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抗山羊ΔfosB基因表达产物抗体的制备及应用: 2010年; ΔfosB是fosB基因的自然截短型,稳定存在于许多组织中,在脂肪细胞和成骨细胞的形成和分化中起到重要作用。ΔFosB蛋白可能与钙在骨和乳腺中的代谢有关,并且调控钙从骨向乳腺转移的信号通路。将奶山羊的ΔfosB基因亚克隆到pET32a载体得到pET32a-ΔfosB原核表达载体,IPTG诱导其在大肠杆菌中表达,纯化融合蛋白免疫兔子制备多克隆抗体。ELISA检测显示抗体效价达1:51200,Western blotting结果显示制备的抗体能特异性检测原核表达的ΔFosB蛋白以及在HEK-293细胞中表达的ΔFosB蛋白。进一步的组织差异表达检测表明ΔFosB在山羊的乳腺、骨髓、脑髓、肌肉、心脏、肝和肺组织中均有表达。; 郑惠玲祝珍珍安俊辉杨振宇邢瑞芳闫林慧; 关键词：山羊原核表达多克隆抗体

不同生育期水分亏缺和施氮量对茄子根系生长、产量及水分利用效率的影响被引量：17: 2010年; 【目的】研究3个不同生育期水分亏缺和施氮量对茄子根系生长、空间分布及产量和水分利用效率的影响。【方法】利用盆栽试验,设置低氮(N1,0.1g/kg)、中氮(N2,0.3g/kg)、高氮(N3,0.5g/kg)3个施氮水平,分别在茄子开花坐果期、初果期、盛果期3个不同生育期进行水分亏缺处理,以不亏水处理为对照(CK),共12个处理,对不同生育期水、氮处理茄子的总根长、总根干质量和鲜质量、产量及水分利用效率进行测定,并建立相应的水分生产函数。【结果】在施氮量相同的情况下,与不亏水处理相比,盛果期水分亏缺N1、N2和N3处理对总根长和总根干质量影响显著,其中茄子总根长较对照分别降低了12.39%,18.82%和15.29%,总根干质量分别下降了42.31%,33.46%和25.42%。与对照相比,开花坐果期、初果期、盛果期水分亏缺处理茄子的总根鲜质量在N1处理下分别较对照降低了21.86%,9.35%和39.03%;N2处理下,分别降低了2.7%,14.99%和48.23%;N3处理下,分别降低了41.1%,3.7%和35.07%。与对照相比,开花坐果期、初果期、盛果期水分亏缺处理茄子的产量在N1处理下,分别较对照降低了6.13%,10.84%和14.64%;N2处理下,分别降低了3.94%,5.62%和11.6%;N3处理下,分别降低了11.35%,4.23%和16.14%。随着施氮量的增加,所有处理总根长、总根干质量、鲜质量和产量均呈现先上升后下降的趋势。在低氮和中氮条件下,开花坐果期水分亏缺处理既获得了较高的产量,也实现了较高的水分利用效率。茄子根系干质量在垂直方向上呈对数递减趋势;盛果期水分亏缺对各层根系分布的影响最大;随着施氮量的增加,根系分布呈现高氮浅根化趋势。在N1和N2处理下,水分敏感指数在盛果期最大,其次是初果期和开花坐果期;在N3处理下,各水分敏感指数的大小顺序依次为盛果期>开花坐果期>初果期。【结论】茄子对盛果期的水分亏缺最为敏感,该时期亏水不仅�; 杨振宇张富仓张富仓; 关键词：茄子水分生产效率水分生产函数

山羊PTHrP基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备: 钙是动物体内重要的常量矿物元素之一,是维持机体生理机能的必需物质。甲状旁腺相关肽(Parathyroid hormone related protein , PTHrP)来源于高钙血症相关的恶性肿瘤。在动物泌乳期,PTH...; 杨振宇; 关键词：山羊原核表达多克隆抗体制备; 文献传递

水分亏缺和施氮对茄子生长和水氮利用的影响: 为研究茄子作物在开花座果期、初果期、盛果期三个生育期进行水分亏缺和施氮条件下的生长、生理特性以及水氮耦合利用的机制,论文通过盆栽试验,以陕西绿茄为试验材料,设置低氮(N1,0.1g／kg)、中氮(N2,0.3g／kg)、...; 杨振宇; 关键词：茄子水分亏缺施氮; 文献传递

山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定被引量：2: 2011年; 甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)具有广泛生物学功能,对调控钙代谢具有重要作用。采用RNA干扰和重组腺病毒技术,对山羊乳腺上皮细胞中PTHrP基因表达进行沉默,为进一步研究该基因在乳腺上皮细胞中的功能奠定基础。采用BLOCK-iT shRNA腺病毒干扰系统,将设计好的寡聚shRNA-322/357经退火复性后插入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中。经Western blotting检测干扰效率后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-322与病毒骨架质粒pAd/PL-DEST进行同源重组,成功获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-322,并转染HEK-293细胞,通过包装、扩增后产生干扰重组腺病毒AD-PTHrP-322,TCID50法测定其滴度为2.0×109 PFU/mL。用AD-PTHrP-322感染山羊原代乳腺上皮细胞(MOI=200),经实时定量PCR及Western blotting检测表明在病毒感染24 h、48 h和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中PTHrP mRNA表达量分别下调了29.2%、68.1%和82.6%(P<0.05),其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显。; 邢瑞芳郑惠玲刘雪梅闫林慧安俊辉杨振宇祝珍珍; 关键词：山羊甲状旁腺激素相关蛋白腺病毒

