沈月兰
- 作品数：20 被引量：44H指数：3
- 供职机构：广州医学院公共卫生学院化学致癌研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Ras基因家族在二羟环氧苯并(a)芘恶性转化细胞中的表达研究被引量：3
- 2008年
- 目的检测环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响。方法以正常人支气管上皮细胞为对照组,经BPDE恶性转化人支气管上皮细胞为实验组,分别利用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学方法,检测Ras基因家族在mRNA和蛋白水平表达变化。结果RT-PCR实验表明,BPDE恶性转化细胞H-Ras、K-Ras和N-Ras mRNA表达水平分别是正常细胞的2.237、1.254和3.616;Western blot实验显示,H-Ras、K-Ras和N-Ras蛋白表达量分别是正常细胞的1.273倍、1.547和1.600倍;免疫细胞化学实验表明,恶性转化细胞H、K和N-Ras蛋白表达明显强于正常细胞。结论BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化存在H-Ras、K-Ras和N-Ras基因过表达。
- 周兰兰谭爱军蒋义国沈月兰傅娟
- 关键词：二羟环氧苯并芘人支气管上皮细胞苯并(A)芘
- MicroRNA在苯并[a]芘诱导支气管细胞癌变中的作用
- ＜正＞苯并（a）芘（Benzo[a]pyrene,B[a]P）是一种常见的环境污染物,广泛存在于燃煤和吸烟过程中,是一种间接致癌物,B[a]P暴露与人类肺癌的发生密切相关。microRNA（miRNA）是最近发现的一类在...
- 刘林华吴延段慧菡沈月兰蒋义国
- 文献传递
- N-Ras基因表达沉默与二羟环氧苯并芘转化的人支气管上皮细胞生长的关系
- 2009年
- 目的构建N-Ras基因小发卡结构RNA(shRNA)干扰真核表达质粒载体,并初步观察其对二羟环氧苯并芘(BPDE)转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)生长的影响。方法根据GenBank提供的N-Ras cDNA序列,设计并合成shRNA寡核苷酸片段,与含U6启动子的pGPU6/GFP/Neo质粒定向连接,构建4个真核表达载体,并经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。转染16HBE-T细胞48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测重组质粒对N-Ras基因表达的影响;用噻唑蓝法(MTT)观察重组质粒对细胞生长的抑制作用。结果构建了4个N-Ras shRNA真核表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。构建的4个表达载体pGPU6/GFP/Neo-NRas-566、pGPU6/GFP/Neo-NRas-305、pGPU6/GFP/Neo-NRas-613和pGPU6/GFP/Neo-NRas-791分别转染16HBE-T细胞48 h后,RT-PCR显示N-Ras基因mRNA表达水平依次下调95%、70%、92%和60%;Western blot显示蛋白表达依次降低92%、45%、58%和34%。MTT发现16HBE-T细胞的生长受到明显抑制,且与N-Ras基因表达水平正相关。结论成功构建了N-Ras基因特异性shRNA真核细胞表达载体,有效沉默了N-Ras在16HBE-T细胞中的表达,抑制了恶性转化细胞的生长。
- 周兰兰蒋义国谭爱军沈月兰刘林华杨巧媛
- 关键词：二羟环氧苯并芘RNA干扰小发夹RNAN-RAS
- N-Ras shRNA抑制二羟环氧苯并芘恶性转化细胞增殖
- 目的检测环境致癌物苯并（a）芘代谢物二羟环氧苯并芘（BPDE）对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响,并用小发夹RNA（small hairpin RNA,shRNA）干扰技术探讨N-Ras基因过表达对BPDE转化人...
