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bcr//abl融合基因特异性多重siRNAs真核表达载体的构建: 研究背景: 慢性髓细胞性白血病/(chronic myeloid leukemia,CML/)是一种造血干细胞的恶性克隆性疾病,其发病机制为染色体易位t/(9;22/)/(q34;q11/),由于bcr基因断裂点...; 林蔡弟; 关键词：RNAI 真核表达载体细胞转染; 文献传递

小鼠巨噬细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定被引量：4: 2010年; 目的采用Gateway技术构建适合酵母表达的小鼠巨噬细胞cDNA文库并进行鉴定。方法将小鼠巨噬细胞的mRNA分离纯化后，以生物素标记的寡聚胸苷酸Oligo（dT）为引物反转录后连接attB衔接子（attBAdapter），层析柱纯化，通过BP重组反应将500bp以上的片段克隆到含attP衔接子的pDONR^TM222载体，电转化人ElectroMAX^TMDHIOB^TM T1 Phage Resistant Cells，构建Gateway入门cDNA文库，并完全随机挑取单菌落，提取质粒酶切鉴定重组子插入片段大小。构建Gateway目的载体，通过LR重组反应将入门文库转入此目的载体成为酵母表达文库，挑取单克隆鉴定重组子插入片段大小。结果经鉴定，入门文库平均滴度为（6．80±0．10）×10^5cfu／ml，文库总容量为7．48×10^6cfu，平均插入片段为（2．20±0．20）kb，重组率为100％。酵母表达文库平均滴度为（3．24±0．10）×10^6cfu／ml，文库总容量为3．89×10^7cfu，平均插入的片段为（2．27±0．15）kb，重组率为95．83％（23／24）。结论构建的小鼠巨噬细胞cDNA入门文库和酵母表达文库都符合高质量文库的要求，可用于进一步的研究。; 王顺清林蔡弟毛平张玉平许艳丽; 关键词：巨噬细胞基因文库 GATEWAY技术酵母菌

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林蔡弟