山羊PTHrP基因CDs区克隆及其融合蛋白的表达: 2010年; 【目的】克隆山羊甲状旁腺相关肽(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)基因,并进行原核表达,获得具有生物学活性的融合蛋白。【方法】无菌采集山羊乳腺组织,采用TRIZOL法提取总RNA,RT-PCR克隆山羊PTHrP基因全CDs区。将山羊PTHrP基因全CDs区插入pET-32a(+)表达质粒构建pET-PTHrP质粒,经酶切和测序鉴定后,将其转化E.coliBL21(DE3)菌株,经2mmol/LIPTG、37℃诱导表达8h后,进行SDS-PAGE和Westernblotting分析。【结果】获得了山羊PTHrP基因全CDs区,长534bp(GenBank登录号GU573787);酶切和测序显示,原核表达载体pET-PTHrP构建成功;SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,在E.coliBL21(DE3)中成功诱导表达了pET-PTHrP融合蛋白。【结论】克隆了山羊PTHrP基因,获得了PTHrP融合蛋白。; 杨振宇郑惠玲邢瑞芳祝珍珍安俊辉; 关键词：原核表达蛋白纯化山羊

山羊PTHrP基因的多克隆抗体制备和组织表达图谱分析被引量：4: 2011年; 旨在获得山羊PTHrP多克隆抗体,检测其在山羊各组织中的表达图谱,以便进一步研究山羊PTHrP的功能。本研究构建山羊PTHrP基因的原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达获得融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后多点免疫大耳白兔,制备多克隆抗体,最后使用West-ern blot检测PTHrP在山羊各组织中的表达。结果,酶切和测序显示原核表达载体构建成功;SDS-PAGE电泳结果说明融合蛋白(约36.5 ku)被成功纯化;间接ELISA检测所制备的抗体效价达1∶51 200;表达谱显示PTHrP在山羊乳腺、肾脏、垂体、脑、心脏、肝脏、骨、肌肉、脾脏等组织中均有表达。本研究成功制备了山羊PTHrP的多克隆抗体,发现PTHrP在山羊各组织中广泛表达。; 郑惠玲杨振宇祝珍珍安俊辉邢瑞芳; 关键词：原核表达多克隆抗体山羊

优化酶消化法分离培养及鉴定小鼠前体成骨细胞被引量：1: 2009年; 目的优化小鼠前体成骨细胞体外分离培养方法,提高分离效率。方法用胶原酶A和分散酶消化出生72h以内的小鼠颅盖骨,分离获得的细胞通过光镜观察、碱性磷酸酶活性测定、Von Kossa染色和茜素红染色方法鉴定。结果获得的细胞活力高且具有典型的成骨特性。结论优化酶消化法是一种方便、高效分离小鼠前体成骨细胞的方法。; 郑惠玲安俊辉杨振宇; 关键词：小鼠成骨细胞 ALP 钙化结节

不同滴灌方式和NaCl处理对苹果幼树生长和水分传导的影响被引量：16: 2009年; 为了探讨不同滴灌方式和土壤盐分对苹果(Malus pumila)幼树生长和水分传导(简称水分传导K)的影响。采用3种滴灌方式(交替滴灌(ADI,根区两侧交替灌水)、固定滴灌(FDI,根区固定一侧灌水)和常规滴灌(CDI,根区两侧均灌水))和4个NaCl浓度梯度(0(CK)、0.2%(S1)、0.3%(S2)、0.4%(S3))。结果表明:滴灌方式和NaCl浓度对苹果幼树生长和水分传导有显著影响。在相同的滴灌处理下,随着NaCl浓度的增大,苹果幼树的干物质、叶面积和净生长量及水分传导均显著地下降。根系水分传导(Kr)与总根干重间,冠层水分传导(Ksh)与冠层干重间均呈显著的线性相关关系。在相同的NaCl处理下,与CDI处理相比,ADI处理节水达50%,平均根系干重、冠层干重、总干重、叶面积、净生长量和Kr仅分别下降了8.7%、19.24%、13.47%、11.87%、32.96%和10.72%;这说明ADI处理对果树的生长和Kr具有明显的促进作用。在高盐分S2和S3处理下,ADI处理的叶水分传导(Kl+p)分别降低了33.56%和44.26%,但ADI处理的Kr反而高出了CDI达1.13%和10.91%,说明ADI处理增强了苹果幼树根源水力信号的传输效率和调控苹果幼树体内水分平衡的能力及抗盐分胁迫能力。ADI处理的生长状况和Kr均高于FDI。采用ADI处理进行灌溉不仅提高了节水调控能力,而且也增强了抗盐分胁迫能力。; 杨启良张富仓刘小刚杨振宇; 关键词：滴灌方式 NACL

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