孙俊魁
- 作品数：9 被引量：41H指数：4
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- 沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ表达降钙素基因相关肽基因重组载体的构建与鉴定被引量：5
- 2014年
- 目的 构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）同时表达降钙素基因相关肽（CGRP）基因重组载体.方法 选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA（siRNA）寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ;将CGRP片段与Mlu Ⅰ酶切,并与末端羟基化的线性质粒pGFP-V-RS重组连接,得到重组载体pGFP-V-RS-exCGRP.将获取的CGRP基因片段连接入线性化重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP.收集第3代HEK-293细胞,将细胞分为4组：CON组：转染空载体pGFP-V-RS质粒,作为对照；SI组：转染重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ质粒；EX组：转染重组pGFP-V-RS-exCGRP质粒；DOU组：转染重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP质粒.每组电极杯中加入5x106个细胞,并分别加入上述质粒2.5μl,给予直流电低压脉冲1次,时间15 ms.培养48 h后收集各组细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blot检测细胞内PPAR、CGRP mRNA及蛋白的表达.结果 重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP经酶切鉴定及测序结果与设计完全一致.电转染HEK-293细胞后,DOU组细胞PPARγ基因呈低表达,PPARγmRNA与其蛋白的相对表达量为0.036±0.003、0.108 ±0.031,与EX组（0.156±0.014、0.778±0.103）及CON组（0.148±0.014、0.742 ±0.143）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与SI组（0.054±0.005、0.135 ±0.039）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.DOU组细胞CGRP基因呈高表达,CGRP mRNA与其蛋白的相对表达量为1.144±0.106、1.244±0.184,与SI组（0.320±0.030、0.370±0.089）及CON组（0.444 ±0.041、0.274±0.062）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与EX组（1.021 ±0.095、1.221±0.181）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 成功构建出沉默PPARγ基因并表达CGRP基因的重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP,能够有效阻断PPARγ基因表达,同时促
- 王义生李宁博李劲峰施佳辰孙俊魁李月白赵国强
- 关键词：RNA干扰降钙素基因相关肽
- 带股方肌蒂的骨瓣移植术治疗成人股骨头缺血性坏死的疗效被引量：7
- 2015年
- 目的 观察采用带股方肌蒂的骨瓣移植术治疗成人股骨头缺血性坏死的临床效果. 方法 回顾性分析郑州大学第一附属医院骨科自2006年8月至2013年6月住院的355例因股骨头坏死行带股方肌蒂的骨瓣移植术患者的手术相关资料,按照世界骨循环研究学会（ARCO）分期,Ⅰ-C期41例、Ⅱ-A期126例、Ⅱ-B期115例、Ⅱ-C期62例、Ⅲ-A期6例、Ⅲ-B期5例,参照百分法评价该术式的疗效. 结果 术后所有患者获得门诊随访,随访1 - 8（4.3±1.8）年.与手术前相比,术后关节疼痛、关节功能、关节活动度及X线表现较术前均有显著改善.各年龄段患者愈合时间总体比较差异有统计学意义（P＜0.05）,随年龄的增长,愈合时间逐渐延长.与手术前相比,各期别患者术后评分均明显上升（P＜0.05）.Ⅰ-C期、Ⅱ-A期、Ⅱ-B期、Ⅱ-C期、Ⅲ-A期、Ⅲ-B期的优良率分别为98.5％、98.0％、92.3％、89.7％、83.5％、81.3％,总体优良率为93.8％.结论 带股方肌蒂的骨瓣移植术是治疗成人股骨头坏死的一种有效手术方法,效果肯定.
