靳继德 作品数:54 被引量:142 H指数:7 供职机构: 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家科技重大专项 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素抑制血栓形成的实验研究 被引量:5 2013年 目的观察新型水蛭素衍生物谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素在体内外的抗栓作用。方法通过发色底物法体外检测谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素被凝血因子Xa裂解前后的抗凝血酶活性变化,同时通过大鼠颈动脉血栓模型和大鼠后腔静脉血栓模型,进一步验证谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素在体内的抗栓效果及其低出血的特点。结果体外实验显示,谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素只有被凝血因子裂解后,才产生抗凝血酶活性。大鼠颈动脉血栓模型和大鼠后腔静脉血栓模型实验结果显示,动物给予谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素后,血栓形成时间明显延长,血栓质量显著减小;同时对凝血参数影响较弱,动物出血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间明显低于阳性对照药水蛭素和低分子肝素。结论新型抗凝蛋白谷氨酸-脯氨酸-精氨酸-水蛭素对动、静脉血栓的形成有明显的抑制作用,且出血副作用小于水蛭素和低分子肝素,为其进一步临床实验提供了重要的参考依据。 王文文 徐向伟 赵专友 吴祖泽 靳继德关键词:水蛭素 肝素 血栓 新型复合氨基酸组合物 本发明公开了一种新型复合氨基酸组合物,它含有丙氨酰谷氨酰胺肽、适量的支链氨基酸、天门冬氨酸和牛磺酸等16种必需成份;由于谷氨酰胺溶解度较低等原因,制约了它在氨基酸注射液和全静脉营养中的应用,现市售氨基酸注射液中都不含谷氨... 徐琪寿 靳继德 杨大柳 韦京豫 郭长江 潘和平文献传递 大肠杆菌表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的分离纯化及其二聚体分析 被引量:1 2007年 采用阴离子交换和凝胶过滤色谱法纯化大肠杆菌高密度培养所表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(rSFH),经SDS-PAGE和RP-HPLC分析纯度达到98%以上,每升发酵液得率约0.7g。同时利用疏水色谱、MALDI-TOF对纯化过程中出现的rSFH同源二聚体的分析和表面疏水面积的计算及利用高效排阻色谱(HPSEC)分析NaCl、温度对rSFH的可逆二聚化行为的影响,认为疏水作用在rSFH的可逆二聚化行为中发挥着重要作用。 钟根深 于爱平 靳继德 蒋中华 吴祖泽关键词:葡激酶 水蛭素 二聚体 疏水作用 荧光定量PCR检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组DNA的残留量 被引量:5 2014年 目的:建立real—timePCR定量检测毕赤酵母基因组DNA残留量的方法,提高重组新蛭素的产品安全性。方法:选择拷贝数高且分布广泛的毕赤酵母5SrRNA基因为靶标基因设计扩增引物,提取酵母基因组DNA,稀释后作为扩增模板。以罗氏荧光定量PCR_Light Cycler 480平台为基础,建立基于SYBR Green Ⅰ荧光染料的real—timePCR的检测方法,并考察用该方法检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组残留量的灵敏度、精密度和回收率。结果:该法检测宿主DNA残留量灵敏度高,DNA浓度为0.1~1000pg/μL范围内呈现良好的线性关系,其标准曲线的误差值小于0.2;用该法对5批注射用重组新蛭素(酵母)产品中宿主基因组DNA残留量进行了测定,结果分别为0.03、2.3、0.2、0.6、0.2μg/mg。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高等优点,可用于重组产品中酵母基因组残留DNA的定量测定。 刘晶晶 郭莹莹 李艳琪 王文文 吴祖泽 靳继德关键词:荧光定量PCR 毕赤酵母 无拘束动物输液装置旋转器 本实用新型公开了一种无拘束动物输液装置旋转器的结构,以解决实验中的传导管缠绕问题,本实用新型的液体控制部分包括外接管,小针头和大针头,外接管的上端为游离端,下端与小针头的针座相连,小针头的针杆插入于大针头的针座中;传导管... 