAStar软件将测得的3′和5′端前导区序列与GenBank中选取的6株仙台病毒代表株相应序列进行相似性比较及序列比对,用RNAdraw软件预测基因组3′和5′端前导区二级结构并进行比较分析。结果副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′末端非编码区长度分别为119和142个核苷酸,前导区核苷酸序列与6株仙台病毒基因组的相似性分别在89.1%～96.4%和93.0%～96.5%,二级结构与选取的已知仙台病毒株高度相似而且稳定。结论副粘病毒Tianjin株基因组3′和5′端前导区序列相对保守,可能与病毒复制、转录调控及致病性有关。
- 石立莹李梅李晓眠何健民袁立军王卿
- 关键词：副粘病毒仙台病毒
- 容积分割法评估孤立性肺结节(SPN):CT灌注拟合动态增强的初步研究
- 目的：
利用64排螺旋CT灌注扫描拟合多期动态增强扫描技术，对不同性质孤立性肺结节(solid pulmonary nodule，SPN)应用全体素容积阈值分割法进行评估，比较全体素容积阈值分割法及传统兴趣区(re...
- 王卿
- 关键词：孤立性肺结节体层摄影术X线计算机CT灌注
- 文献传递
- HSV-1感染大鼠骨髓间充质干细胞及形成潜伏感染的初步研究被引量：3
- 2008年
- 在体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察单纯疱疹病毒1型感染骨髓间充质干细胞情况。分离并鉴定BMSCs;HSV-1感染BMSCs,观察细胞病变(CPE);建立BMSCs的HSV-1潜伏感染模型。提取总DNA,PCR法扩增BMSCs内的HSV-1特异性片段,检测HSV-1感染BMSCs及潜伏感染。结果显示骨髓间充质干细胞经14d诱导后,碱性磷酸酶含量增高、形成钙结节,表现出成骨细胞特性。HSV-1感染BMSCs,出现典型的CPE,PCR法证实BMSCs内存在HSV-1的特异性片段。HSV-1潜伏感染的BMSCs,未出现明显的CPE,细胞传至7代,仍可测到HSV-1的基因片段,表明BMSCs有可能形成HSV-1的潜伏感染。大鼠骨髓间充质干细胞在体外可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。HSV-1可以在体外感染骨髓间充质干细胞并有形成潜伏感染的趋势。
- 潘丽李晓眠李梅王卿
- 关键词：单纯疱疹病毒1型骨髓间充质干细胞器官移植
- 副粘病毒Tianjin株NP基因的表达及在儿童下呼吸道感染检测中的应用
- 1999年从呼吸道感染导致死亡的灵长类动物普通棉耳狨猴肺组织中分离到一株病毒，该毒株与普通棉耳狨猴下呼吸道感染之间符合科赫原则。分离株经电镜观察，具有典型的副粘病毒特征：交叉血凝抑制试验、RT-PCR扩增HN基因并测序、...
