张怡青
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- SD大鼠肝癌演进中端粒酶活性的动态变化被引量：1
- 2012年
- 探讨端粒酶活性在肝癌演进中的变化,用3'-甲基-4-二甲基氨基偶氮苯(3'-Me-DAB)作诱变剂,建立SD大鼠肝癌变动物模型.自灌胃之日起,分别在2、4、6、8、10、12、14、17w分批处死大鼠,取其肝脏,进行病理分级,然后用TRAP-ELISA法检测肝癌变各时期端粒酶活性,结果显示:在轻度炎性反应期(LI)端粒酶活性高于对照组,呈极显著差异(P<0.01);重度炎性反应期(HI)端粒酶活性有所下降,但仍高于对照组,且呈显著性差异(P<0.05);至腺瘤样增生(NH)和肝内胆管细胞癌(CCC)时端粒酶活性再次升高,与对照组相比呈极显著差异(P<0.01).提示端粒酶活性增高可能是肝癌变进程中的重要事件,与肝癌的发生发展密切相关.
- 刘丹丹王莉金白洁王亚威马明霞李安琪刘骨挺张怡青张红绪
- 关键词：肝癌端粒酶TRAP-ELISA
- 丁型肝炎病毒ORF5基因片段的原核表达及在ELISA中的初步应用被引量：1
- 2012年
- 为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入细胞BL21(DE3),经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,表达蛋白分子质量约27ku,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达95%以上。将纯化的蛋白经HRP标记,初步建立ELISA捕获法,通过对24份标本检测和交叉反应试验,结果表明表达的抗原具有很好的反应原性和特异性,为建立丁型肝炎早期检测试剂盒提供材料。
- 王云龙王娟李玉林董彩文孙新城张怡青王国强李恒思刘旺根
- 关键词：丁型肝炎病毒原核表达ELISA
- CaCl_2+ASA对菊花形态与生理调控作用的研究
- 2013年
- 以一定浓度(160 mg·L-1)的氯化钙(CaCl2)与不同浓度(50,80,100 mg·L-1)的抗坏血酸(ASA)组合,对菊花‘兼六香菊’品种从定头至花芽分化期进行喷雾处理,测定花期花瓣中生理生化指标的动态变化,并观察、记录开花日期、花期持续时间,测量和分析花期花序与植株的形态变化。结果表明,处理组均不同程度地提高了菊花花瓣中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活力,增加了可溶性蛋白和可溶性糖含量,降低了花瓣中超氧阴离子(O-2)产生速率、丙二醛(MDA)含量以及花瓣浸出液的相对电导率,其花径、株高、株径也均有提高,并使菊花有不同程度的开花提前和凋谢延迟,其中以CaCl2160 mg·L-1+ASA80 mg·L-1处理效果最佳,其开花时间比对照平均提前4.2 d,花延迟凋谢5.3 d,总观赏期延长9.5 d。
- 刘萍乔裕龙丁义峰邵晓琪刘旭丹张妍刘骨挺张怡青
- 关键词：菊花花期抗坏血酸氯化钙生理生化
- 磁微粒化学发光法测定牛乳中呋喃它酮代谢物抗生素残留方法的建立被引量：2
- 2014年
- 目的建立磁微粒化学发光法测定牛乳中呋喃它酮代谢物的方法。方法将呋喃它酮代谢物-卵清蛋白偶联物标记在磁微粒上,将发光物异鲁米诺标记在呋喃它酮代谢物-呋喃它酮代谢物单克隆抗体,通过建立呋喃它酮代谢物的标准曲线,定量检测呋喃它酮代谢物。采用建立的方法测定60份牛乳,并与酶联免疫法检测试剂盒进行比较。结果采用磁微粒化学发光法测定牛乳中呋喃它酮代谢物的灵敏度为0.01 ng/ml,精密性〈10%,与呋喃它酮代谢物的类似物的交叉反应〈0.5%,回收率在95%-103%。结论磁微粒化学发光法测定牛乳中呋喃它酮代谢物具有灵敏度高、特异性强、反应速度快的特点,可自动化定量监测呋喃它酮代谢物,具有广阔的应用前景。
- 郭兰英万东山张怡青王云龙
- 关键词：化学发光法
- 麻疹病毒N蛋白原核表达纯化条件的优化被引量：1
- 2013年
- 通过构建重组表达质粒,诱导表达纯化麻疹病毒N蛋白.将麻疹病毒N蛋白基因片段与载体pET-32a(+)相连接,通过PCR方法扩增获得重组质粒pET-32a(+)/N,然后将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)内,并优化诱导表达时间、温度、诱导剂浓度等条件.SDS-PAGE和Western blot蛋白印迹检测表明,麻疹病毒N蛋白分子质量约为60 kD,表达产物用Ni-NTA亲和层析和DEAE纯化后,纯度达90%.