- 张弛孙俊魁王秀利王义生
- 关键词：股骨头缺血性坏死骨移植
- GJA1在骨关节炎软骨细胞中表达及作用机制研究
- 2024年
- 目的通过筛选骨关节炎(OA)中差异表达离子通道相关基因(IRGs), 为其治疗提供新策略。方法使用骨关节炎软骨细胞单细胞转录组测序数据(HRA002569)和软骨组织转录组测序数据(GSE168505), 分析323个IRGs表达情况, 筛选到1个骨关节炎上调的离子通道相关基因GJA1(编码connexin 43蛋白, CX43)。对应激型软骨细胞进行拟时序分析, 解析GJA1在不同状态应激型软骨细胞的生物学功能。通过文献检索, 筛选CX43抑制剂;利用alphafold3和RFdiffusion方法, 设计CX43结合短肽。使用Wilcoxon秩和检验进行差异表达检验, 使用Bonferroni法进行P值校正。结果通过OA单细胞和常规转录组数据分析, 与323个IRGs取交集, GJA1在OA患者受损软骨细胞中显著上调(log2FC=0.278, 校准P<0.01)。GJA1在OA发展中起重要作用。文献检索结果显示氯苯吩嗪可能是CX43特异性抑制剂;利用机器学习方法, 设计4条结合短肽靶向抑制CX43, 为OA治疗提供新策略。结论 GJA1在OA患者应激型软骨细胞中表达上调, 与OA发展和疼痛相关。
- 孙俊魁邱赞王新威李劲峰史健翔刘宏建
- 关键词：骨关节炎软骨细胞离子通道
- 联合调控CGRP和PPARγ基因的重组载体构建与鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的构建与鉴定联合调控降钙素基因相关肽（CGRP）和过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPARγ）基因的重组载体。方法将CGRP基因完整ORF克隆，设计其两端带MluI酶切位点，与TGFP融合蛋白表达单元间用一段柔性链连接，CGRP基因ORFcDNA纯化后与线性化pGFP-V-RS载体连接；按照siRNA的设计原则，设计靶向PPARγ的siRNA寡核苷酸靶序列，将发卡样siRNA寡核苷酸靶序列退火后克隆入线性化pGFP-V-RS载体；再在此载体中克隆入CGRPORFcDNA片段。进而将此3个质粒做酶切及测序鉴定。结果表达CGRP基因的pG-FP-V-RS-exCGRP、沉默PPARγ基因表达的pGFP-V—RS-siPPARγ和表达cGfuP且同时沉默PPARγ的pGFP—V-RS-siPPARγ-exCGRP，经酶切及测序鉴定的结果与设计均完全一致。结论成功构建出联合调控CGRP表达和沉默PPARY的双基因重组载体。
- 李岱峰李劲峰孙俊魁王义生
- 关键词：降钙素基因相关肽
- 人工全髋关节置换术治疗髋关节发育不良早期疗效被引量：2
- 2012年
- 目的探讨人工全髋关节置换术治疗髋关节发育不良的早期治疗效果。方法对25例（30髋）髋关节发育不良继发骨关节炎的成年患者行人工全髋关节置换术，术前平均Harris评分40．7分（34～51分），术前均存在不同程度的下肢肢体短缩。所有患者术后半年采用Harris评分，评估髋关节功能，并行髋关节X线检查了解髋关节旋转中心及肢体长度恢复情况。结果所有患者获得随访，术后半年平均Harris评分94．7分（92～97分），与术前Harris评分运用SPSS13．0进行方差检验，差异有统计学意义（P〈0．01），髋关节旋转中心及肢体短缩均获得满意恢复。结论人工全髋关节置换术治疗髋关节发育不良可取得较好的早期疗效。
- 孙俊魁王义生王秀利张弛
- 关键词：髋关节发育不良成年人工全髋关节置换术早期疗效
- 精确预测髋臼杯型号的数字X线片放大率测量方法被引量：3
- 2012年
- 目的评价采用圆形参照物与髋关节中心同水平且距离投照中心相等放置进行数字x线放大率测定的精确性，为初次全髋关节置换术前精确预测髋臼假体型号提供参考。方法对2010年6月至2010年9月接受初次生物全髋关节置换术的32例（34髋）拍摄术后骨盆正位数字x线片，并通过不同位置的圆形参照物进行x线放大率精确性评价。拍摄全髋关节术后标准骨盆正位片时，试验组将一枚一元硬币作为参照物放置于术倒大转子至股骨外髁连线同水平的大腿内侧位置，并使其与股骨头中心距球管投照中心的距离相等。同时于同侧大转子对应外侧皮肤放置一枚一元硬币作为对照组。以股骨头假体对应x线放大率作为标准，对两组硬币对应x线放大率行对比分析。采用LSD—t检验进行统计学分析，检验水准饯=0．05。结果试验组与标准组之间放大率比较差异无统计学意义（P=0．924），对照组与标准组之间放大率比较差异有统计学意义（P=0．049）。试验组对标准参考值的平均误差为1．8％，最大误差为4．0％，对照组对标准参考值的平均误差为8．5％，最大误差为16．0％。试验组误差的标准差为2．3％，对照组误差的标准差为7．4％。结论以圆形参照物并与髋关节等距离且等水平放置进行数字x线放大率的测量方法是一种操作简便、高精确度的测量方法，可为准确预测初次全髋关节置换术中髋臼假体型号提供可靠参考。
