覃湘婕
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目北京市农林科学院科技创新能力建设专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用玉米作为生物反应器表达PEDV中和表位抗原蛋白被引量：3
- 2014年
- 以玉米为生物反应器,将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)主要中和抗原表位(core neutralizing epitope,COE)基因导入玉米自交系,获得了高效表达PEDV-COE的转基因玉米稳定株系。首先,根据玉米密码子的偏好性,设计合成优化的COE编码基因,构建了植物表达载体p BAC9036。然后,利用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71株转化再生植株,进而通过田间草甘膦抗性筛选,获得2个T1代转基因玉米稳定株系。通过PCR、RT-PCR、间接ELISA和Western blot等鉴定结果显示,COE基因已成功整合到玉米基因组并进行了转录和蛋白表达。并且种子中COE蛋白占可溶性总蛋白的0.122%和0.078%。最后,提取转基因玉米稳定株系的种子可溶性蛋白,与佐剂混合皮下注射免疫小鼠并取可溶性蛋白灌胃免疫小鼠,均可产生针对PEDV抗原的特异性抗体。获得的转基因玉米可有效表达COE蛋白,表达产物具有显著的免疫原性,为进一步研制PEDV-COE转基因玉米疫苗奠定了基础。
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- 关键词：猪流行性腹泻病毒转基因玉米
- 转TGEV-S基因玉米中目的基因的PCR检测及优化
- 2014年
- 为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白（TGEV-S）转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因.通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法.对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测,并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020DNA片段.结果显示,LA Taq酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S片段的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶,且退火温度为53～55℃时扩增效果较好.分别对450份转基因玉米叶片DNA和种子DNA检测结果显示阳性率分别为82.5％和76.3％.利用33对引物进行的PCR扩增及测序结果显示质粒pBAC9020基因片段已全部插入该玉米基因组DNA中.本试验建立的转TGEV-S基因玉米PCR检测方法敏感性和特异性高,为转基因玉米阳性植株的检测奠定了坚实的基础.
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- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒转基因玉米目的基因DNA聚合酶
- 博卡病毒概述
- 2013年
- 博卡病毒属于细小病毒科、细小病毒亚科、博卡病毒属。细小病毒科由细小病毒亚科和浓核病毒亚科组成，包括一些重要的人和动物疾病的病原体。前者感染脊椎动物，后者感染节肢动物。细小病毒亚科分为5个属：细小病毒属、红病毒属、
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- 关键词：细小病毒浓核病毒脊椎动物节肢动物亚科
- 猪流行性腹泻病毒中和抗原表位基因的原核表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：2
- 2013年
- 为了获得具有免疫原性的猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要中和抗原表位(COE)蛋白及其多克隆抗体,试验对已发表的PEDV基因序列进行比对,并设计、合成COE编码基因(420 bp),将其克隆入原核表达载体pET-30a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达,利用胶体金和Western-blot方法检测表达产物;纯化后免疫兔制备高免血清,并利用ELISA方法检测血清抗体效价。结果表明:表达的重组蛋白可与PEDV特异性抗体结合;免疫兔后获得的血清抗体效价达1∶6 400,具有免疫原性。
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- 关键词：猪流行性腹泻病毒原核表达纯化免疫原性
- 猪源弯曲菌的分离鉴定及耐药性分析
- 为调查猪肠道内弯曲菌的种类和流行状况，本试验自北京郊区养猪场和屠宰场采集猪肠道粪便样品，经增菌培养后利用三重PCR进行弯曲菌属、空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测，进而对PCR检测阳性样品进行弯曲菌的分离鉴定，最后对分离鉴定的...
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- 关键词：耐药机制药敏试验
- 猪源弯曲菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：7
- 2013年
- 目的为调查猪肠道内空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行和耐药性状况。方法本试验自北京郊区养猪场和屠宰场采集猪肠道粪便样品,经增菌培养后利用三重PCR进行弯曲菌属、空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测,进而对PCR检测阳性样品进行弯曲菌的分离鉴定,最后对分离鉴定的弯曲菌分离株进行药敏试验鉴定。结果本试验共采集猪肠道和肛门棉拭子样品241份,PCR检测结肠弯曲菌阳性样品数为178份,阳性率为73.9%,而空肠弯曲菌阳性样品数5份,阳性率仅为2.1%。经分离鉴定后共获得结肠弯曲菌菌株63株,分离率为35.4%,未分离获得空肠弯曲菌菌株。对26种抗生素的药敏试验结果显示结肠弯曲菌分离株对氯霉素(100%)、丁胺卡那(93.65%)、强力霉素(91.48%)、庆大霉素(82.54%)和阿莫西林(82.54%)等抗生素比较敏感,而对头孢哌酮(100%)、头孢氨苄(100%)、头孢拉啶(100%)、头孢唑啉(98.41%)、头孢克肟(92.06%)、萘啶酸(92.06%)、链霉素(90.48%)、环丙沙星(90.32%)、诺氟沙星(88.89%)和青霉素(87.30%)具有显著的耐药性;而且分离株多重耐药现象比较普遍,主要集中于14-20耐。结论本试验结果显示猪肠道内普遍存在结肠弯曲菌,而且菌株对多种抗生素产生了显著的耐药性。
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- 关键词：弯曲菌三重PCR药敏试验
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因不同编码区的表达和反应原性鉴定被引量：1
- 2014年
- 通过原核表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因不同编码区,以鉴定不同编码区表达产物与TGEV抗体的结合能力。在对TGEV S蛋白抗原位点分析的基础上,针对S蛋白N端的4个抗原位点C、B、D和A,设计引物分别扩增含C、B位点的TCB片段(411 bp)、含D位点的TD片段(441 bp)和含A位点的TA片段(456 bp),经克隆测序后分别插入原核表达载体p ET-32a中进行表达,SDS-PAGE电泳显示各片段均高效表达,表达的TCB片段、TD片段和TA片段融合蛋白大小分别为34.6,35.1,36.1 k Da。Western Blot结果表明,表达蛋白与TGEV感染猪阳性血清和His标签抗体均产生阳性反应。结果显示,3个S基因编码片段均具有与TGEV抗体结合的能力,为进一步鉴定不同编码区的免疫原性及抗原保护能力奠定了基础。
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- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因原核表达反应原性
- 猪博卡病毒不同基因型三重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2016年
- 为鉴别猪博卡病毒1型、2型和3型3种基因型,根据猪博卡病毒基因序列分别设计3对针对保守区域的引物进行PCR扩增,扩增目的片段大小分别为645 bp(PBoV1型)、352 bp(PBoV2型)和259 bp(PBoV3型)。通过引物浓度和退火温度等条件优化,首次建立了同时检测猪博卡病毒3种基因型的三重PCR方法。所建立的三重PCR方法扩增其他猪病病毒结果均为阴性,最低检测限为8×10-7ng/μL。结果表明,该方法具有较好的特异性和敏感性。对临床样品进行三重PCR和单项PCR检测,对比结果显示符合率为100%。该方法的建立为猪博卡病毒3种不同基因型的鉴别检测提供了有效手段。
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- 关键词：基因型三重PCR
