耿楠希
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达
- 2013年
- 目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入E.coli BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。
- 刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰
- 关键词：P21活化激酶原核表达质粒GST融合蛋白
- 体外激酶实验筛选p21活化激酶6对雄激素受体的磷酸化位点被引量：1
- 2013年
- 目的构建雄激素受体(AR)的点突变原核表达质粒,以体外激酶实验分析筛选p21活化激酶6(PAK6)对雄激素受体的磷酸化位点,更好的研究PAK6对AR的磷酸化所发挥的生物学功能。方法利用体外激酶实验分析PAK6对AR的较小磷酸化区域,并利用重叠延伸PCR的方法构建可能的磷酸化定点突变体;然后,体外纯化带有GST标签的突变体蛋白,及体外激酶实验筛选PAK6对AR的磷酸化位点。结果证明质粒构建成功,构建雄激素受体定点突变体,确定PAK6磷酸化雄激素受体位点。结论成功筛选PAK6对AR的磷酸化位点是578位丝氨酸。
- 刘彤李洋耿楠希李丰
- 关键词：定点突变体磷酸化