- 周绪光李军伟王义生杨广辉孙俊魁吴强
- 关键词：全髋关节置换
- 全髋置换术治疗髋关节发育不良伴骨关节炎34例报告被引量：19
- 2012年
- [目的]研究全髋置换术治疗髋关节发育不良伴骨关节炎的方法及疗效。[方法]自2004年10月～2009年10月,对34例(41髋)髋关节发育不良伴骨关节炎的成年患者进行了人工全髋关节置换术,其中女性27例32髋,男性7例9髋,平均年龄5 7岁(35～76岁)。按Crowe分型,Ⅰ型16例19髋,Ⅱ型12例14髋,Ⅲ型6例8髋,术前平均Harris评分(43.5±10.5)分。[结果]手术出血量平均350 ml(200～600 ml),输血量平均230 ml(0～600ml),引流量平均200 ml(110～450 ml),手术时间平均100 min(85～130 min),术后平均Harris评分(94.5±3.2)分,较术前有明显提高(P<0.05),优良率达95%。术后平均随访4.8年(2～7年),未发现感染、无菌性松动、假体下沉、异位骨化等并发症。[结论]对于髋关节发育不良伴骨关节炎的成年患者,全髋置换术是一种较好的治疗方法。
- 孙俊魁王义生李军伟张弛
- 关键词：髋关节发育不良骨关节炎人工全髋关节置换术
- 重组人降钙素基因相关肽逆转录病毒对人骨髓间充质干细胞增殖与成骨活性的影响被引量：5
- 2013年
- 目的 将重组人降钙素基因相关肽α（hCGRPα）逆转录病毒载体（pLNCX2-hCGRPα）感染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,观察其对hBMSCs增殖与成骨活性的影响.方法 采用Ficoll淋巴细胞分离液梯度离心法获得自体原代hBMSCs并传代保存.将重组逆转录病毒pLNCX2-hCGRPα感染第2代hBMSCs.细胞分3组：（1）实验组：pLNCX2-hCGRPα感染hBMSCs.（2）空载体组：空载体pLNCX2感染hBMSCs；（3）正常对照组：正常培养hBMSCs,不给予特殊处理.实验7d采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测细胞内hCGRPα基因mRNA与蛋白表达,1 ～7d采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,14 d检测细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性值与培养液骨钙素含量,7d检测细胞层粘连蛋白（LN）.结果 实验组细胞中表达hCGRPα mRNA,而空载体组和正常对照组细胞不表达.与空载体组和正常对照组比较,实验组细胞表现出较高增殖率（P＜0.05）.实验组细胞ALP活性值、LN、培养液骨钙素含量分别为（119.33±11.95） U/100 mg蛋白、（12.11±1.56） μg/L、（1.123 ±0.115） μg/L,均高于空载体组[（66.16±6.82） U/100 mg蛋白、（7.32±0.98）μg/L、（0.602 ±0.097） μg/L和正常对照组[（67.73±7.31） U/100 mg蛋白、（6.46±1.41） μg/L、（0.498±0.109） μg/L],差异均有统计学意义（P＜0.05）,而空载体组和正常对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 重组hCGRPα逆转录病毒成功转入hBMSCs,并表达hCGRPα基因而促进hBMSCs增殖和增强细胞的成骨活性.
- 王义生王宸王亚寒孙俊魁李劲峰赵国强李月白
- 关键词：重组逆转录病毒降钙素基因相关肽骨髓间充质干细胞成骨活性
- 人工全髋关节置换术治疗髋关节发育不良
- :研究人工全髋关节置换术治疗髋关节发育不良的方法及疗效. 方法:自2006年9月至2011年4月,对31例(36髋)髋关节发育不良继发骨关节炎的成年患者进行了人工全髋关节置换术,其中女性25例29髋,男性6例7髋,...
- 王义生孙俊魁李军伟张弛王秀利
- 关键词：髋关节发育不良人工全髋关节置换术临床疗效评价指标