- 侯丹丹王云龙张怡青孙新城李玉林米海王继创程蕾
- 关键词：麻疹病毒核壳蛋白原核表达蛋白纯化
- 一种改进的分泌抗半抗原抗体杂交瘤细胞株筛选方法
- 2014年
- 目的:研究解决半抗原分子单克隆抗体制备技术路径中遇到的在阳性杂交瘤细胞株筛选时无法排除载体蛋白间交叉反应影响的问题,以半抗原去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)为例。方法:在NE完全抗原免疫小鼠实施细胞融合后,分别包被牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、BSA-NE、OVA-NE等4种不同抗原的酶标板平行检测细胞培养上清液;挑选BSA、OVA检测结果为阴性,BSA-NE、OVA-NE检测结果为阳性的孔内细胞进行克隆化筛选单克隆细胞。结果:本筛选方法可一次性从8板96孔板中筛选到13个符合要求的阳性孔,经3次克隆化后获得6株特异性强的杂交瘤细胞株。结论:本方法避免了载体蛋白间交叉反应对筛选的影响,改进了传统的单一指标筛选方法,筛选效率更高。
- 王云龙段江波李恒思王霈毛烈张怡青王国强王继创
- 关键词：半抗原去甲肾上腺素
- 利用改良后的脾内免疫和半固体培养基法制备单克隆抗体被引量：9
- 2013年
- 旨在利用改良后的脾内免疫和半固体培养基法制备单克隆抗体,节约免疫原用量、简化试验操作、一步法筛选和克隆杂交瘤细胞、缩短单抗制备周期。通过局部麻醉小鼠脾脏区域皮肤,切开后透过腹膜直接向脾脏内注射微量抗原,使小鼠的脾细胞在短时间内产生免疫反应,尾静脉注射强化免疫后进行细胞融合;选取半固体培养基(甲基纤维素、软琼脂)法,以有限稀释法作对照筛选分泌高效价抗体的杂交瘤细胞。结果显示,与传统的单抗制备方法相比,改进后的脾内免疫操作更简单,联合尾静脉注射,使用微量免疫原在短时间内产生高效价抗体;半固体培养基甲基纤维素浓度在1.1%条件下,获得克隆团较多,阳性率较高。本研究方法适用于大规模制备单克隆抗体。
- 任瑞敏王云龙张怡青李恒思王国强李玉林王继创
- 苦参素联合富硒酵母干预大鼠肝癌变进程中TERT表达的变化被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨大鼠肝脏端粒酶逆转录酶(TERT)在肝癌演进及药物干预中表达的变化。方法:在建立大鼠肝癌变模型的基础上,用苦参素联合富硒酵母(OMT+Se)对其进行干预。分别在诱癌2、4、6、8、10、12、14、16和18周处死大鼠,病理分级后用免疫组化和Western blot法,分别显示大鼠肝端粒酶逆转录酶(TERT)表达的变化。结果:诱癌组TERT表达在诱癌各时期均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。干预组TERT在腺瘤样增生期(AH)和非典型性腺瘤样增生期(AAH)的表达均显著低于诱癌组(P<0.05)。结论:OMT+Se的联合干预抑制了癌变进程中TERT的表达,可在一定程度上延缓和推迟肝癌的发生发展。
- 刘丹丹职丽娟马明霞乔丹王美娟李安琪刘骨挺张怡青张红绪
- 关键词：肝癌苦参素富硒酵母端粒酶逆转录酶
- 建立联合检测人附睾蛋白4、糖类抗原15-3荧光层析方法被引量：1
- 2020年
- 目的:建立联合检测HE4、CA15-3荧光免疫层析的方法。方法:采用双抗体夹心法与荧光免疫层析相结合,联合检测HE4、CA15-3,并对检测时间、线性范围、最低检出限、精密性等指标进行评价。结果:检测时间15 min,HE4和CA15-3线性范围分别为15.6~1 500 pmol/L和7.8~500 U/ml;最低检出限分别为14.33 pmol/L和5 U/ml;批内与批间精密性均小于15%;准确率均在90%以上;与罗氏电化学发光法平行检测60份临床样本,相关系数均在95%以上。结论:初步建立了定量联合检测血清中HE4、CA15-3的荧光免疫层析检测方法,有较好的临床应用前景。
- 王云龙李果李玉林王继创程蕾张怡青
- 关键词：HE4CA15-3
- 胃蛋白酶原Ⅱ单抗制备及夹心ELISA的初步建立被引量：3
- 2012年
- 制备配对胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)单抗,建立人血清中胃蛋白酶原Ⅱ夹心ELISA检测方法。用胃蛋白酶原Ⅱ免疫Balb/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0融合,用HAT培养基进行筛选培养,间接ELISA检测阳性克隆,对阳性孔进行多次单克隆化,选出效价高、分泌性能稳定的杂交瘤细胞,制备腹水并进行纯化。进行单抗配对,建立胃蛋白酶原Ⅱ双抗体夹心检测方法。获得1D8、1C6、2H11、2E3等4株杂交瘤,经配对试验,确定1D8、2H11可作为夹心ELISA检测PGⅡ的单抗。成功制备出配对单抗,初步建立了PGⅡ双抗体夹心ELISA方法。
- 张红绪孙青芸王继创李恒思张怡青董彩文李玉林刘旺根景建洲王云龙
- 关键词：胃蛋白酶原单克隆抗体双抗体夹心ELISA
