刘利鹏
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：河北大学药学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>
- 适于标记核酸适配子胶体金的制备及性能被引量：4
- 2014年
- 为了获得适于标记寡核苷酸适配子的胶体金,对制备工艺条件进行了优化：20 mL 0.1 g/L氯金酸溶液中添加10 g/L柠檬酸三钠500 μL,pH=3.0,初始沸腾时间小于4 min,加入还原剂后反应时间为6 min.通过紫外可见光谱扫描和透射电镜对其性能进行鉴定,获得了分散均匀、直径15～20 nm的胶体金颗粒,可准确标记核酸适配子,且将胶体金标记的链霉素适配子与半抗原小分子链霉素进行反应,可对链霉素进行定性和半定量检测,满足利用胶体金标记适配子检测靶物质的需要.
- 解瑶刘中成张艳芬赵丽健刘利鹏
- 关键词：胶体金
- Cε3-Cε4结合肽筛选及鉴定
- 2014年
- 为了获得免疫球蛋白E(IgE)特异性结合肽,采用固相筛选法,以Cε3-Cε4为靶蛋白,利用噬菌体随机多肽展示技术进行筛选,4轮筛选后,经ELISA鉴定获得19个阳性单克隆噬菌体,阳性率达38%,测序并翻译后共获得11个结合肽.竞争抑制性实验证明P7,P13,P20与Cε3-Cε4蛋白的结合能力较强,细胞水平分析表明:结合肽P7,P20可阻止IgE与其受体结合.本研究将为进一步探索IgE结合肽生物学功能奠定基础,并为设计治疗变态反应性疾病的小分子药物提供参考.
- 张艳芬刘利鹏赵立健时海浪刘中成
- 一种适用于SELEX技术的单链DNA制备方法被引量：2
- 2014年
- 为了建立一种简单、高效制备高纯度单链DNA方法,用于SELEX技术筛选过程中次级文库的筛选,对制备链霉亲和素磁珠的实验条件进行了优化,确定了对称PCR产物与链霉亲和素磁珠偶联的最佳时间和饱和度,并验证了不同浓度NaOH对解链效果的影响,建立了适于SELEX技术的单链DNA制备体系。利用荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳对本实验所建立方法及传统不对称PCR法制备单链DNA的回收效率和纯度进行了比较,结果表明在最优实验条件下用磁性分离法制备的单链DNA纯度及回收效率均显著高于不对称PCR法。
- 刘中成解瑶张艳芬赵丽健刘利鹏肖敏华
- 关键词：SELEX技术单链DNA
- 大鼠sFcγRIIb基因原核表达及活性鉴定
- 2016年
- 旨在克隆大鼠FcγRIIb基因,构建s FcγRIIb原核表达体系,制备重组大鼠s FcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因,构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,复性后利用Western blotting、ELISA进行鉴定。结果显示,成功克隆大鼠s FcγRIIb基因,构建原核表达载体s FcγRIIb-p ET17b,转化大肠杆菌BL21(DE3)。通过对表达体系进行优化,确定IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导时间为4 h时蛋白表达效率最高,重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经8 mol/L尿素溶解,利用Ni-NTA柱亲和层析获得了较高纯度的重组蛋白。采用梯度透析复性法对s FcγRIIb进行复性后,经Western blotting、ELISA与竞争性ELISA鉴定,重组蛋白s FcγRIIb可被特异性抗体所识别且与Ig G具有结合能力。成功建立了大鼠FcγRIIb基因原核表达体系,制备了具有生物学功能的重组蛋白。
- 张艳芬刘利鹏陈瑶崔哲毕克维王南南刘中成
- 关键词：抑制性受体原核表达重组蛋白
- 核酸适配子在小分子检测中的应用
- 2015年
- 核酸适配子是利用配体指数级富集系统进化技术从单链寡核苷酸文库中筛选出的与靶物质有高亲和力和特异性的寡核苷酸,它已成为小分子化合物研究的有效工具,在分析化学领域逐渐成为人们研究的热点。当前已筛选了许多小分子物质特异性适配子,并基于适配子开发了一系列小分子物质检测系统。本文主要对SELEX筛选流程、小分子物质核酸适配子筛选特征与方法以及以核酸适配子为基础开发的电化学法、荧光法、胶体金比色法、酶联适配子免疫法等在小分子物质检测中的应用进行了综述。
- 张艳芬解瑶王南南赵丽建刘利鹏刘中成
- sFcγRⅡb蛋白结合肽的筛选与鉴定
- 2019年
- FcγRⅡb是免疫球蛋白G受体(FcγR)中唯一的抑制型受体,在免疫反应的负性调节方面发挥重要作用.为了筛选sFcγRⅡb的蛋白结合肽,以重组sFcγRⅡb蛋白为靶分子,采用噬菌体肽库展示技术对sFcγRⅡb结合肽进行筛选.利用ELISA鉴定每轮洗脱噬菌体与sFcγRⅡb蛋白亲和力,经过4轮筛选,挑取40个噬菌体克隆进行序列测定,获得28种不同的12肽序列.经ELISA法鉴定噬菌体与sFcγRⅡb蛋白结合活性,得到sFcγRⅡb蛋白高特异性、高亲和力结合肽FHKMPWYMSMYY,为进一步研究FcγRⅡb的作用机制和探索结合肽的功能提供实验基础.
- 徐臻臻刘利鹏张艳芬崔哲崔哲刘中成
- 关键词：结合肽
- 基于胶体金检测核酸适配子与蛋白相互作用的新方法被引量：4
- 2015年
- 基于核酸适配子对靶蛋白的高特异性及胶体金比色法的高度灵敏性,建立了一种分析核酸适配子与靶蛋白亲和力以及简便快速检测蛋白质的新方法.核酸适配子保护的胶体金在高盐条件下可保持稳定,靶蛋白与胶体金竞争结合适配子,使胶体金发生聚沉,呈现颜色变化,可通过检测A520值分析适配子与靶蛋白的亲和力以及蛋白浓度.通过对适配子浓度、靶蛋白浓度、共孵育时间、竞争反应时间和氯化钠浓度等关键因素进行优化,确定了最佳检测条件.
- 刘中成赵丽健刘利鹏张艳芬王南南陈瑶王向欢
- 关键词：靶蛋白胶体金
