丁宁
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
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- 米非司酮抑制人子宫内膜基质细胞增殖被引量：5
- 2014年
- 目的在改良子宫内膜细胞原代分离培养方法的基础之上,探讨米非司酮对原代分离培养的人子宫内膜基质细胞增殖的抑制作用。方法利用改良后的"二次消化法"分离培养增殖期人子宫内膜基质和上皮细胞,进行细胞形态学观察,并通过流式细胞术检测人子宫内膜基质和上皮细胞的波形蛋白和角蛋白表达阳性的细胞比率,计算分离培养的基质和上皮细胞的纯度;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测米非司酮对原代分离培养人子宫内膜基质细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果原代分离培养的基质细胞较上皮细胞生长迅速。流式细胞检测结果显示,分离培养的基质细胞波形蛋白阳性率达97%,上皮细胞角蛋白阳性率达90%。米非司酮处理人子宫内膜基质细胞2d或3d后,结果均显示,随着米非司酮浓度增加,基质细胞的细胞抑制率(IR)逐渐升高。米非司酮作用基质细胞2d后,50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);米非司酮作用3d后,25、50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过对IR值进行直线回归分析,结果表明:米非司酮处理2d和3d对原代人子宫内膜基质细胞的IC50分别为52.85μmol/L和86.46μmol/L。结论改良后的"二次消化法"可获得高纯度人子宫内膜基质细胞和上皮细胞。米非司酮对原代人子宫内膜基质细胞有抑制作用,并呈时间和剂量依赖效应。
- 郭永赵爱华苏晨丁宁张瑶楠刘庆王乾兴
- 关键词：米非司酮人子宫内膜细胞细胞增殖半数抑制浓度
- 网络直播著作权侵权法律规制研究
- 网络直播是互联网时代的朝阳产业,呈现出一片繁荣之势。作为数字环境发展下的产物渗透到公众生活的方方面面并成为大众娱乐的新宠。直播在带来经济效益的同时也给传统著作权法提出了新挑战。直播内容涉及范围广泛,传统著作权暴露出对新型...
- 丁宁
- 关键词：网络直播广播权信息网络传播权向公众传播权反不正当竞争
- Spyda基因过表达转基因小鼠品系的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立Spyda基因过表达转基因小鼠品系用于深入研究Spyda基因的功能。方法利用Gateway技术构建Spyda表达载体,通过DNA显微注射的方式获得Spyda基因过表达的首建鼠。首建鼠与野生型鼠杂交,所得子代中的阳性鼠同窝交配,已传3代以后的阳性小鼠经SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测外源基因的起始模板量,通过与杂合子比较来预测小鼠的基因型,再用传统育种方式验证SYBR Green实时荧光定量PCR的结果。结果获得7只首建鼠,通过与野生型鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,传至第3代,经实时荧光定量PCR方法筛选出4只纯合子的小鼠,经测交验证,其与正常小鼠交配所生的后代均为阳性,证明实时定量PCR的结果是正确的。建立了2个独立的Spyda转基因小鼠纯合子品系。结论建立了稳定遗传的纯合子Spyda基因过表达转基因小鼠品系,可作为工具鼠进一步深入研究Spyda基因的功能。
- 张瑶楠丁宁石心泉贾孟春刘美玲
- 关键词：转基因小鼠实时荧光定量PCR纯合子
- 一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的方法被引量：1
- 2013年
- 目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体(AFP-McAb)杂交瘤细胞系的方法。方法以常规和改良两种方式同时免疫8～12周Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合并行次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。用间接酶链免疫吸附试验法(ELISA)筛选阳性克隆株,并建立细胞系。结果在较短时间内,改良法能获得高效价的免疫抗体,与常规免疫法相比有极显著差异(P<0.01),同时改良法的细胞融合率和抗体阳性率也显著高于常规免疫法(P<0.001)。筛选获得的高效分泌抗人AFP-McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。结论新的改良疗法优化了常规的McAb制备中动物免疫程序,并能成功筛选出AFP-McAb杂交瘤细胞系。
- 丁宁石心泉郭永张瑶楠邹检平
- 关键词：甲胎蛋白杂交瘤单克隆抗体
- 脆性X智力低下蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中对脆性X智力低下蛋白(FMRP)进行重组表达,获得高产量及高纯度的可溶性重组蛋白。方法:以人脑cDNA文库为模板,PCR扩增FMR1基因后将其克隆至融合表达载体pGEX-6P-1中,重组载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,并用IPTG进行诱导表达。应用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和层析纯化GST-FMRP融合蛋白,并以SDS-PAGE电泳和Westernblot对融合蛋白的表达进行检测。结果:亲和纯化后的融合蛋白经FMRP及GST单抗分别进行Westernblot鉴定为GST-FMRP融合蛋白。结论:大肠杆菌中FMRPISO10的重组表达产量高,纯化得到可溶性重组蛋白,为FMRP抗体的制备及FXS检测试剂盒的开发奠定基础。
- 李芳芳郭永崔芳芳丁宁张嵘邹检平
- 关键词：脆性X综合征蛋白纯化
