黄丽娜
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家公益性行业科研专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 棉蚜P450 CYP6CY3的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：5
- 2017年
- 【目的】克隆得到棉蚜(Aphis gossypii)P450 CYP6CY3,将其开放阅读框(ORF)在原核细胞中进行表达,纯化融合蛋白,多次免疫小鼠获得CYP6CY3多克隆抗体,为进一步分析CYP6CY3在棉蚜不同组织部位的分布及其在抗性中的作用打下基础。【方法】利用RT-PCR及3′-RACE技术克隆获得CYP6CY3的ORF,并对其进行生物信息学及系统进化分析。构建重组质粒pET32a-CYP6CY3,转化大肠杆菌transetta(DE3)进行原核表达,利用切胶回收法获得纯化的融合蛋白,继而用纯化得到的融合蛋白免疫昆明白小鼠制备鼠抗棉蚜CYP6CY3多克隆抗体;ELISA检测鼠抗CYP6CY3蛋白多克隆抗体的效价,并通过Western blot及免疫组化检测该抗体特异性。【结果】棉蚜CYP6CY3 ORF长1 266 bp,编码421个氨基酸,预测蛋白分子量为48.8 k D,理论等电点为8.99,不含有信号肽序列,属亲水性蛋白;氨基酸序列包括W×××R、AG××T、E××R、P××F×PE/DRT和F××G×××C×G 5个P450家族的特征基序。通过NCBI Blastx进行同源序列的比对分析,棉蚜CYP6CY3氨基酸序列与豌豆长管蚜(Acyrthosiphon pisum)(XP_001948581.1)氨基酸一致性最高,达到81%,与麦双尾蚜(Diuraphis noxia)(XP_015379193.1)一致性为79%,与桃蚜(myzus persicae)(AHB52749.1)氨基酸序列一致性为76%,4种蚜虫的氨基酸序列都含有位于螺旋K中参与稳定核心结构的E××R完全保守序列及P450基因标志性的F××G×××C×G(358—367)血红素结合位点的共有序列。使用MEGA5软件构建系统进化树,显示棉蚜、豌豆长管蚜、麦双尾蚜及桃蚜聚为一类,亲缘关系较近。通过原核表达得到的CYP6CY3融合蛋白的相对分子量约为66 k D,基于纯化的CYP6CY3重组蛋白多次免疫昆明白小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测获得的鼠抗CYP6CY3抗体效价达到1﹕409 600。Western blot和免疫组化进一步证实,该抗体既能与异源表达的CYP6CY3蛋白特异性结合,也能与棉蚜组织中存在的天然CYP6CY3蛋白特异�
- 魏原杰王亚美黄丽娜刘宁赵洁艾新宇刘小宁
- 关键词：棉蚜原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 棉铃虫β-actin基因的克隆、表达及多克隆抗体制备被引量：3
- 2015年
- 克隆获得了棉铃虫β-actin基因,生物信息学分析表明,基因序列长1 131 bp,编码376个氨基酸,理论分子量为41.77 k D,理论等电点5.16。氨基酸序列与其他物种肌动蛋白比较有98%-99%的一致性,与鳞翅目的家蚕具有99%的一致性。分析棉铃虫β-actin和小家鼠β-actin的抗原决定簇位点,发现两者抗原表位有70.63%的一致性。同时原核表达、纯化了棉铃虫β-actin蛋白,Western-blot结果表明表达正确。将纯化后的蛋白免疫ICR小鼠4次后,小鼠抗血清效价最高可达388 800,并且能与天然棉铃虫蛋白特异性结合。
- 黄丽娜程婷婷王新绘魏原杰赵洁李金耀刘小宁
- 关键词：棉铃虫Β-ACTIN克隆原核表达多克隆抗体
- 棉蚜细胞色素P450 CYP6J1的克隆与表达
- 2016年
