沈天翔
- 作品数：8 被引量：32H指数：3
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 质粒pXZ10145核苷酸序列测定和分析被引量：6
- 1993年
- 以Sanger双脱氧中止法为原理,利用美国ABI公司370A自动核酸序列分析仪,我们测定了谷氨酸棒杆菌质粒pXZ10145全长4887bp的核苷酸序列,该质粒上存在包括ApaI等18种限制酶的单一切点,其它限制酶切点的数目和位置也被定出,质粒上有8个可能的阅读框架,通过序列分析,我们确定了pXZ10145断裂生成缺失突变体pNAT65的两侧位点,在两个断裂点上发现存在'ATCTAGC'7个碱基的同向重复序列。
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- 关键词：谷氨酸棒杆菌质粒核苷酸
- 谷氨酸棒杆菌质粒pXZ10145自发缺失突变体的特性及其重组质粒的构建被引量：2
- 1991年
- 用谷氨酸棒杆菌质粒pXZ10145转化钝齿棒杆菌T6-13原生质体,得到自发缺失突变体pNAT65,该质粒为2.4kb,仍带有氯霉素抗性,经物理图谱分析表明,质粒pXZ10145Sma I到Cla I位点之间的片段已缺失,仍保留EcoR I、Xba I、Bcl I三个酶的单切点。质粒pNAT65与pBR322用EcoR I酶切连接得到重组质粒pNAR67,这一质粒在E.coli中复制并表现Ap,Tc抗性,但氯霉素抗性能力大大降低,只能抗2μg/ml。
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- 关键词：谷氨酸棒杆菌质粒缺失突变体
- 棒杆菌宿主中质粒不稳定性的研究被引量：3
- 1994年
- 重组质粒pNAR4是由钝齿棒杆菌质粒pNAT65和大肠杆菌质粒pACYC184构建的穿梭质粒。质粒pNAR4转化不同棒杆菌,在钝齿棒杆菌T6-13和谷氨酸棒杆菌10147中为结构型不稳定,在钝齿棒杆菌B9中为分离型不稳定。而pNAT65转化谷氨酸棒杆菌10147后,转化子中的质粒分子大小及主要酶切位点与pXZ10145相同。DNA杂交实验结果表明,在10147菌中有一种与pXZ10145高度同源的超螺旋DNA组分,而这一组分与pXZ10145的来源宿主中的另一小质粒具有相同的分子量。提出了质粒结构不稳定与宿主中存在的pXZ10145高度同源的小质粒(超螺旋组分)有关,并提出产生质粒分子结构反复变化原因的假设。
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- 关键词：棒杆菌质粒DNA杂交
- 棒杆菌质粒pXZ10145复制功能区定位
- 1996年
- 将棒杆菌质粒pXZ10145或pNAT65的不同酶切片段装入大肠杆菌质粒pACYCl77中构建了pTSK系列重组质粒。转化棒状类细菌的实验结果确定了质粒pXZ10145上复制必需区的位置。质粒pXZ10145复制最小必需区定位在NaeI-NruI的1.2kb片段上,在这个片段上只有一个约940碱基的阅读框架。它编码一个质粒复制因子,以对位作用方式协助那些不能自我复制但复制起始区仍保持完整的pTSK质粒在棒状类细菌中复制。质粒pXZ10145复制起始区在一个NaeI-SalI的0.3kb片段上,位于已确定的复制因子编码框架中。
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- 关键词：质粒
- 质粒复制与反义RNA的调控机制被引量：1
- 1992年
- 质粒作为基因克隆和表达载体在基因工程和分子生物学研究中被广泛地应用。质粒自身的性质,如复制,质粒不亲和性的分子基础,传代中的分配机制和接合转移诸方面的研究也在深入地开展。这些研究为进一步完善质粒载体的改造提供了理论基础。
- 沈天翔贾盘兴
- 关键词：质粒反义RNA
- 棒状类细菌电击转化中多种条件对转化效率的影响被引量：21
- 1995年
- 以质粒ＰＸＺ１０１４５电击转化不同棒状类细菌菌株，研究了影响电击转化效率的诸个因素，在含４％甘氨酸的培养基中生长至对数前期的菌体最适用于电击转化，当以同源ＤＮＡ进行电击转化时，１ｕｇＤＮＡ中转化效率最高可达到８×１０＾６转化子，但用异源ＤＮＡ时，转化效率要比前者低１０＾２￣１０＾３倍。
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- 关键词：细菌
- 大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)的克隆和表达被引量：2
- 1997年
- 利用插入失活及营养缺陷型互补法将大肠杆菌K12 13kb的glyA基因克隆到质粒pBR329中。将重组质粒酶切,亚克隆,确定2.6kb PstI-EcoRI亚克隆片段带有完整的glyA基因。共获得12株glyA基因重组菌,对重组质粒进行了酶切鉴定。不同重组菌丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)活性及其酶表达量均不相同。受体菌未检测到丝氨酸的产生。重组菌株JM109(pSM13)、K12(pSM13)、K12(pSM14)和K12(pSM15)SHMT酶表达量分别占全菌可溶性蛋白的15.7％、15.4％、11.8％和9.48％。
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- 关键词：大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶克隆
- 枯草芽孢杆菌噬菌体载体的构建被引量：1
- 1991年
- 以φ105DI:1t为原始株构建的重组噬菌体φ105S35和φ105S36具有自主侵染能力和溶源化特征。其基因组内插入的1kb片段上的cat,基因赋予二者所在宿主以氯霉素抗性。在两株噬菌体中插入位点相同,即原φ105DI:1t的SmaI酶切片段D、E之间,但插入片段在二者中的定向相反。与 cat 基因同时引入的单一 BamHI 和 XbaI 位点提供了外源 DNA 的插入位置。重组噬菌体 DNA 可高效转染枯草芽孢杆菌原生质体。因此φ105S35和φ105S36可作为枯草芽孢杆菌系统的载体而被利用。
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- 关键词：枯草芽孢杆菌噬菌体
