李祥生
- 作品数：7 被引量：27H指数：4
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 干细胞贴膜治疗脊髓损伤被引量：4
- 2009年
- 背景:目前人们较多采用的成体干细胞移植,移植方式多形成再次损伤,且体内神经元分化的效率不高。目的:在以往分步诱导分化高效获得神经元前体细胞的基础上,制成干细胞贴膜,观察其贴敷移植治疗脊髓损伤功能恢复的效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/10在郑州大学医学院实验中心完成。材料:酶、化学法制作膜样基质;分离培养、扩增羊膜间充质干细胞,BrdU标记,调整部分细胞浓度为1×1011L-1成细胞悬液备用。余分步诱导并制成干细胞贴膜。方法:健康成年雄性SD大鼠88只,体质量220～250g,以自制打击器制作急性脊髓损伤模型。模型成功后6h,抽签法随机分为4组,每组22只。干细胞贴膜组:在T11进行椎板切除术,打开硬膜充分显露损伤脊髓,止血,将干细胞贴膜贴敷在损伤脊髓表面,手术显微镜下固定于硬膜,分层缝合肌肉皮肤;细胞移植组:损伤脊髓头尾端移植1×1011L-1细胞悬液共5μL,余同上;基质组:贴敷膜样基质在损伤脊髓表面,余同上;对照组:仅行椎板切除术,并打开硬膜。主要观察指标:术后第1天及其后1周1次共10周,进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测;术后2,4,6周观察移植细胞存活及形态学变化,免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白、突触素及神经元特异性烯醇化酶的表达。结果:①运动功能检测:各组BBB积分在4周及以后达到稳定,以10周时BBB评分12及以上为重要的恢复指标,则干细胞贴膜组为100%,细胞移植组为33%,基质组和对照组仅为17%。斜板实验的顺位实验,干细胞贴膜组第10周时的角度与第4周相比有显著改善(P=0.027),而同组同时间点的BBB分值间差异无显著性意义(P=0.286)。②干细胞贴膜组和细胞移植组远端损伤边缘BrdU阳性细胞计数差异无显著性意义(P=0.089)。干细胞贴膜组BrdU阳性细胞多呈神经元形态,细胞移植组BrdU阳性细胞多呈小胶�
- 胡炜关方霞杨波杜英马建李祥生胡祥焦红亮李远
- 关键词：脊髓损伤体内分化突触素
- 人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP^+转基因鼠的有效性及安全性评估被引量：8
- 2009年
- 背景:目前阿尔茨海默病的病因不明,课题组前期实验发现人羊膜间充质干细胞静脉移植可促进阿尔茨海默病APP+转基因鼠的学习、记忆能力改善。目的:进一步评估人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP+转基因鼠的有效性和安全性。设计、时间及地点:细胞学体内实验与动物对照观察,于2008-05/12在郑州大学生物工程系、郑州大学基础医学院及河南省中医药研究院完成。材料:清洁级C57BL/6系APP+转基因胎鼠10只,合笼繁育后得到子代小鼠200只,按其繁殖情况和PCR检测结果,取29只11月龄小鼠,分为APP+对照组10只、APP+细胞移植组10只、APP-正常组9只。羊膜标本由郑州大学第一附属医院产科提供。方法:体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代后调整浓度为1×109L-1的单细胞悬液。APP+细胞移植组每只小鼠尾静脉注射人羊膜间充质干细胞悬液0.5mL,APP+对照组注射等量生理盐水,APP-正常组不作任何处理。主要观察指标:采用Morris水迷宫测定移植前后小鼠学习和记忆功能。移植当天开始称小鼠体质量,持续3周。移植后解剖小鼠,收集全血并分离血清,进行12项肿瘤标记物检测及心、肝、肾功能的血液生化指标检测,对人羊膜间充质干细胞移植的安全性作综合评价。结果:移植后15d各组逃避潜伏期比较,APP-正常组0.05),12项肿瘤标记物、9项血清肝肾功能生化指标及10项血液学指标的表达均无明显差异(P>0.05)。结论:人羊膜间充质干细胞经尾静脉移植后,可明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习、记忆能力,未见致死�
- 郭亚男关方霞李国栋李祥生杨波杜英胡祥胡炜焦红亮李远
- 关键词：人羊膜间充质干细胞阿尔茨海默病安全性
- 人羊膜间充质干细胞移植对阿尔茨海默病转基因小鼠的行为学和β-淀粉样蛋白的影响被引量：9
- 2008年
