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许俊强

作品数：11 被引量：58H指数：5
供职机构：西南大学园艺园林学院南方山地园艺学教育部重点实验室更多>>
发文基金：重庆市自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 11篇农业科学

主题

  • 7篇甘蓝
  • 6篇结球
  • 6篇结球甘蓝
  • 4篇花粉
  • 4篇FLC
  • 3篇蛋白
  • 3篇体外
  • 3篇相互作用
  • 2篇蔬菜
  • 2篇体外表达
  • 2篇酵母
  • 2篇酵母双杂交
  • 2篇芥菜
  • 2篇SPT
  • 2篇SVP
  • 2篇抽薹
  • 2篇雌蕊
  • 1篇蛋白质相互作...
  • 1篇整合子
  • 1篇体外检测

机构

  • 11篇西南大学

作者

  • 11篇许俊强
  • 11篇王志敏
  • 11篇汤青林
  • 11篇宋明
  • 5篇孙梓健
  • 4篇王小佳
  • 3篇刘智宇
  • 3篇杨朴丽
  • 2篇张丹华
  • 1篇韦静宜
  • 1篇丁泽琴
  • 1篇牛义
  • 1篇杨修勤
  • 1篇葛文东

传媒

  • 4篇园艺学报
  • 3篇作物学报
  • 2篇中国蔬菜
  • 1篇长江蔬菜
  • 1篇植物生理学报

年份

  • 1篇2014
  • 4篇2013
  • 4篇2012
  • 2篇2011
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究被引量：6
2013年
为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7。为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致。同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用。结果表明CaM12 EF-hands突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用。该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据。
许俊强孙梓健宋明汤青林王志敏王小佳
关键词：结球甘蓝酵母双杂交
结球甘蓝花粉膜联蛋白基因的克隆及其表达分析被引量：2
2012年
对结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)花粉总蛋白双向电泳及差异蛋白质谱分析,发现膜联蛋白在花粉萌发后较萌发前表达下调。通过同源扩增和RACE等方法首次在结球甘蓝花粉中扩增得到BoAnnexin2基因的cDNA序列,该基因cDNA全长1157bp,开放阅读框为951bp,编码316个氨基酸残基,预测分子量为36.02kD,等电点6.33。BoAnnexin2编码蛋白C端有4个膜联蛋白重复序列,共2个Ⅱ型钙结合区域,在第4个钙结合区位点包含GXXXGXS(T)/DXXG基序。实时荧光定量试验表明,BoAnnexin2在甘蓝成熟未萌发花粉中的表达量是萌发45min后表达量的8倍,表明BoAnnexin2在甘蓝花粉萌发起始阶段起到重要调控作用。
孙梓健许俊强宋明韦静宜汤青林王志敏王小佳
关键词：结球甘蓝花粉膜联蛋白
甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP体外表达及相互作用被引量：7
2013年
甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP可能存在相互作用,从而调节开花时间。为进一步的验证该相互作用,以甘蓝‘ZQ’为材料,扩增了594 bp的FLC cDNA和726 bp的SVP cDNA序列,它们分别编码197和241个氨基酸,且均属MIKC型蛋白。NCBI比对发现FLC与BoFLC3同源性高达98%,SVP与BoSVP-a同源性高达99%。将甘蓝FLC和SVP分别与原核表达载体pET43.1a融合,构建重组质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,并转化宿主菌大肠杆菌BL21,均能够在体外表达目的蛋白。利用免疫共沉淀的原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,结合SDSPAGE,检测到体外表达蛋白FLC与SVP能相互作用并形成复合体,这为深入研究FLC与SVP互作机理及探讨其与抽薹开花因子的相互作用提供了理论依据和技术基础。
杨朴丽张丹华刘智宇许俊强王志敏汤青林宋明
关键词：甘蓝FLCSVP体外表达蛋白质相互作用
结球甘蓝花粉类钙调素蛋白基因BoCML49的克隆及表达分析被引量：12
2012年
以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707bp的cDNA片段。通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调。通过5-Race和3-Race分别得到550bp和721bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125~1078bp处,加尾信号（AATAAA）位于第1222bp处。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51kD,pI为6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150~178和第216~244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7个α-螺旋和10个β-折叠结构。系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49和AtCML50的亲缘关系较近。BoCML49基因的原核表达得到37.55kD的融合蛋白。
宋明许俊强孙梓健汤青林王志敏王小佳
关键词：结球甘蓝花粉
芥菜开花信号整合子的两个核心转录因子FLC和SVP相互作用的体外检测被引量：21