- 为了深入了解细胞色素P450 CYP6J1蛋白的结构和功能,本实验克隆获得了棉蚜Aphis gossypii P450CYP6J1基因,对该基因进行信息学及原核表达分析,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达结果,并用Western-blot进行验证。结果表明,P450 CYP6J1序列长1 398 bp,编码氨基酸数为465,理论分子量为53.67 k D,理论等电点为8.80。氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框,且没有信号肽。同源性分析表明,棉蚜c DNA序列推导的氨基酸与豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的保守性最为接近,一致性可达92%。在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得的His-CYP6J1蛋白,并用Western-blot检测目的蛋白大小正确。这些研究结果为棉蚜P450 CYP6J1多克隆抗体制备提供了基础。
- 王亚美黄丽娜艾新宇魏原杰刘小宁高希武
- 关键词：棉蚜P450克隆蛋白表达
- 活体电穿孔法辅助核酸免疫制备小鼠抗棉铃虫精氨酸激酶的抗体被引量：3
- 2014年
- 目的利用活体电穿孔法将携带有棉铃虫精氨酸激酶(HarmAK)基因的表达质粒导入昆明小白鼠制备抗体。方法在构建重组质粒pcDNA3-HarmAK并测序验证序列的正确性后,利用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法将重组质粒pcDNA3-HarmAK导入到小鼠体内,免疫5次后,用ELISA检测确定抗体的效价,并对抗体的特异性进行Western blot法检测。结果小鼠抗HarmAK血清的效价达到1∶40 000,Western blot法检测的结果显示此抗血清能与融合蛋白His-HarmAK和棉铃虫总蛋白中的AK蛋白特异性结合。结论采用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法制备了高滴度和特异性的小鼠抗HarmAK的抗体。
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- 关键词：棉铃虫精氨酸激酶抗体
- 精氨酸激酶研究进展被引量：6
- 2015年
- 能量代谢是生物体重要的生命活动之一。精氨酸激酶广泛分布于低等与高等无脊椎动物中,现已经在直翅目、蜚蠊目、鞘翅目、鳞翅目、双翅目、膜翅目等多种昆虫中得到证实,是无脊椎动物中能量代谢的重要酶之一。随着研究的深入,精氨酸激酶的应用前景逐渐显现。对无脊椎动物体内精氨酸激酶的理化性质、表达规律及应用前景等方面的研究进展进行了综述,并提出了一些建议,以期为精氨酸激酶今后的研究做铺垫。
- 黄丽娜刘宁赵洁马纪刘小宁
- 关键词：精氨酸激酶害虫防治
- 核酸免疫制备鼠抗棉铃虫FK506结合蛋白的多克隆抗体被引量：1
- 2014年
- 利用电注射基因导入法制备小鼠抗棉铃虫FK506结合蛋白(FKBP12)的多克隆抗体,并通过Western blot验证抗体与抗原的特异性结合。构建重组质粒pc DNA3-FKBP12并测序验证序列的正确性,利用基因导入法将重组质粒pc DNA3-FKBP12注射到小鼠体内,免疫4次后用ELISA检测法确定抗体的效价,并对抗体的特异性结合进行Western blot以及免疫组化检测。结果表明,小鼠抗FK506结合蛋白血清的效价达到1∶25 600,Western blot结果显示此抗血清能与融合蛋白His-FKBP12结合,免疫组化结果表明在棉铃虫3龄幼虫不同组织中FKBP12均有表达。说明电注射基因导入法制备的小鼠抗FK506结合蛋白的抗体在滴度和特异性结合方面都达到预期要求。
- 朱燕张富春马纪黄丽娜刘小宁
- 关键词：棉铃虫多克隆抗体
- 棉蚜P450CYP6J1的克隆表达、融合蛋白的纯化、多克隆抗体的制备及鉴定
- 细胞色素P450(CYP450)是一类以血红素为辅基的B 族细胞色素超家族,是昆虫体内的一种很重要的解毒酶系,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢.该家族成员在催化反应过程中具有的高度特异性使其在...
- 王亚美黄丽娜艾新宇魏原杰刘小宁
- 关键词：棉蚜克隆蛋白表达蛋白纯化多克隆抗体免疫组织化学