- 王卿
- 关键词：呼吸道感染副粘病毒基因表达
- 文献传递
- HSV-1体外感染骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的:在体外原代培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染骨髓间充质干细胞情况。方法:分离骨髓间充质干细胞,并对其作鉴定。用HSV-1感染骨髓间充质干细胞,提取总DNA,PCR法扩增骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段。结果:骨髓间充质干细胞经14d诱导后,碱性磷酸酶含量增高,形成钙结节,表现出成骨细胞特性。HSV-1感染骨髓间充质干细胞,细胞出现典型的病变,PCR法成功扩增出骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在体外可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。HSV-1可以在体外感染骨髓间充质干细胞。
- 潘丽李晓眠李梅王卿
- 关键词：单纯疱疹病毒属骨髓细胞WISTAR器官移植
- 副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析被引量：2
- 2008年
- 目的分析副粘病毒Tianjin株NP蛋白与其他SeV的同源性及种系进化关系,探讨其变异及抗原性。方法克隆NP基因,对其核苷酸和氨基酸序列进行同源性及进化分析。在原核系统中分3段表达NP蛋白。结果经Western blot分析,重组蛋白NP1、NP2和NP3能与副粘病毒Tianjin株抗血清特异反应,具有天然抗原性。Tianjin株与仙台病毒BB1株NP的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.5%和96.2%,与其他仙台病毒的同源性,在85.1%～88.7%和92.4%～94.7%之间。Tianjin株NP蛋白共有15个独特的氨基酸变异位点和11个与BB1株共有的变异位点。Tianjin株与BB1株NP核苷酸序列的差异大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异。结论副粘病毒Tian-jin株属于仙台病毒新的进化分支。重组NP蛋白具有抗原性。
- 王卿李梅石立莹袁立军王文秀
- 关键词：NP基因原核表达
- 副黏病毒Tianjin株NP蛋白的稳定表达及其检测
- 2009年
- 目的:构建副黏病毒Tianjin株NP基因的真核表达载体,转染HEK293细胞,经G418筛选出稳定表达NP蛋白的细胞。方法:应用RT-PCR技术克隆副黏病毒Tianjin株NP基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经PCR、酶切和测序鉴定后,将构建的pcDNA3.1(+)-NP用LipofectamineTM2000转染试剂转染HEK293细胞。应用免疫荧光法及Western Blot检测NP蛋白的瞬时和稳定表达。结果:RT-PCR扩增得到NP基因,重组质粒pcDNA3.1(+)-NP转染HEK293细胞后,经免疫荧光法检测到目的蛋白的瞬时和稳定表达。WesternBlot法可见NP蛋白瞬时和稳定表达的条带。结论:副黏病毒Tianjin株NP基因在HEK293细胞可以瞬时和稳定表达,为研究副黏病毒Tianjin株NP蛋白功能与病毒致病性、宿主亲嗜性奠定了基础。
- 王文秀李梅王卿
- 关键词：仙台病毒核蛋白类细胞系
- 新分离的副粘病毒Tianjin株的全基因组序列分析被引量：8
- 2008年
- 副粘病毒Tianjin株是一株对普通棉耳狨猴具有高致病性,并可能与人类下呼吸道感染密切相关的毒株。为了明确其基因结构、变异特点及种系进化地位,采用RT-PCR、测序和拼接,获得了副粘病毒Tianjin株全基因组序列,与GenBank登录的副粘病毒科7个属和尚未分类的28株病毒及7株仙台病毒代表株,进行同源性比较及系统进化分析。结果表明,副粘病Tianjin株属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、呼吸道病毒属,与仙台病毒关系最近。基因组全长及组成规律与仙台病毒相似,只是L基因末尾A15240C变异而使L蛋白增加了一个谷氨酸残基。副粘病毒Tianjin株存在440个独特的核苷酸变异位点,导致110个氨基酸残基的改变,系统进化上构成独立的分支。副粘病毒Tianjin株在基因组序列、宿主亲嗜性和致病性等方面与已知仙台病毒存在较大的差异,可能代表仙台病毒的一个新基因型。
- 李梅石立莹袁立军李晓眠王卿王文秀
- 关键词：仙台病毒同源性比较系统进化分析
- 副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析被引量：1
- 2008年
- 1999年，本实验室从群体性暴发的急性呼吸道感染致死的普通棉耳绒猴肺组织中分离到一株副粘病毒，命名为副粘病毒Tianjin株。经研究发现该动物中心的工作人员都有此病毒抗体，且正常人群（献血员）抗体阳性率高达46％，急性呼吸道感染的患儿抗体阳性率为19．28％，提示此病原体与人类可能有密切的关系。经血清学、形态学及基因测序研究，表明副粘病毒Tianjin株与仙台病毒（Sendai virus，SeV）同源性较高，
- 王卿李梅石立莹袁立军王文秀
- 关键词：NP基因
