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袁万哲: 作品数：213 被引量：631H指数：11; 供职机构：河北农业大学更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目河北省自然科学基金河北省科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>

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PEDV-TGEV-RV三重PCR检测方法的建立被引量：3: 2016年; 根据G en Bank中已登陆的猪流行性腹泻病毒(PED V)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(RV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PEDV的N基因、TGEV的M基因、RV的VP7基因的目的片段;通过优化反应体系,建立了同时检测PEDV、TGEV、RV的三重PCR检测方法。敏感性和特异性试验的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为39.5 pg(PEDV)、38.1 pg(TGEV)和51.6 pg(RV)。该方法可同时扩增477 bp(PEDV)、263 bp(TGEV)、355 bp(RV)的特异性基因片段,而对猪瘟病毒(CSF V)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和伪狂犬病病毒(PRV)等病毒的检测结果均为阴性。三重PCR与单一PCR的符合率为100%。上述结果表明,该方法的建立对于这3种病毒的临床快速检测与流行病学调查具有十分重要的意义。; 邹云婧梁中银林密袁万哲孙继国; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪轮状病毒三重PCR

猪肠道病毒甲型3C基因的克隆和原核蛋白的表达被引量：3: 2017年; 猪肠道病毒甲型(PEV A)是一种无囊膜、球形的单股正链RNA病毒,属于小RNA病毒科,能引起猪脑脊髓灰质炎、肠道、呼吸道、生殖器官疾病等多系统综合征。本试验采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,设计全长拼接引物,在引物的两端各设计了保护性碱基合成基因PEV A 3C,连入表达载体pCzn1;获得的重组质粒pCzn1-PEV A 3C转入Arctic Express表达菌株。诱导表达目的蛋白PEV A 3C,通过Ni柱亲和纯化获得目的蛋白。结果表明,成功构建了原核表达菌株,其所表达的融合蛋白分子质量约为21.7 ku,为下一步PEV A特异性ELISA检测方法的建立奠定了基础。; 孙杰朱琳焦点俞正玉范宝超袁万哲王建辉郭容利何孔旺李彬; 关键词：蛋白表达

一种坦布苏病毒纳米PCR检测试剂盒及其检验方法: 本发明公开了一种坦布苏病毒纳米PCR检测试剂盒及其检验方法。所述试剂盒包括5×反转录缓冲液、dNTP Mixture、反转录酶、RNA酶抑制剂和反转录引物，其特征在于所述试剂盒还包括2×NanoPCR Mix、上游引物和...; 袁万哲刘聚祥孙继国陈立功刘静王庚南; 文献传递

一例雏鸭新城疫的诊断被引量：16: 2007年; 2005年5月，河北省望都某养鸭场的雏鸭（金定鸭）发生一种临床上以腹泻、病死率较高、腺胃黏膜出血、腺胃黏膜脱落或有纤维素性渗出物、肠道黏膜出血及胰腺偶见白色坏死点为特征的传染病，采用多种抗菌药物和抗病毒药进行防治，均未取得明显效果，给当地养鸭业造成了一定的经济损失。根据流行病学、临床症状、剖检变化、病原学检查及实验室人工感染试验等确诊为鸭新城疫（ND），现报告如下：; 翟文栋陈立功李秀芬袁万哲董兵崔华敏史晓涛郝延刚万洪全王宝安; 关键词：新城疫雏鸭人工感染试验病原学检查纤维素性肠道黏膜

猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立被引量：11: 2017年; 试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPV-VP2作为模板,RPA的检测限为102拷贝,同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致,比普通PCR方法高100倍;RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%,略低于实时荧光定量PCR的检出率(86.9%),明显高于普通PCR的阳性检出率(66.7%)。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速,结果确实可靠,适用于PPV的快速检测。; 刘立兵王建昌经美王金凤袁万哲

用于检测猪Delta冠状病毒抗体的多肽、制备方法及其应用: 本发明提供用于检测猪Delta冠状病毒抗体的多肽、制备方法及其应用，涉及生物技术领域。该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，制备方法包括将含有所述多肽编码基因的重组菌在35‑40℃条件下采用IPTG诱导表达的步...; 李彬逄凤娇何孔旺郭容利范宝超俞正玉茅爱华温立斌倪艳秀袁万哲王建辉; 文献传递

禽腺病毒4型PCR检测方法的建立与应用被引量：14: 2016年; 根据禽腺病毒4型(FAdV-4)Hexon基因核苷酸序列,设计用于扩增FAdV-4的PCR引物,建立了FAdV-4 PCR检测方法。特异性和敏感性实验结果表明,该方法可扩增出954 bp的特异性核酸片段,而对禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒与禽腺病毒11型的检测结果均为阴性,对FAdV-4的最低核酸检出量为12.9 pg。该方法可用于禽腺病毒4型的临床检测与流行病学调查。; 袁万哲张姗陈萍张超经美崔元孙继国刘聚祥; 关键词：PCR

用于猪流行性腹泻病毒检测的RT-LAMP引物组、试剂盒及其应用: 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒检测的RT-LAMP引物组、试剂盒及其应用。所述引物组由一对外引物、一对内引物和一对环引物组成，所述外引物对序列为SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，所述内引物对序列为SEQI...; 袁万哲孙继国宋勤叶马增军李丽敏郭红斌李亚楠; 文献传递

MALDI-TOF MS方法快速鉴定临床分离的肺炎克雷伯氏菌被引量：8: 2020年; 为快速鉴定从临床死亡羊肺脏中分离的一株革兰阴性短杆菌,通过基质激光解吸电离飞行时间质谱方法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对其进行了鉴定,发现该分离菌为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,表明MALDI-TOF MS方法达到了亚种水平的鉴定,鉴定分数为2.549。而VITEK2 compact传统生化方法和16SrRNA测序方法均鉴定为肺炎克雷伯氏菌,仅为种水平的鉴定。获得分离菌纯菌落后,MALDI-TOF MS方法仅需约30 min即可实现对该菌的有效鉴定,而VITEK2传统生化方法需要约4 h,16SrRNA测序方法则需要至少2 d。结果表明,MALDI-TOF MS方法能够快速、准确鉴定临床分离的肺炎克雷伯氏菌,从而为肺炎克雷伯氏菌的快速检测提供了技术支撑。; 姜彦芬王金凤李睿文孙晓霞袁万哲王建昌; 关键词：肺炎克雷伯氏菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

一例波尔山羊肝细胞性肝癌的病理形态学观察: 2007年; 陈立功崔华敏袁万哲李玉荣武现军郝延刚董世山李三星; 关键词：波尔山羊肝细胞形态学观察肝癌病理肿瘤标记物种畜禽