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海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E·coli中的高效表达被引量：4: 2005年; 为解决密码子偏好性差异造成的表达水平低下问题,采取了3种手段提高海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。用PCR方法从海栖热袍菌(Therm otoga maritima)基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶A的完整基因amyA,插入表达载体pET-20(b)中构建成质粒pET-amyA;运用基因工程手段将amyA基因富含稀有密码子的信号肽进行切除,将不含信号肽的amyAⅠ基因插入pET-20(b)中构建成质粒pET-amyAⅠ;用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增出argU基因,插入pET-amyAⅠ中构建成质粒pET-amyAⅡ。将重组质粒分别转化到E.coliJM109(DE3),并将重组质粒pET-amyAⅠ转化E.coliBL21-CodonP lus(DE3)-R IL。通过IPTG诱导测酶活性:在E.coliJM109(DE3)中表达的重组酶(pET-amyA)、(pET-amyAⅠ)、(pET-amyAⅡ)的酶活分别是1658.0 U/mL、6721.7 U/mL、8904.5 U/mL,在E.coliBL21-CodonP lus(DE3)-R IL中表达的重组酶(pET-amyAⅠ)的酶活是13867.7 U/mL。表明通过这些手段能大幅提高T.maritima胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。; 王希菊蒋宇邵蔚蓝; 关键词：海栖热袍菌 Α-淀粉酶

嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质被引量：1: 2006年; 乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从T.ethanolicusJW200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109(DE3)中表达。表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯。带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇.带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55℃;最适pH8.9,最适为T 60℃。以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5μmol/(min.mg)。T.ethanolicusJW200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路。; 蒋宇邵蔚蓝; 关键词：乙醛脱氢酶乙醇脱氢酶

一种克隆新基因的试剂盒及其应用方法: 一种克隆新基因的试剂盒及其应用方法，涉及一种新型基因克隆试剂盒，以及用这种试剂盒克隆新基因的方法。所说的试剂盒主要包括以下单元：PCR魔术缓冲、PCR缓冲、T-载体、Taq酶和多种通用引物。使用本发明的新型基因克隆试剂盒...; 邵蔚蓝蒋宇; 文献传递

一种克隆新基因的试剂盒及其应用方法: 一种克隆新基因的试剂盒及其应用方法，涉及一种新型基因克隆试剂盒，以及用这种试剂盒克隆新基因的方法。所说的试剂盒主要包括以下单元：PCR魔术缓冲、PCR缓冲、T－载体、Taq酶和多种通用引物。使用本发明的新型基因克隆试剂盒...; 邵蔚蓝蒋宇; 文献传递

嗜热厌氧产乙醇杆菌乙醇代谢途径的初步研究被引量：8: 2005年; 以乙醇产量和细胞密度的提高为目标,从碳源和氮源入手,对嗜热厌氧产乙醇杆菌Therm oanaerobact-er ethanolicusJW 200的培养基作了初步优化以提高乙醇代谢途径中的关键酶的得率,便于提纯.葡萄糖浓度的提高对乙醇的产生有明显的诱导作用,但当葡萄糖浓度高于2%,乙醇产量反而下降.酵母粉对乙醇产量没有促进作用,单纯提高酵母粉浓度对细胞密度无显著影响,而同时提高葡萄糖和酵母粉浓度至2.0%,OD600最高可达2.0.2%葡萄糖,0.5%酵母粉对单位细胞乙醇产量的诱导效果最佳.T.ethanolicusJW 200粗酶液中未检测到丙酮酸脱羧酶的活性,经亲和柱C ibacron B lue-3GA部分纯化,在NAD洗脱蛋白中检测到辅酶A依赖型乙醛脱氢酶的活性,表明辅酶A依赖型乙醛脱氢酶是该菌乙醇代谢途径中的关键酶,它和乙醇脱氢酶共同作用,将乙酰辅酶A转化成乙醇.; 蒋宇邵蔚蓝; 关键词：葡萄糖酵母粉乙醇

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蒋宇