- 背景:研究发现APP基因与阿尔茨海默病发病密切相关。β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病患者脑内老年斑的主要成分,基因突变和外界环境的影响能破坏β-淀粉样蛋白的动态平衡,从而引发或加速阿尔茨海默病的产生和发展。目的:探讨人羊膜间充质干细胞尾静脉移植对阿尔茨海默病转基因小鼠学习记忆能力及脑组织β-淀粉样蛋白表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/10在郑州大学微生物学与免疫学教研室和河南省中医药治疗研究院完成。材料:健康剖宫产产妇志愿捐献的羊膜,由郑州大学第一附属医院产科提供。APP转基因鼠29只,PCR技术鉴定转APP-基因小鼠9只,作为正常组;转APP+基因小鼠20只,随机分为细胞移植组、对照组,10只/组。方法:无菌条件下体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代将细胞浓度调整为1×109L-1,经尾静脉注入0.5mL至细胞移植组小鼠体内;对照组经尾静脉注入同体积的生理盐水;正常组小鼠不给予任何干预措施。主要观察指标:采用Morris水迷宫测定小鼠逃避潜伏期、穿越平台次数及在平台象限的时间,刚果红染色观察小鼠脑组织内β-淀粉蛋白的表达。结果:定位航行试验中,移植前与正常组比较,细胞移植组、对照组小鼠逃避潜伏期差异均有显著性意义(P<0.05);移植后2周细胞移植组小鼠逃避潜伏期与正常组基本相似(P>0.05),但明显短于对照组(P<0.05)。空间探索试验中,移植前后小鼠穿越平台次数及其在平台象限的时间3组间比较差异均无显著性意义(P>0.05)。移植后1个月,正常组未见或仅见极少量的β-淀粉样蛋白沉积,细胞移植组淀粉样蛋白的沉积明显少于对照组。结论:人羊膜间充质干细胞尾静脉移植能促进阿尔茨海默病转基因小鼠空间定位及学习记忆能力的提高,且减少小鼠脑内β-淀粉样蛋白的沉积。
- 李祥生关方霞李国栋郭亚男杨波杜英胡祥胡炜焦红亮李远
- 关键词：人羊膜间充质干细胞尾静脉神经行为学Β-淀粉蛋白阿尔茨海默病
- 不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较被引量：4
- 2008年
- 背景：以往利用羊膜提取间充质干细胞的研究多将注意力放在新鲜的羊膜标本上，由于地域和时间的限制，对羊膜进行保存是必须面对的实际问题。目的：实验拟比较从不同保存时间人羊膜标本中分离培养的羊膜间充质干细胞的增殖能力。设计、时间及地点：体外进行的细胞对照观察，于2007—01／200802在郑州大学医学院和生物工程系完成。材料：正常剖宫产的健康产妇志愿捐献的羊膜12份，孕38周，检测乙肝5项、HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性。方法；无菌条件下将每份新鲜完整的羊膜平均分成3组，即新鲜1h组、4℃放置24～36h组、4℃放置48～60h组。将3组标本剪碎，胰蛋白酶-胶原酶联合消化，过滤后收集单细胞悬液，以2×10^8L^-1密度接种，加入含胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM／F12培养基，贴壁法纯化扩增细胞。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞形态，绘制生长曲线。取第3代细胞进行免疫组织化学检测和流式细胞仪鉴定。结果：①3组标本消化后都含有多种单个细胞成分，呈圆形、菱形、短梭形、多角形，细胞折光性良好，此外还有多个上皮细胞聚集所成的细胞团。接种后1-3d各组细胞均为潜伏期：4～7d新鲜1h组与4℃放置24～36h组进入对数生长期，细胞增殖活跃，细胞数目呈指数级递增，4℃放置48～60h组仍处于潜伏期；7d后前两组细胞已铺满瓶底，4℃放置48～60h组刚开始指数级递增。②各组细胞神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、巢蛋白均呈阳性表达，胶质纤维酸性蛋白呈阴性。各组细胞CD29，CD44均呈阳性表达。结论：保存时间在60h内的人羊膜都可以分离出具有增殖能力的间充质干细胞，但36h内的羊膜标本所分离的间充质干细胞具有较快的增殖能力。
- 常克亮关方霞杨波杜英李祥生宋来君胡祥
- 关键词：间充质干细胞羊膜增殖
- 人羊膜间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病转基因鼠的实验研究
- 背景与目的:阿尔茨海默病(AD)又称老年痴呆,其主要症状是记忆力进行性减退,并伴有不同程度的认知、语言和人格方面的异常。年龄是AD最主要的危险因素,70岁后每增加5岁,AD发生的危险性增加1倍,80岁后约50％的人有发生...