徐琪寿 杨继军 郭长江 韦京豫 靳继德文献传递 肝细胞生长因子基因修饰的人骨髓间充质干细胞促进大鼠肢体血管新生 被引量:10 2010年 目的评价肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)修饰的人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSC)体内促血管新生效应,探讨其作用机制。方法结扎Wistar大鼠右侧股动脉,建立局部肢体缺血模型。将hMSC、hMSC/Ad-HGF或PBS,通过肌肉注射接种于缺血区,21d后以对侧肢体为正常对照,进行激光多普勒灌注成像测定、HE染色和免疫组化检查,评价骨骼肌微血管密度。以MTT、Transwell及内皮细胞体外管状结构形成实验,评价hMSC/Ad-HGF对血管内皮细胞的体外增殖、迁移及成管状能力的影响。结果 21d后,hMSC/Ad-HGF和hMSC组血流灌注水平明显高于对照组(P<0.01),前者接近PBS组,显著高于hMSC组(P<0.05)。组织学分析表明,每高倍视野肌肉组织中,hMSC/Ad-HGF组微血管数量最高,PBS组和hMSC组次之,对照组最低(P<0.01)。hMSC/Ad-HGF培养上清可明显促进ECV304细胞的增殖,刺激作用高于表皮生长因子(20ng/mL,P<0.001);促进细胞跨膜迁移和管状样结构形成,强于表皮生长因子。结论 hMSC/Ad-HGF可促进血管内皮细胞的增殖、迁移及血管结构重建,从而引发血管新生效应。 刘滋康 具星爱 靳继德 秦宜德 郭子宽关键词:间充质干细胞 肝细胞生长因子 血管新生 基因转移 比色法测定复合氨基酸注射液中的N-乙酰-L-半胱氨酸 被引量:2 1999年 根据N-乙酰-L-半胱氨酸与氯化钯(PdCl2)反应,生成一种稳定的黄色化合物,我们建立了比色测定复合结晶氨基酸注射液中的NAC的方法。测定波长为375nm,检测结果重现性好,变异系数是3.9%,回收率范围在93.1%~100.2%之间,检测下限为0.163μg/ml。该方法比经典的电量滴定法灵敏度高、精确性好,较高压液相色谱法操作简便、费用低。 靳继德 徐琪寿 童旭彬关键词:比色法 乙酰半胱氨酸 氨基酸注射液 NAC 注射用重组新蛭素的质量控制研究 2016年 目的:建立注射用重组新蛭素原液、成品的质量控制方法及内控质量标准。方法:利用纤维蛋白凝块法测定注射用重组新蛭素的生物学活性,非还原SDS-PAGE和RP-HPLC测定纯度,SDS-PAGE和质谱法分析相对分子质量,免疫印迹验证目的蛋白,其余检测项目按《中华人民共和国药典》(2010年版三部)规定进行。结果:用建立的方法对注射用重组新蛭素3批原液和成品进行了检定,原液抗凝比活性均为512 ATU/mg,非还原型SDS-PAGE和HPLC检测3批原液的纯度结果均大于95%;质谱法分析3批原液相对分子质量符合7.3×103±0.7×103,SDS-PAGE分析3批原液相对分子质量符合13.2×103±1.3×103;免疫印迹表明检测条带为目的蛋白,能被抗水蛭素抗体特异性结合;其余各项指标均符合内控质量标准及《中华人民共和国药典》(2010年版三部)的要求。结论:建立的质量控制方法和内控质量标准可以用于注射用重组新蛭素的检定和质量控制。 毛赟赟 李彦英 董俏言 赵宁 李凯 靳继德 董晓杰关键词:水蛭素 生物学活性 新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究 被引量:2 2006年 水蛭素(hirudin,HV)作为新一代抗凝剂,是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素。虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用,尚没有好的解决办法。针对水蛭素在临床应用中所出现的这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险。小鼠尾部血栓模型实验表明,此新型嵌合抗栓剂在不减少水蛭素抗凝血活性的同时, 又大幅度地降低出血副作用,具有非常重要的临床意义。 牛晋阳 董春娜 靳继德 石炳兴 吴祖泽关键词:水蛭素 腺病毒载体介导肝细胞生长因子对局灶性脑缺血的基因治疗 背景:缺血性脑血管疾病已成为现代社会危害人类生命与健康最重要的疾病之一,由于它发病急及神经元的难分裂性,临床治疗效果还不理想,仍然需要研究新的治疗方法.肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,H... 靳继德关键词:肝细胞生长因子 重组腺病毒载体 基因治疗 局灶性脑缺血 文献传递