胡智兴
- 作品数：33 被引量：71H指数：5
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省科技厅-昆明医学院应用基础研究联合专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 肝细胞生长因子预处理对过氧化氢诱导大鼠神经干细胞凋亡的保护作用
- 2009年
- 目的研究肝细胞生长因子(HGF)对神经干细胞(NSC)凋亡的保护作用及其作用机制,为HGF用于NSC移植提供实验基础。方法分离培养大鼠NSC。细胞分为正常对照、模型(H2O2100μmo.lL-1)、HGF+H2O2(HGF15,30及60μg.L-1预处理24h后,再加入H2O2100μmol.L-1处理4h),LY294002(PI3K/Akt通路抑制剂)+HGF+H2O2(先加入LY29400220μmol.L-1处理30min,再加入HGF60μg.L-1处理24h,最后再加入100μmo.lL-1H2O2培养4h)组。MTT法检测细胞存活率;TUNEL法检测细胞凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性;Western印迹分析Bcl-2,Bax蛋白表达。结果MTT检测发现,随着HGF浓度的增加,NSC细胞的存活率也增加。与模型组〔(63.5±2.4)%〕比较,HGF15,30及60μg.L-1预处理组细胞存活率明显升高〔(79.1±7.5)%,(83.8±6.1)%和(86.6±8.2)%;n=3,P<0.05〕。TUNEL法检测发现,HGF预处理组凋亡细胞明显减少,模型组的凋亡率为(43.5±6.2)%,HGF预处理组则分别为(34.2±8.6)%,(21.7±3.8)%及(19.4±4.0)%。Caspase-3活性检测表明,与模型组相比,HGF预处理组细胞caspase-3活性降低。Western印迹分析结果显示,与模型组比较,HGF预处理使细胞的Bcl-2蛋白表达升高,但Bax蛋白表达不受影响;HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通道阻滞剂LY294002阻断。结论HGF可减轻H2O2所诱导的大鼠NSC凋亡,且呈一定的浓度依赖关系,其作用机制可能与NSC的PI3K/Akt通路激活和Bcl-2表达增强有关。
- 胡智兴耿菊敏周轶平罗敏梁道明
- 关键词：细胞凋亡1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B
- 单层分步法诱导人胚胎干细胞定向肝样细胞分化被引量：1
- 2010年
- 目的采用单层分步法诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化为肝样细胞,建立hESCs分化为肝细胞的诱导体系。方法将hESC株H1细胞接种到Matrigel包被的培养板上,早期(细胞贴壁4d后)加入含有细胞因子活化素A(Activin A)的分化液诱导5d;中期将诱导液换为含FGF-1和BMP-4的肝分化液诱导6d;最后添加肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和制癌蛋白M(Oncostatin M,OSM)继续诱导分化5～7d。采用免疫细胞化学染色、RT-PCR、过碘酸-雪夫(Periodicacid-Schiff,PAS)反应鉴定分化细胞的性质。结果经Activin A、FGF-1、BMP-4、HGF和OSM连续诱导的hESCs呈多角形、卵圆形或圆形,排列紧密;部分细胞出现二核或三核,呈现肝细胞所特有的形态。分化细胞在诱导早期表达SOX17、叉头框(Forkhead box,FOX)A2、GATA-4,中期表达甲胎蛋白(αfetoprotein,AFP)、白蛋白、角蛋白18,晚期表达成熟肝细胞特异性基因乙醇脱氢酶1C、细胞色素P4501B1。免疫细胞化学染色示,Activin A诱导后,细胞呈SOX17和FOXA2阳性;经FGF-1和BMP-4诱导后,呈AFP和α1抗胰蛋白酶阳性。HGF和OSM诱导后,PAS糖原染色检测阳性。结论采用单层分步法逐步添加细胞因子,可诱导hESCs分化为肝样细胞。该分化体系可为肝细胞移植、肝组织工程等临床治疗提供一个有效的细胞来源。
- 胡智兴罗敏梁道明
- 关键词：人胚胎干细胞肝细胞分化
- 钌-乙二胺或邻菲罗啉-氟尿嘧啶配合物的合成及体外抗肿瘤活性被引量：6
- 2005年
