陶韵文
- 作品数:9 被引量:37H指数:4
- 供职机构:佳木斯大学药学院更多>>
- 发文基金:中医药行业科研专项北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生农业科学更多>>
- 北柴胡3个UGT基因表达特性及其原核表达与蛋白纯化
- 目的: 分析北柴胡3个UGT基因的MeJA诱导表达特性和组织表达,原核表达并纯化出UGT蛋白,为进行体外催化反应分析UGT基因功能奠定基础。 方法: 提取MeJA处理不定根和未处理对照不定根的RNA以及北柴胡根、茎...
- 陶韵文
- 关键词:北柴胡原核表达蛋白纯化
- 植物细胞色素P450在三萜皂苷生物合成中的功能研究进展被引量:12
- 2012年
- 三萜皂苷是许多药用植物的药效成分,其生物合成通常可分为前体形成、骨架构建以及后修饰3个部分。后修饰过程是植物调控形成众多种类单体皂苷的重要过程,其机制至今尚未完全阐明。植物细胞色素P450是由少数几个超基因家族编码的,参与多种生物过程,包括三萜皂苷次生代谢的后修饰过程。目前,已在少数植物中克隆到了催化个别单体皂苷生物合成的P450基因,其功能研究取得了一定进展。将就此进行综述,为进一步开展相关研究提供借鉴。
- 徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春
- 关键词:三萜皂苷生物合成细胞色素P450基因克隆
- 植物皂苷生物合成中UGT功能研究进展被引量:3
- 2013年
- 植物皂苷(Saponins)是广泛存在于绝大多数植物体中不可或缺的一类次生代谢产物。其中多种植物皂苷具有重要的药理活性。尽管皂苷的生物合成途径还未彻底解析,但近年来,皂苷生物合成途径研究,尤其是合成途径下游多基因家族编码酶催化的反应,取得了很大进展。目前,已在个别植物中克隆到了催化个别单体皂苷生物合成的UGT基因,其功能研究取得了一定进展。本文就皂苷合成途径下游催化皂苷元糖基化的糖基转移酶基因克隆和功能研究做一综述,为加快皂苷生物合成途径的解析提供借鉴。
- 陶韵文徐洁森孙晶魏建和隋春刘娟
- 关键词:生物合成基因克隆晶体结构
- 传统中药材桔梗的研究进展被引量:10
- 2013年
- 对近年来国内外有关桔梗药材的研究进展进行综述,主要涉及生药学特征、产区分布、生物活性、营养成分、开发利用等方面,为深入研究与开发桔梗资源提供了较为详尽的参考资料,为传统中药的综合利用,建立完善的质量标准奠定了基础。
- 张岩刘颖陶韵文杨欣刘娟
- 关键词:桔梗生药学鉴定活性成分营养成分
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT3,BcUGT6的表达分析及其原核表达被引量:2
- 2014年
- 该研究测定了北柴胡中2个糖基转移酶基因BcUGT3和BcUGT6在不同组织中的转录水平及MeJA处理后不定根中的转录水平。BcUGT3在根、叶、花和果中的转录水平无明显差异,但均高于茎中的转录水平。BcUGT6在叶中转录水平最高,在花中最低。以未处理的为对照,BcUGT6在MeJA处理后2 h,8 h,24 h,2 d,4 d的北柴胡不定根中,转录水平均提高近2倍,表明BcUGT6的转录受MeJA影响较小。BcUGT3转录水平随处理时间的延长不断增加,4 d时,达7倍左右。利用载体pET-28a(+),进行了2个基因的原核表达。IPTG诱导后,宿主菌表达出了目的蛋白,并获得了纯化蛋白。为后续开展这2个基因的功能研究奠定了基础。
- 陶韵文徐洁森孙晶魏建和刘娟隋春
- 关键词:北柴胡原核表达蛋白纯化
- 北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立被引量:2
- 2013年
- 以花粉发育处于单核期的北柴胡花药为外植体诱导出愈伤组织,愈伤组织经多次继代培养后,置于20种含不同植物激素的分化培养基上诱导分化。分别在培养21,49 d后,统计每种培养基中分化出苗数,同时观察再生植株生长状况,从中筛选出分化率高,分化速度快,且植株生长状态良好的分化培养基。结果共在19种培养基均可分化出苗,分化率在3%~60%,大部分低于20%。在MS+KT 0.5 mgL-1+蔗糖30 gL-1+植物凝胶5 gL-1培养基上分化率最高,为60%,其次为MS+ ZT 1.0 mgL-1+蔗糖30 gL-1+植物凝胶5 gL-1,为58%。另外,针对在分化培养基中未能生根的再生芽,进行了生根培养基筛选。结果显示再生芽在生根培养基MS+蔗糖30 gL-1 +植物凝胶5 gL-1和1/2 MS+ NAA 0.5 mgL-1+蔗糖30 gL-1 +植物凝胶5 gL-1中均可生根,生根率均为100%。由此建立了北柴胡花药愈伤组织高效稳定的再生体系。
- 徐洁森赵立子魏建和陶韵文孙晶隋春杨成民
- 关键词:北柴胡愈伤组织
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT8的克隆、序列分析及其原核表达载体构建被引量:8
- 2013年
- 目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。
- 徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春
- 关键词:北柴胡糖基转移酶基因原核表达载体PCR
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化被引量:6
- 2013年
- 本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1 ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成。随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白,并进行了纯化。原核表达实验中共采用了3种载体:pRSET-A、pET-28a(+)和pET-30a(+),3种宿主菌:BL21(DE3)plysS、BL21A1和BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,进行了不同诱导条件的探索,包括不同诱导物(L-阿拉伯糖和IPTG)的不同浓度、不同诱导时间和温度,结果以pET-28a(+)和pET-30a(+)为载体,BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL为宿主菌,0.5或1 mmol.L 1IPTG,16℃,20 h为条件,诱导出目标蛋白。利用PrepEase His标签蛋白纯化试剂盒,纯化获得了目标蛋白,为后续开展BcUGT1基因的功能研究奠定了基础。
- 陶韵文徐洁森魏建和孙晶徐艳红杨欣张岩刘娟隋春
- 关键词:北柴胡原核表达蛋白纯化
- 植物P450在三萜皂苷生物合成中的功能研究进展
- 三萜皂苷是许多药用植物的药效成分,其生物合成通常可分为前体形成、骨架构建以及后修饰三个部分。后修饰过程是植物调控形成众多种类单体皂苷的重要过程,其机理至今尚未完全阐明。植物细胞色素P450是由少数几个超基因家族之一编码的...
- 徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春
- 关键词:三萜皂苷生物合成细胞色素P450
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