许梅
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用
- 2009年
- 目的探讨低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化及myocardin在其分化过程中的作用。方法不同浓度血清培养骨髓间充质干细胞条件下加以低密度脂蛋白刺激。细胞分为常规培养组,常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组。免疫细胞化学检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达、RT-PCR法检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA的表达。结果免疫细胞化学结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达增强(P<0.05);20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组与20%胎牛血清组比较上述三种蛋白表达增强(P<0.05);平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链蛋白的表达与myocardin表达呈正相关(r=0.9018,P<0.05;r=0.7969,P<0.05)。RT-PCR结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达明显增强(P<0.05);20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组比较上述三个指标的表达也增强(P<0.05)。平滑肌肌动蛋白、平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达与myocardin正相关(r=0.9295,P<0.05;r=0.8940,P<0.05)。结论高浓度血清,低密度脂蛋白均可诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化,低密度脂蛋白联合20%胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用最强。myocardin可能在此过程中起重要作用。
- 陈雪孟寒许梅王珊珊黄冠阮秋蓉
- 关键词：骨髓间充质干细胞低密度脂蛋白MYOCARDIN细胞分化平滑肌样细胞
- myocardin基因沉默在PDGF—BB诱导小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化中的作用被引量：2
- 2009年
- 目的构建myocardin特异性siRNA真核表达载体，体外观察其对myocardin基因的沉默效应及对小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）向平滑肌样细胞分化过程中的影响。方法培养小鼠骨髓间充质干细胞并利用血小板源生长因子（PDGF—BB，50mg／L）联合高浓度胎牛血清（20％FBS）诱导其向平滑肌样细胞分化；构建含u6启动子和myocardin特异短发卡RNA（shRNA）编码序列的质粒载体pGen—myo-shRNA，以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil—Con（pCon）为阴性对照，分别转染诱导培养后第6天的小鼠MSC，48h后用RT．PCR技术检测细胞内myocardin在mRNA水平的表达；同时用免疫组织化学方法检测平滑肌肌球蛋白重链（SMmyosinheavychain，SM-MHC）的表达来鉴定平滑肌样细胞的分化。结果成功构建myocardin特异性siRNA真核表达载体，利用其沉默myocardin基因后，干扰组相比空白对照组myocardinmRNA表达下调42．86％，差异有统计学意义（P〈0．01）；且免疫组织化学结果表明：干扰组SM—MHC阳性表达低于空白对照组（P〈0．01）。结论小鼠骨髓间充质干细胞中存在少数细胞具有分化成为平滑肌样细胞的潜能；构建的pGen-myo—shRNA重组质粒能有效抑制myocardin基因的表达，且对小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化有抑制作用。
- 黄冠许梅余俊孟寒陈雪李燕阮秋蓉
- 关键词：小分子干扰平滑肌
- MYOCARDIN的表达和在平滑肌细胞分化中的作用被引量：1
- 2008年
- 目的在用血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)联合20%胎牛血清(FBS)诱导骨髓间充质干细胞(BM-SC)向平滑肌细胞(SMC)分化过程中,通过对促血管SMC分化因子myocardin和平滑肌分化标志物基因α-actin,SM-22等表达的研究,探讨myocardin在促血管SMC分化中的重要作用。方法采用骨髓干细胞培养基和贴壁法从小鼠骨髓中分离BMSC,然后细胞分为两组,诱导其向SMC分化:(1)20%FBS单独诱导;(2)PDGF-BB(50ng/ml)联合20%FBS诱导BMSC。分别于诱导0d,4d,8d,12d后用逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法检测细胞myocardin,α-actin,SM-22的mRNA表达和蛋白表达情况.结果RT-PCR和免疫组化结果显示在对小鼠BMSC的诱导过程中,检测出了myocardin,同时还有平滑肌分化标志物基因α-actin,SM-22等的表达。0d,4d,8d两诱导组细胞的myocardin,α-actin,SM-22的mRNA和蛋白表达水平随着诱导时间延长而增强(P<0.05),而诱导8d及12d时表达基本趋于稳定,与SMC相比无明显统计学差异(P>0.05);并且各项指标的表达水平在PDGF-BB与20%FBS联合诱导时比20%FBS单独诱导表达增强。不同诱导组之间统计学比较有差异(P<0.05)。结论PDGF-BB联合20%FBS可有效诱导BMSC向SMC分化,myocardin在此过程中起着关键性作用,且PDGF-BB,20%FBS两者联合诱导比20%FBS单独诱导作用要强。
- 王珊珊阮秋蓉孟寒余俊许梅黄冠陈雪
- 关键词：骨髓间充质干细胞平滑肌样细胞分化