- 目的寻求高效低毒的新型钌配合物抗肿瘤药物。方法用RuCl3·3H2O,乙二胺(en)或者邻菲罗啉(Phen),氟尿嘧啶(5-Fu)为原料,设计合成了[Ru(en)(5-Fu)2Cl2]Cl,[Ru(Phen)(5-Fu)2Cl2]Cl配合物。并用改良MTT,SRB法,选用K562,A549,Bel-7402,BIU-87,Bcap-37细胞株对其进行体外抗肿瘤活性测定。结果合成的[Ru(en)(5-Fu)2Cl2]Cl,[Ru(Phen)(5-Fu)2Cl2]Cl配合物的化学结构由元素分析和红外光谱初步证实。获得配合物细胞株体外抗肿瘤活性数据IC50值。结论[Ru(Phen)(5-Fu)2Cl2]Cl配合物与5-Fu相比,似有进一步研究的价值。
- 钟文远崔永春范春兰胡智兴李玛琳
- 关键词：抗肿瘤活性
- 肝细胞生长因子促大鼠神经干细胞增殖的作用被引量：1
- 2010年
- 目的：研究肝细胞生长因子（HGF）对大鼠神经干细胞（NSCs）增殖的作用以及P13K／Akt信号途径的影响。方法：分离培养大鼠NSOs，通过向神经培养基中添加HGF（10，30，60ng／ml），计数干细胞克隆形成率、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法以及5-溴-2＇-脱氧尿苷（BrdU）标记检测NSCs的增殖，AnnexinV／FITC免疫荧光显色测定NSCs的凋亡；免疫印迹法检测细胞磷酸化Akt蛋白表达的变化。结果：与对照组相比，HGF各剂量组NSCs克隆率明显增加，生长速度增快，BrdU阳性细胞增加．NSCs凋亡率显著减少。此外，HGF可上调磷酸化Akt蛋白的表达，HGF的效应可被PI3K／Akt通路抑制剂LY294002阻断。结论：HGF可促进大鼠NSCS增殖，抑制其凋亡，其作用机制可能与激活NSCs的PI3K／Akt信号转导通路有关。
- 胡智兴耿菊敏梁道明
- 关键词：肝细胞生长因子增殖
- 基因芯片技术在肿瘤研究中的应用被引量：1
- 2002年
- 王素军李玛琳纪舒昱胡智兴
- 关键词：基因芯片技术肿瘤研究
- 无血清无饲养层人胚胎干细胞向胶质前体细胞分化的研究
- 目的:建立无血清无饲养层人胚胎干细胞(hESCs)胶质前体细胞分化体系。方法:将生长在层黏连蛋白包被的培养板上的人胚胎干细胞,悬浮培养诱导拟胚体(EBs)形成,将25d的EBs转移至含有胰岛素、5μg/L碱性成纤维细胞生...
- 罗敏胡智兴梁道明
- 关键词：胚胎干细胞免疫荧光RT-PCR
- 文献传递
- 肝细胞生长因子减轻皮质神经元的缺氧/复氧损伤被引量：4
- 2010年
- 目的研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧/复氧诱导大鼠皮质神经元凋亡的保护。方法分离培养SD大鼠皮质神经元,经HGF(15、30和60μg/L)预处理后经缺氧/复氧诱导凋亡,用MTT比色法检测细胞存活率;用Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测神经元的凋亡;用比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-3活性变化。结果与正常对照组相比,缺氧/复氧组神经元的细胞存活率显著下降,细胞凋亡率和caspase-3活性升高(均P<0.05);而HGF预处理12 h可显著逆转缺氧/复氧所致的细胞存活率降低、凋亡率增加、LDH活性上升、caspase-3活性升高的改变(均P<0.05),且这些效应与HGF剂量正相关。此外,HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通路抑制剂LY294002阻断。结论HGF减轻缺氧/复氧所诱导的神经元凋亡可能与其激活神经元的PI3K/Akt信号通路、减少caspase-3表达有关。
- 胡智兴耿菊敏梁道明吴兰鸥郑春兰罗海芸陶剑
- 关键词：肝细胞生长因子PI3K/AKT
- 钐、钇配合物对人胃癌细胞的作用及其机制研究被引量：5
- 2009年
- 目的为了深入研究稀土配合物的抗肿瘤活性,将稀土配合物开发成抗癌新药,本实验对钐、钇配合物抑制胃癌细胞BGC-823细胞增殖的活性作用及其机制作了探讨。方法磺酰罗丹明B(SRB)法测定钇、钐配合物及硝酸盐对人胃癌细胞株BGC-83增殖的影响;观察稀土配合物诱导BGC-823细胞凋亡,采用流式细胞仪检测稀土配合物对BGC-823细胞周期的影响,运用彗星微凝胶单细胞电泳观察其对BGC-823细胞DNA剪切作用。结果钇、钐配合物明显抑制BGC-823的增殖,并能诱导BGC-823凋亡;经不同浓度钐、钇配合物处理BGC-823细胞的细胞周期发生明显变化并损伤细胞的DNA。结论稀土配合物的体外抗肿瘤活性可能是在5-Fu配体的细胞毒性基础上,稀土离子发挥了协同作用;钐、钇稀土配合物可能通过将胃癌BGC-823细胞阻滞于G0/G1期或直接切断肿瘤细胞DNA诱导细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤活性作用。
