韩腾龙
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用Gateway系统构建携带Grb2-SH2基因重组慢病毒载体
- 2012年
- 目的:构建携带Grb2-SH2基因重组慢病毒载体。方法:把Grb2-SH2基因从合成的工程载体PUC-57中导到入门载体pentr-3C中,再利用LR反应重组到目的载体plenti,通过酶切和测序分析对比验证Grb2-SH2基因后,将plenti-Grb2-SH2质粒利用慢病毒转染系统转染人胚胎肾上皮细胞株293T细胞获得携带Grb2-SH2慢病毒载体。结果:构建的重组质粒经酶切及测序和分析比对鉴定正确,目的基因片段大小约为500bp;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒,转染效率约为90%。结论:成功构建转载质粒plenti-Grb2-SH2及携带Grb2-SH2基因慢病毒载体。
- 蔡忠良阴继凯韩腾龙张健鲁建国
- 关键词：重组慢病毒载体表皮生长因子受体
- pWPT-GFP慢病毒载体的改构及鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:为实现慢病毒感染后可用抗生素筛选外源基因稳定整合的细胞,我们对慢病毒载体质粒(pWPT-GFP)进行了改构。方法:将三种抗生素抗性基因(puro、hygro、neo)连同其启动子分别克隆入慢病毒载体(pWPT-GFP)。酶切鉴定载体构建正确后,将这三种改构载体分别与辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T包装细胞,收获病毒上清并感染靶细胞,使用相应抗生素筛选细胞验证抗性基因的插入。结果:成功构建了重组慢病毒载体pWPT-GFP-puro、pWPT-GFP-hygro、pWPT-GFP-neo,通过调整病毒上清的用量可以达到靶细胞100%的感染效率;用相应抗生素筛选细胞证明了抗性基因的表达。结论:我们成功改构了慢病毒载体(pWPT-GFP),从而使病毒感染后用抗生素筛选稳定整合的细胞成为可能。
- 韩腾龙王立峰张璟刘新平药立波
- 关键词：慢病毒载体改构
- 基于Gateway^(TM)系统Dec1慢病毒表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 目的利用GatewayTM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株。方法从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA。设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR),获得用于重组的Dec1目的基因全长。将目的片段克隆至入门载体(pENTRTM3C)中产生入门克隆。利用GatewayTM技术,将入门克隆中的目的片段转接于目的载体(pLenti6.3/V5-DEST)中产生表达克隆pLenti6.3-Dec1。在293T细胞中包装慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1并转染U87细胞,通过灭瘟素筛选、Western blot鉴定,获得稳定表达Dec1的U87细胞株。结果 Dec1基因全长的获取与慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1的构建经PCR和测序得到证实。用pLenti6.3-Dec1转染U87细胞后,通过灭瘟素筛选,获得稳定表达Dec1的U87细胞株。结论成功构建了pLenti6.3-Dec1慢病毒表达载体并建立稳定表达Dec1的人胶质瘤U87细胞株,为深入研究Dec1分子机制奠定了基础。
- 李晓明林伟章翔王江张璟张健韩腾龙药立波
- 关键词：慢病毒表达载体神经胶质瘤
- 雌激素受体ERbeta的克隆及重组慢病毒表达载体的构建
- 2012年
- 目的:构建含人雌激素受体ERbeta基因的重组慢病毒表达载体,为以ERbeta为干预靶点的乳腺癌相关研究奠定基础。方法:经RT-PCR扩增ERbeta基因片段,并将其连接到入门载体pENTRTM3C,然后经LR重组转入到慢病毒表达载体pLenti/V5-DEST中,进而构建含ERbeta基因的慢病毒载体,并进行基因测序鉴定和PCR鉴定。结果:pLenti-ERbeta表达载体测序结果与GenBank中ERbeta基因序列一致,并且其经PCR可扩增出ERbeta基因片段。结论:成功构建携带人ERbeta基因的重组慢病毒表达载体。
- 李江鹏赵华栋张健李燕韩腾龙何显力
- 关键词：克隆慢病毒
- 多药耐药基因MDR1慢病毒表达载体的构建、病毒包装及功能验证
- 2012年
- 目的构建MDR1基因的过表达慢病毒载体并进行病毒的包装，为进一步深入的研究MDR1基因在乳腺癌耐药中的作用提供基础工具。方法用PCR技术获得MDR1基因片段，将其连接入酶切后的慢病毒载体，转化感受态进行PCR及测序鉴定，脂质体转染293T细胞，包装成慢病毒再分别感染靶细胞MDA—MB-231和MCF-7细胞验证其生物学功能。结果成功构建MDR1慢病毒表达载体，测序证实所获取基因序列完全正确，Western印迹验证在乳腺癌MDA—MB-231和MCF-7稳转MDR1细胞系中MDR1基因高表达。通过药物杀伤实验验证稳转MDR1细胞组较对照组耐药性显著增高。结论MDR1慢病毒表达载体的成功构建及病毒包装完成为进一步深入研究MDR1基因在乳腺癌多药耐药过程中的作用奠定了基础。
- 张媛韩腾龙赖晓凤张健刘文超药立波
- 关键词：慢病毒表达载体MCF-7
