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奶牛乳房炎病例中无乳链球菌保护性抗原的克隆与表达: 目的:为了解新疆地区奶牛乳房炎病例中无乳链球菌的感染状况，本试验对新疆4个不同地区奶牛场的牛奶样品进行无乳链球菌的分离与鉴定。并应用基因工程技术方法，对无乳链球菌的表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic...; 王蒴; 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌免疫原性; 文献传递

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定与特异、快速检测方法被引量：8: 2014年; 【目的】了解新疆奶牛乳房炎病例中无乳链球菌的感染状况和生物学特性,建立特异、快速检测方法。【方法】采集新疆4个不同地区规模化奶牛场乳房炎奶样,分别用鉴别培养基和绵羊血琼脂平板进行无乳链球菌分离培养、形态学观察、生化试验、PCR鉴定、致病性和常用抗生素敏感性试验。【结果】从检测出的139份乳房炎阳性奶样中分离出无乳链球菌24株。所分离菌株培养特性与生化反应符合该菌特性;依据元乳链球菌16S rRNA基因序列设计引物扩增所得PCR产物在405 bp处出现特异性条带;分离菌株对青霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素、万古霉素、克林霉素、头孢西丁、环丙沙星均敏感,对四环素、强力霉素、复方新诺明耐药。【结论】Granada选择性培养基培养和PCR扩增均可用于乳房炎奶样中无乳链球菌的特异、快速鉴定;新疆乳房炎奶样中无乳链球菌感染率为17.27%。; 王蒴杨学云李建军冉多良王治才; 关键词：牛乳房炎无乳链球菌 PCR 药物敏感性

改良格拉纳达培养基分离奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌的效果评价被引量：3: 2014年; 【目的】探索一种适合奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌高效分离、鉴定的培养基,对格拉纳达培养基(Granada medium)进行改良,用其分离奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌,并进行效果评价。【方法】改良格拉纳达培养基(Modified Granada medium,MGM)的成分为示蛋白胨、玉米淀粉、葡萄糖、丙酮酸钠、盐酸半胱氨酸、硫酸镁、对氧氮己环丙磺酸(MOPS)、磷酸氢二钠、甲氨蝶呤钠、结晶紫和琼脂粉。用MGM、改良爱德华培养基(Modified Edwards Medium,MEM)和血琼脂(Blood Agar,BA)三种培养基对187份奶牛隐性乳房炎奶样进行无乳链球菌分菌培养,采用PCR方法鉴定分离菌株,从而评价三种培养基在分离奶样中无乳链球菌的特异性和敏感性。【结果】在乳房炎无乳链球菌分离中,MGM、MEM和BA的特异性分别为100%、75.0%和18.2%,敏感性分别为88.0%、53.2%和29.1%。MGM作为选择、鉴定培养基,利用无乳链球菌产生红-橙色色素的特性,通过肉眼观察菌落颜色,一步程序就可以鉴定出无乳链球菌。【结论】该方法为奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌的分离提供了一种快捷、简便的新方法。; 杨学云李建军王蒴吴建勇王登峰王治才; 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌 B群链球菌

无乳链球菌Sip基因的克隆与原核表达被引量：2: 2016年; 无乳链球菌表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic proteins,Sip)具有高度保守性,是无乳链球菌疫苗研究的重要靶标。通过PCR技术扩增Sip基因,将其插入pET-22b载体构建重组质粒pET-22b-Sip,并对重组质粒进行双酶切、PCR鉴定及测序;转入BL21(DE3)中诱导表达,检测重组蛋白的大小及反应原性。结果表明,所扩增Sip基因大小为1 300bp,与GeneBank参考序列同源性为99.16%;蛋白分析表明,目的蛋白大小为50KDa,具有良好的反应原性,为无乳链球菌的免疫预防提供依据和基础。; 杨学云王蒴吴建勇王登峰李建军; 关键词：无乳链球菌表面蛋白

新疆奶牛副结核分枝杆菌的分离鉴定被引量：14: 2016年; 为进一步确定新疆某规模化牛场疑似奶牛副结核病病原,本研究从PCR检测阳性牛粪便样本中共分离获得4株细菌,对其进行菌落形态观察、抗酸染色镜检以及16S r RNA、IS900特异性基因及亚型分型基因的扩增、序列测定与分析。结果显示,所分离的4株细菌为抗酸染色阳性菌,对其IS900基因及亚型分型基因检测均为阳性,它们的16S r RNA、IS900基因及亚型分型基因之间同源性为100%,与Gen Bank中登录的副结核分支杆菌序列同源性在99%以上,从而确定所分离的4株菌株均为Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌。; 吴建勇李建军王登峰杨学云王蒴刘丽娅季新成王治才; 关键词：副结核分枝杆菌奶牛

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王蒴