李雷
- 作品数：29 被引量：66H指数：6
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西医疗卫生重点科研课题广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Cdx2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的:构建尾型同源盒基因Cdx2RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定.方法:选取Cdx2基因的19nt特异性序列,设计针对Cdx2的shRNA序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,XbaI和NotI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组病毒质粒及其3种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM 2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,将其浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度.结果:通过对pLL-Cdx2-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Cdx2基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为5×107TU/mL.结论:成功构建人Cdx2基因RNAi慢病毒载体,为研究Cdx2对胃癌生长的影响提供了稳定感染细胞载体.
- 钱倩王晓通谢玉波李雷肖强
- 关键词：慢病毒载体CDX2RNAI
- 转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响被引量：7
- 2008年
- 背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系。本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响。方法:用脂质体LipofectamineTM2000将具有短发夹结构的人E2F-1siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响。结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48h后,MGC803细胞中E2F-1基因mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%。转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:E2F-1siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖。
- 尹永硕肖强谢玉波李雷王长青马玉林唐振勇
- 关键词：E2F-1MGC803细胞增殖
- 同源盒基因CDX2mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义被引量：4
- 2009年
- 目的探讨同源盒基因CDX2mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测CDX2mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。结果胃癌组中CDX2mRNA的阳性表达率为37.9%(22/58),癌旁组为63.8%(37/58),正常对照组不表达,组间比较差异有显著性(P<0.05);CDX2mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率差异有显著性(P<0.05)。结论CDX2mRNA在癌旁和胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间有密切的联系,提示CDX2mRNA的高表达可能与胃癌的发生有关。
- 唐振勇肖强李雷王长青马玉林尹永硕
- 关键词：CDX2实时荧光定量PCR胃肿瘤
- E2F-1对胃癌细胞侵袭转移影响的观察被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨E2F-1对人胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响。方法:利用脂质体将pCMV-E2F-1-HA质粒和pCMV-HA质粒分别转染人胃癌细胞MGC-803,应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中E2F-1基因的表达;应用体外侵袭实验、迁移实验、细胞基质黏附实验和克隆实验分别检测E2F-1对胃癌细胞MGC-803的侵袭力、迁移力、黏附能力和增殖力的影响。结果:转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞检测到E2F-1的表达;转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P<0.05),细胞黏附能力未见明显变化,P=0.072。结论:E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用。
- 马玉林肖强谢玉波李雷
- 关键词：胃肿瘤转染
- RNA干扰介导的转录因子E2F-1沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响被引量：5
- 2011年
- 目的 观察转录因子E2F-1基因RNA干扰（RNAi）的重组慢病毒载体（pLL-E2F-1-shRNA）对人胃癌裸鼠移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为pLL-E2F-1-shRNA组,pLL3.7组,生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共6次,并测量各组肿瘤体积.11 d后处死裸鼠,显微镜观察移植瘤组织形态变化;免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLL3.7组比较,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤生长速度明显减慢（P＜0.05）;病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果显示pLL3.7组和生理盐水组的肿瘤细胞细胞核内有少量棕褐色颗粒沉着,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤细胞细胞核内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果显示pLL-E2F-1-shRNA组E2F-1 mRNA表达较pLL3.7组和生理盐水组明显下降（P＜0.05）,E2F-1蛋白表达较pLL3.7组和生理盐水组减少75.2%和83.9%;pLL-E2F-1-shRNA组的凋亡指数（16.7±5.6）%明显高于pLL3.7组（10.5±4.1）%和生理盐水组（11.2±4.3）%（P＜0.05）.结论 慢病毒载体pLL-E2F-1-shRNA瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.
- 王晓通钱倩李雷谢玉波肖强
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰E2F-1胃癌
- 转录因子E2F-1 mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义
- 2008年
- 目的:探讨转录因子E2F-1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测E2F-1 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。结果:胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72·4%(42/58),癌旁组为50·0%(29/58),正常对照组为27·9%(12/43),组间比较差异有统计学意义(P<0·05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无统计学意义(P>0·05)。结论:E2F-1 mRNA在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1 mRNA的高表达可能与胃癌的发生有关。
- 唐振勇肖强李雷王长青马玉林尹永硕
- 关键词：E2F-1实时荧光定量PCR胃癌
- 转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应被引量：1
- 2008年
- 目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。
- 尹永硕肖强谢玉波李雷王长青唐振勇马玉林崔建华
- 关键词：胃癌MGC803细胞E2F-1重组表达质粒
- 小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察小分子干扰RNA（siRNA）对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响。方法将实验组（E2F-1-siRNA）和阴性对照组（negative control-siRNA）转染进MGC803细胞，48h后采用实时定量聚合酶链反应（PCR）及Western blot技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（M3T）比色法检测MGC803细胞增殖的变化，流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化。结果E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖，与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84．8％和85．3％（F=14．35，P〈0．05），蛋白降低了77．2％和79．6％，MGC803细胞增殖分别抑制了69．0％和81．6％，差异有统计学意义（F=170．18，P〈0．05）；同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2／M期附近，G2／M期DNA含量比例为（54．98±3．46）％，与阴性对照组（44．70±3．82）％和未转染组（31．47±2．12）％比较，差异有统计学意义（F=88．90，P〈0．05）。结论E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达，使G1期细胞的DNA含量下调，细胞分裂停滞在G2／M期附近，抑制胃癌细胞的增殖。
- 尹永硕李雷谢玉波王长青唐振勇马玉林肖强
- 关键词：胃癌小分子干扰RNA细胞周期增殖
- E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机制。方法分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA。纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因。随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证。结果在21522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条。差异基因中有73条功能信息不明。随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果。生物信息学分析显示,E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关。
- 王晓通李雷肖强谢玉波王长青
- 关键词：胃癌E2F-1基因表达谱芯片差异表达基因
- 同源盒基因CDX与胃黏膜肠化生的关系
- 2006年
- 李雷肖强
- 关键词：胃黏膜肠化生同源盒基因小肠上皮胃癌前期