2011年
为了深入研究调控芥菜开花信号整合子的两个核心转录因子Flowering Locus C(FLC)和SHOTR VEGETATIVE PHASE(SVP)的作用机理和进行人工调控,以芥菜‘QJ’为材料,采用RT-PCR技术分别扩增FLC和SVP的编码序列,构建原核表达质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。利用免疫共沉淀原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,对芥菜FLC与SVP的相互作用进行SDS-PAGE检测。结果表明:FLC与SVP能在体外相互作用并形成复合体,为深入分析FLC与SVP间的作用机理以及探讨其与下游开花信号整合子元件的相互作用提供了理论和技术基础。
汤青林许俊强宋明王志敏
关键词：芥菜FLCSVP相互作用
芥菜AP1基因体外表达及其与FLC相互作用的验证被引量：3
2012年
芥菜花分生组织决定因子AP1与开花路径核心调节子FLC可能存在直接的相互作用,从而调节开花时间。为进一步检测该相互作用,从芥菜"QJ"材料中同源克隆了790bp的AP1cDNA序列,该基因编码256个氨基酸。生物信息学分析表明,AP1属MIKC型蛋白,其MADS域含有2个螺旋和2个折叠,第1个螺旋内含有1个不保守氨基酸位点;而K域含有3个螺旋,第1、2个螺旋内各有1个不保守位点,第3个螺旋内具有4个不保守位点。同时构建了原核表达质粒pET43.1a-AP1,转化宿主菌大肠杆菌BL21,以IPTG诱导该融合蛋白体外表达。利用pET43.1a-AP1融合蛋白序列中6×His标签与Ni+结合的特点,结合SDS-PAGE分析,证实了体外表达蛋白AP1能与FLC相互作用并形成复合体,该结果为深入研究AP1与FLC互作机制及花分生组织的分子调控奠定了基础。
汤青林许俊强宋明王志敏
关键词：芥菜FLC
结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析被引量：2
2013年
以结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)E1花粉为试材,对萌发前后的花粉总蛋白进行双向电泳及差异蛋白质谱分析,发现延伸因子BoEF-Tu蛋白在花粉萌发后较萌发前表达上调。利用同源克隆得到甘蓝BoEF-Tu基因的全长cDNA序列,其长度为1 728 bp,具有一个完整开放阅读框(ORF),位于112～1 473 bp处,编码453个氨基酸残基,预测分子量为49.17 kD,等电点为6.52。生物信息学分析表明:BoEF-Tu蛋白含有9个α–螺旋结构,18个β–折叠结构,不含信号肽和跨膜区,在106～121位氨基酸残基处有1个GTP结合区域(DKAPEEKKRGITIATA)。氨基酸同源性分析表明,BoEF-Tu与拟南芥EF-TuM同源性较高,达到93%;系统进化分析表明,BoEF-Tu与拟南芥EF-Tu的亲缘关系最近。
王志敏牛义许俊强孙梓健丁泽琴杨修勤汤青林宋明
关键词：结球甘蓝花粉
结球甘蓝雌蕊发育调控因子SPT与HEC1的基因克隆及相互作用
2014年
为研究SPT和HEC及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响,以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料,提取雌蕊总RNA,根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物,采用同源克隆方法克隆SPT基因,其序列1085 bp,开放阅读框(ORF)1062 bp;HEC1基因ORF 696 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明,SPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67 kD,pI为6.83;HEC1编码231个氨基酸残基,预测分子量为25.26 kD,pI为10.2。两基因在各器官中均表达,但SPT在果实和雌蕊中表达量最高,而HEC1在根和花蕾中的表达量最高。为检测两者的相互作用,构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1,pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用。同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体,分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象,融合后的二倍体酵母均能在SD/–Trp–Leu–Ade–His/X-α-gal/AbA板上长出蓝色菌斑,表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因,酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致,说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育。
许俊强孙梓健刘智宇杨朴丽汤青林王志敏宋明王小佳
关键词：结球甘蓝雌蕊SPT相互作用酵母双杂交
芸薹属蔬菜花期分子调控研究进展被引量：2
2012年
开花是芸薹属蔬菜作物非常重要的农艺性状,有4条途径调控开花:春化途径,光周期途径,赤霉素途径和自主途径。尽管这4条途径分别受不同的基因网络调节,但最终都汇集到相同的开花路径整合子。本文以模式植物拟南芥为借鉴,综述了芸薹属蔬菜花期调控中春化途径和自主途径关键基因FLC、光周期途径中关键基因CO和赤霉素途径的分子机制,及其在开花信号整合子中的核心调节作用,并对芸薹属蔬菜花期调控的深入研究进行了展望。
宋明许俊强汤青林葛文东王志敏
关键词：芸薹属花期调控FLC
蔬菜抽薹的遗传规律及机理研究被引量：9
2011年
综述了蔬菜作物抽薹特性的遗传规律、鉴定方法、生化基础以及分子机理等方面内容,并对蔬菜作物抽薹特性的未来研究方向进行了展望。
许俊强汤青林宋明王志敏
关键词：蔬菜抽薹
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