- 胡智兴钟文远李玛琳
- 关键词：稀土配合物人胃癌细胞抗肿瘤活性
- 人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系的建立被引量：4
- 2009年
- 背景:研究表明FGF2,TGFβ/activin/nodal和IGF信号通路是人胚胎干细胞保持其多能性所必需的,然而直接添加外源性碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β和胰岛素是否能够维持人胚胎干细胞的自我更新目前尚无报道。目的:拟建立人胚胎干细胞无饲养层无血清条件下的培养体系。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-09/2009-02在中国科学院昆明动物研究所完成。材料:12.5～13.5d龄清洁级ICR孕鼠2只,由昆明医学院动物中心提供。人胚胎干细胞株BG02购自美国Bresagen公司。方法:①消化离心BG02细胞,重悬于无饲养层过渡培养基后接种,常规培养5～7d,挑去分化的人胚胎干细胞,加入分散酶消化,切割成小团块,离心重悬后按1∶3比例重新接种预铺层粘连蛋白的4孔板,此时培养基换成无血清无饲养层培养基,由80%DMEM/F12、20%KSR、2mmol/Lglutamine、1%非必需氨基酸、0.1mmol/Lβ-巯基乙醇、ITS(×1)、106U/L青霉素、100mg/L链霉素、4μg/L碱性成纤维细胞生长因子、0.12μg/L转化生长因子β1组成。②无菌条件下取出ICR胎鼠,组织块胰酶消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞,接种在0.1%明胶包被的6孔板中即为饲养层。将生长在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞株BG02预铺至有层粘连蛋白的培养板上,加入含碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1及ITS的无血清培养基连续培养。主要观察指标:观察BG02细胞在无血清无饲养层培养体系中的形态,采用细胞免疫组化法检测人胚胎干细胞特异性分子标志的表达,检测BG02细胞体外分化能力及其核型,比较BG02细胞在无血清无饲养层和小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系中的生长情况、细胞集落分化率。结果:在无血清无饲养层培养体系中,BG02细胞连续传代20代,细胞呈典型的人胚胎干细胞形态特征;BG02细胞表达SSEA-4,SSEA-3,TRA-1-60,TRA-1-81,Oct-4,�
- 胡智兴吴兰鸥郑春兰周轶平罗敏梁道明
- 关键词：人胚胎干细胞无血清
- 兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用被引量：1
- 2006年
- 采用梯度离心的方法用淋巴细胞分离液从浓缩的人白细胞悬液中分离人外周血单核细胞,从猕猴新鲜脾脏中研磨分离猕猴脾脏淋巴细胞;分别将人外周血单核细胞和猕猴脾脏淋巴细胞作为免疫原,每次通过耳缘静脉注射4×108个细胞免疫日本大耳白兔,每周免疫一次,共免疫3次,制备兔抗人外周血单核细胞和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清。体外培养人和猕猴胚胎至囊胚,采用制备的免疫血清,分离人和猕猴囊胚内细胞团,用于建立人和猕猴胚胎干细胞系。结果如下:(1)用半微量细胞毒实验法测得兔抗人外周血单核细胞免疫血清和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清的效价分别为1∶320和1∶640;(2)两种免疫血清成功地裂解了15个人囊胚和33个猕猴囊胚的滋养层细胞,分离出了内细胞团,表明免疫血清的制备取得了成功,为建立人和猕猴胚胎干细胞系奠定了基础。
- 张秀珍采克俊王淑芬胡智兴裴轶劲季维智
- 关键词：免疫血清胚胎干细胞
