姜志龙
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
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- 用聚合酶链反应检测畸形胎儿组织中及不良生育史妇女血、羊水、绒毛标本中Epstein-Barr病毒
- 1993年
- Epstein-Barr(EB)病毒感染与致畸和生育异常的关系已有报道,本文根据EB病毒基因结构特点,在EB病毒BamHI酶解后的W片段内合成一对引物,由此引物扩增的PCR产物长度较短,为154个碱基,以提高EB病毒的阳性检出率,同时建立了合适的PCR反应条件,并在国内首次用此法对11例畸形胎儿组织及72例具不良生育史妇女分别取血及羊水、绒毛标本中的EB病毒进行了检测。结果表明,11例畸胎组织中有1例在其胎盘组织中检出EB病毒DNA,12例有不良生育史妇女血标本中有1例EB病毒DNA检测阳性,而60例有过不良生育史妇女再次妇娠后取的羊水、绒毛标本中有1例羊水中检测出EB病毒DNA,上述结果提示在畸胎组织及不良生育史妇女体内存在有EB病毒感染,阳性率虽不高但对其与致畸及生育史的关系值得进一步证实与探讨。
- 卢健姜志龙徐荣婷陈诗书
- 关键词：聚合酶链反应
- 鼻咽癌中Epetein－Barr病毒基因结构特点
- 1995年
- 鼻咽癌中感染的ＥＢＶ以潜伏态存在，只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知ＢＺＬＦｌ基因和ＢａｍＨＩＥＺ片段内部分基因对ＥＢＶ的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增（ＰＣＲ）法扩增ＢＺＬＦｌ基因外显子－１序列，并用序列分析法研究了该基因结构特点。此外，检测了ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失，结果发现２１例鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中，ｌｌ例有ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失，长２．９９ｋｂ，与潜伏态存在的ＲａｊｉＥＢＶ类似。提示鼻咽癌小的ＥＢＶ以潜伏态存在，与ＮＰＣ发病有关。
- 姜志龙卢健陈诗书
- 关键词：鼻咽肿瘤EB病毒基因结构聚合酶链反应
- 关于腺病毒载体的免疫原性问题被引量：6
- 1998年
- 关于腺病毒载体的免疫原性问题姜志龙陈诗书（上海第二医科大学人类基因治疗研究中心，上海２０００２５）关键词腺病毒载体免疫原性基因治疗近年来，以腺病毒为基因转移载体的基因治疗研究正广泛深入地开展，这是因为腺病毒具有逆转录病毒载体不具备的诸多优点。首先腺病...
- 姜志龙陈诗书
- 关键词：腺病毒载体免疫原性基因治疗
- 脂蛋白脂肪酶的分子生物学被引量：4
- 1995年
- 脂蛋白脂肪酶(LPL)是一种催化乳糜微粒和极低密度脂蛋白中甘油三酯分解的糖蛋白,表达基因定位于8P^(22),由10个外显子和9个内含子组成,非编码区域存在多种遗传多态位点。其表达受到多种位点的调控。错义和无义突变是LPL缺乏症的常见突变类型。
- 姜志龙
- 关键词：脂蛋白脂肪酶基因结构基因突变
- 人FⅧ基因高效表达质粒的构建及其在Cos-7细胞中的表达被引量：4
- 1998年
- 目的：构建人ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ并观察其在Ｃｏｓ－７细胞中的表达活性。方法：采用缺失大部分Ｂ结构域的人凝血因子ⅧｃＤＮＡ（ＦⅧＤＢ），长度为４．６ｋｂ，将其插入含腺病毒序列表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋ１，构建了ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ，用脂质体介导法将其转染Ｃｏｓ－７细胞，转染后２４，４８，７２小时分别用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ法及一期法测定培养细胞中ＦⅧＤＢｍＲＮＡ及ＦⅧ的含量与活性。结果：ＲＴ－ＰＣＲ法可检测到ＦⅧＤＢｃＤＮＡ转录的ｍＲＮＡ，ＥＬＩＳＡ法测得７２小时后ＦⅧ的含量为每２４小时１８ｎｇ／１０６细胞，一期法测得活性为每２４小时０．６Ｕ／１０６细胞，相当于正常人血浆中１００μｇ／ＬＦⅧ所产生的凝血活性的６０％。结论：所构建的ＦⅧ真核表达质粒在Ｃｏｓ－７细胞中具有一定的表达活性。
- 卢健姜志龙陈诗书
- 关键词：血友病A真核表达质粒COS-7细胞
- 腺病毒载体介导的血友病A基因治疗的实验研究被引量：1
- 1999年
- 目的构建含人凝血因子Ⅷ基因（hFⅧ）的高效表达重组腺病毒载体。方法将含hFⅧ-cDNA（B肽缺失型）插入质粒pAdCMV－Linkerl多克隆位点，形成含SV40内含子结构的重组质粒pA－dl－hFⅧ。证实目的基因能在COS－7细胞中表达有凝血活性的FⅧ因子后，分别与pBHG10共转染至293包装细胞，经同源重组，形成E1／E3缺失型重组腺病毒AdI－hFⅧ。经鉴定和纯化，用于体内外基因转移和表达的研究。结果该病毒载体能在COS－7、A549等各种离体细胞高效转移，并表达hFⅧ蛋白。经家兔耳缘静脉注射后，hFⅧ因子表达量在l～2周内升至最高，并维持低水平至少4周。结论腺病毒介导的人B肽缺失型凝血因子Ⅷ基因能在体内外有效地转移和表达，该研究也为血友病A基因治疗提供了一条新途径。
- 姜志龙卢健徐悦陈诗书
- 关键词：腺病毒载体血友病A基因治疗
- 复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达被引量：3
- 1999年
- 为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统，首先构建了含ＦⅧ（Ｂ结构域缺失型）的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ和插入内含子结构的ｐＡｄＩ－ｈＦⅧ，经脂质体介导，证明两质粒的目的基因均能在ＣＯＳ－７细胞中表达有凝血活性的ＦⅧ因子，其中经纯化的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ与ｐＢＨＧ１０经脂质体介导，共转染至２９３包装细胞，经同源重组和Ｅ１蛋白反式互补，形成Ｅ１／Ｅ３缺失型重组腺病毒载体颗粒Ａｄ－ｈＦⅧ．ＰＣＲ检则到病理２９３培养液上清的病毒ＤＮＡ中具有目的基因扩增片段，证明病毒ＤＮＡ含有ＦⅧ基因．经扩增、纯化、滴度测定，用于感染离体细胞ＣＯＳ－７、Ａ５４９、Ｌ９２９、２９３．证实该病毒能在上述细胞中高效转移和表达目的基因，其表达量具有一定范围内的剂量依赖性．ＣＯＳ－７细胞中，ＭＯＩ＞１０００时，有细胞毒效应，表达量反而下降．经耳缘静脉注射Ａｄ－ｈＦⅧ至家兔后，１～４周能测到一定水平的ＦⅧ蛋白，１周内升至最高峰．免疫组化研究表明感染的离体细胞和家兔肝等组织均有ＦⅧ表达，其中肝脏表达最高．
- 姜志龙卢健陈诗书
- 关键词：腺病毒载体基因治疗甲型血友病