- 蒋义国周兰兰沈月兰刘林华杨巧媛
- 关键词：环境毒理二羟环氧苯并芘小发夹RNA
- 文献传递
- 二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a及其靶基因HOXA1的表达改变
- 2008年
- 目的检测二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a表达水平,探讨其与靶基因HOXA1癌基因的关系。方法以正常支气管上皮细胞为对照组,二羟环氧苯并芘恶性转化细胞为实验组,用茎环结构逆转录引物逆转录,定量PCR检测两组细胞miR-10a表达水平。运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、定量PCR和流式细胞术间接法检测2组细胞HOXA1 mRNA和蛋白表达水平。结果二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a表达水平是对照组的0.01倍,RT-PCR HOXA1 mRNA是对照组的(3.12±0.23)倍,定量PCR HOXA1 mRNA是对照组的8.75倍,HOXA1蛋白表达是对照组的3.48倍。结论二羟环氧苯并芘恶性转化细胞miR-10a可能反向调控靶基因HOXA1的表达。
- 沈月兰蒋义国周兰兰付娟
- 关键词：二羟环氧苯并芘恶性转化细胞
- 二羟环氧苯并芘对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响。方法利用RT-PCR和Western blot方法,分别检测N-Ras基因在经BPDE恶性转化细胞中mRNA和蛋白表达水平的变化。利用免疫细胞化学方法检测N-Ras基因在经BPDE恶性转化细胞中定位和蛋白表达量的变化。结果RT-PCR和Western blot实验表明,BPDE恶性转化细胞N-Ras基因的mRNA和蛋白水平分别是正常细胞的3.616和1.600倍。免疫细胞化学实验显示,在BPDE恶性转化细胞和正常细胞中,N-Ras基因在细胞膜和细胞浆中均有表达,且两者相比,前者中的N-Ras蛋白表达明显强于后者。结论N-Ras基因可能在BPDE的致癌机制中起着重要作用。
- 周兰兰蒋义国沈月兰傅娟曹虹
- 关键词：空气污染N-RAS基因二羟环氧苯并芘人支气管上皮细胞
- 反式二羟环氧苯并芘对人支气管上皮细胞中HER2/neu基因表达的影响被引量：4
- 2007年
- 目的探讨环境致癌物苯并(a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞HER2/neu基因表达的影响。方法利用半定量RT-PCR、SYBR GreenI实时定量RT-PCR(QRT-PCR)、Western blot及免疫细胞化学方法分别检测经2.0μmol/L反式BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化细胞(16HBE-T)与对照DMSO溶剂组未恶性转化细胞(16HBE-N)之间HER2/neu基因mRNA和蛋白表达水平的差异,及两组细胞内HER2/neu蛋白表达定位分析。结果经几种不同方法检测反式BPDE恶性转化人支气管上皮细胞中HER2/neu基因mRNA和蛋白水平都比对照溶剂组细胞(16HBE-N)表达显著升高(P<0.05)。HER2/neu蛋白定位在胞膜。结论反式BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化存在HER2/neu表达增高,其可能与原癌基因HER2/neu被激活作用有关。
- 傅娟蒋义国邹云锋沈月兰周兰兰陈学敏
- N-Ras shRNA抑制二羟环氧苯并芘恶性转化细胞增殖
- 目的检测环境致癌物苯并（a）芘代谢物二羟环氧苯并芘（BPDE）对人支气管上皮细胞 Ras 基因家族表达的影响,并用小发夹 RNA（small hairpin RNA,shRNA）干扰技术探讨 N-Ras 基因过表达对 B...
- 蒋义国周兰兰沈月兰刘林华
- 关键词：环境毒理二羟环氧苯并芘小发夹RNA
- 文献传递
- N-Ras shRNA抑制二羟环氧苯并芘恶性转化细胞增殖
- 目的：检测环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯芘(BPDE)对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响,并用小发夹RNA(shRNA)干扰技术探讨N-Ras基因过表达对BPDE转化人支气管上皮细胞(16HBE-T)恶性...
- 蒋义国周兰兰沈月兰刘林华
- 关键词：环境毒理二羟环氧苯并芘
- 文献传递
- N-Ras基因靶向的shRNA抑制二羟环氧苯并芘诱导的恶变细胞增殖
- 2009年
- 目的用小发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默N-Ras基因表达,探讨N-Ras基因表达对二羟环氧苯并芘(BPDE)转化人支气管上皮细胞(16HBE-T)恶性性状的影响。方法将已建立的针对N-Ras基因的shRNA干扰表达质粒载体pGPU6/GFP/Neo-NRas-566转染16HBE-T细胞,经G418筛选,建立稳定沉默N-Ras基因转化细胞系。采用Western blot筛选最佳N-Ras基因沉默细胞系,用流式检测N-Ras沉默细胞周期变化,用软琼脂实验和裸鼠成瘤实验进行细胞表型分析。结果成功培养出稳定沉默N-Ras基因的16HBE-T细胞系,Western blot显示N-Ras蛋白抑制率最高达86%。流式分析发现稳定沉默N-Ras基因表达诱导转化细胞G0/G1期捕获,软琼脂实验和裸鼠成瘤实验发现稳定沉默N-Ras基因降低了体外恶性转化细胞的集落形成率、抑制了体内肿瘤细胞生长。结论N-Ras基因沉默可以降低转化细胞的细胞周期进程和细胞恶性性状表型,提示N-Ras基因在二羟环氧苯并芘诱导细胞恶变过程中具有重要作用。
- 周兰兰蒋义国谭爱军沈月兰刘林华杨巧媛
- 关键词：二羟环氧苯并芘小发夹RNAN-RAS基因