- 李祥生
- 关键词：羊膜间充质干细胞细胞移植阿尔茨海默病转基因
- 文献传递
- 不同人羊膜间充质干细胞冻存液冻存细胞效果比较被引量：4
- 2009年
- 目的:筛选冻存人羊膜间充质干细胞效果较好的冻存液。方法:①不同配方的细胞冻存液对细胞冻存效果的影响。人羊膜间充质干细胞培养至第三代后分为10组,分别加入以下10种不同组成的冻存液。A组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%DMSO;B组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%DMSO;C组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;D组:90%胎牛血清+10%DMSO;E组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%甘油;F组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%甘油;G组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%甘油;H:90%胎牛血清+10%甘油;I组:90%DMEM/F12+10%DMSO;J组:90%DMEM/F12+10%甘油。调整细胞密度为5×106mL-1,放入程序降温盒中,入-80℃低温冰箱保存。1个月后复苏,MTT法筛选出吸光光度值较高的一种冻存液。②相同血清含量细胞冻存液对细胞冻存效果的影响。含体积分数为50%胎牛血清的细胞冻存液分3组保存细胞。K组:45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO;L组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;M组:35%DMEM/F12+50%胎牛血清+15%DMSO;复苏冻存的细胞后,将细胞按冻存前的数量调整至5×105mL-1,台盼蓝染色后,计算细胞的成活率。在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状况。结果及结论:配方为45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO的冻存液冻存复苏人羊膜间充质干细胞后细胞的成活率最高(P<0.05);冻存复苏后细胞的生长状况较好。
- 杨东斌宋来君杨波李祥生
- 关键词：人羊膜间充质干细胞冻存
- 人脱细胞羊膜对间充质干细胞向神经系细胞分化的影响被引量：2
- 2009年
- 背景:成体干细胞在细胞外基质加细胞因子作用下向神经系细胞分化的报道甚少。目的:根据干细胞巢原理,探讨羊膜间充质干细胞体外向神经系细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的表达。设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2007-12/2008-04在郑州大学医学院实验中心完成。材料:产妇自愿捐献的羊膜由郑州大学第一附属医院产科提供。维甲酸、碱性成纤维细胞生长因子为Sigma公司产品。方法:体外分离培养、扩增羊膜间充质干细胞,调整细胞密度为4×107L-1,同时通过酶-化学法制作膜样基质。设立2组:诱导组羊膜间充质干细胞以基础培养基预诱导后,按4×107L-1接种在膜样基质上,并以神经基础培养基培养2d,然后替换为含10-3mmol/L维甲酸、20μg/Lβ-神经生长因子的DMEM/F12神经诱导培养基,继续培养24h,换基础培养基继续培养3d。对照组除不用膜样基质外,余步骤同诱导组。主要观察指标:细胞形态学变化,蛋白分子水平鉴定神经细胞表型。结果:诱导组接种到膜样细胞外基质24h可见细胞呈球形,紧贴膜样基质,胞体伸出突起,折光性强;第3天大部分细胞突起延伸并相互连接;4～6d突起形成网状结构且排列具有一定的方向性;对照组3d时见多个突起,4～6d细胞又恢复纤维细胞形态。预诱导后,两组巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶表达明显增高,突触素、胶质纤维酸性蛋白表达无明显变化;诱导6d时与对照组比较,诱导组神经元特异性烯醇化酶表达无明显差异(P>0.05),突触素表达显著升高(P<0.01),巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:在膜样细胞外基质上,羊膜间充质干细胞可显示典型神经元特有的形态特征、表达标记。提示应用基质加细胞因子的诱导程序,可以从羊膜间充质干细胞高效获得神经元前体细胞,并抑制其向神经胶质细�
- 胡炜关方霞杨波杜英马建李祥生胡祥焦红亮李远
- 关键词：羊膜间充质干细胞细胞外基质分化
