李琦
- 作品数：40 被引量：36H指数：3
- 供职机构：南京林业大学更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省高校自然科学研究项目江苏高校优势学科建设工程项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程文化科学更多>>
- 一种α-鼠李糖苷酶及其制备方法和应用
- 一种α-鼠李糖苷酶及其制备方法和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；该重组酶最适反应温度高、热稳定性好，在优选条件下可高效表达目的蛋白，因此可在选择性水解芦丁、橘皮苷、柚皮苷、樱桃苷、柴胡皂苷及其它连接α-鼠李...
- 赵林果解静聪李琦裴建军葛林
- 微课在生物制药综合实验教学中的应用探索
- 2018年
- 为了探讨微课结合传统教学方式在生物制药综合实验教学中的应用及效果,以南京林业大学2012和2013级生物制药专业学生作为研究对象,分别接受传统实验教学方式和微课辅助传统教学的授课方式。引入微课教学组的成绩(均分和高分段学生)明显优于传统教学组,学生对微课辅助的教学方式比较欢迎。实践证明,微课在实验教学中的应用可以提高学生的学习兴趣,培养自主学习能力,减轻教师在实验课堂上的教学压力,实现更好的教学效果,值得推广应用。
- 房仙颖赵林果裴建军李琦
- 关键词：生物制药教学改革
- 热解糖梭菌β-木糖苷酶的克隆表达及其水解木二糖的应用被引量：1
- 2022年
- 对来源于Thermoanacrobacterium thermosaccharolyticum的糖苷水解酶39家族的β-木糖苷酶基因Tt-xyl39进行了重组表达和酶学性质的研究,为新型β-木糖苷酶的研发及应用奠定基础。通过比对T.thermosaccharolyticum 571的全基因组序列,从中克隆出一个新型β-木糖苷酶基因Tt-xyl39,并实现了在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中的成功表达。通过Ni-NTA亲和柱层析纯化,得到纯化后的β-木糖苷酶TtGH39。该酶最适温度为50℃,最适pH为5.5,在50和60℃下的半衰期(T_(50))分别为30和6 h,显示出极好的热稳定性;1500 mmol/L的葡萄糖浓度和1000 mmol/L木糖浓度可将酶活力分别提升2.41倍和1.47倍。这不仅表明葡萄糖和木糖对TtGH39具有显著的激活作用,还表明该酶在实际应用中具有很强的耐糖及抗水解产物的反馈抑制能力。TtGH39能有效水解木二糖生成木糖,在50℃、pH 5.5、酶量0.5 U/mg条件下水解0.2和4.0 mg/mL木二糖,3 h后木糖得率分别为99.1%和61.6%。因此,克隆表达的TtGH39是一种热稳定性较高、耐糖性能极强的β-木糖苷酶,有望能为木聚糖降解及其木糖衍生产品的开发利用提供一种新型生物催化剂。
- 姜云鹏李琦郝玉珂童欣怡赵林果
- 关键词：Β-木糖苷酶酶学性质
- 定点突变提高β-木糖苷酶Xln-DT的酶活被引量：2
- 2021年
- 笔者在前期研究中已从嗜热菌Dictyoglomus thermophilum中克隆并异源表达了一种β-木糖苷酶Xln-DT,通过获得高酶活、酶学性质优异的β-木糖苷酶Xln-DT突变体,进而提高其在生物燃料、食品和医药等行业中的应用价值。基于提高比酶活的目的,通过生物信息学方法确定了β-木糖苷酶Xln-DT可突变的关键氨基酸位点,在161、202和231位点处分别引入HIS/LEU、PHE/LEU和TRP,获得Xln-DT比酶活明显提高的突变型酶Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU,并分析比较突变前后的酶学性质。突变型酶Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU的酶活较Xln-DT分别提高了3.28和2.97倍,比酶活分别提高了2.86和2.54倍。Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU的最适pH下降明显,由6.0分别下降至4.5和5.0。Xln-DT-202LEU在75℃下保温2 h酶活维持不变,较Xln-DT在75℃下的温度稳定性相比有明显提高。Xln-DT-202PHE和Xln-DT-202LEU在pH 4.0~7.0的范围内保温24 h,仍能保持80%以上的剩余酶活力。突变型酶不但显著提高了酶的活力,而且热稳定性得到了极大的改善,为其在食品热加工等领域中的应用奠定了基础。
- 李琦李琦姜云鹏蒋玉洁李冬冬赵林果
- 关键词：Β-木糖苷酶分子生物学定点突变酶活热稳定性
- 伴侣蛋白提高木糖苷酶的可溶性表达及其协同酶解木聚糖被引量：1
- 2021年
- 通过分子伴侣蛋白共表达的方式,对6种商业化的分子伴侣蛋白进行筛选以提高β-木糖苷酶(Xln-DT)的可溶性表达量。研究结果表明:构建诱导型质粒pG-KJE8和含有xln-DT基因的重组表达质粒pET-28a-xln-DT共表达系统后,Xln-DT的可溶性表达量为原酶初始表达量的1.31倍;以质量分数2.0%甘油为碳源,质量分数1.2%蛋白胨为氮源,添加0.01 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、5μg/L四环素、1.5 g/L L-阿拉伯糖,32℃下诱导60 h,重组酶的表达量可达11.9 U/mL,较原酶提高了4.22倍。此外,利用内切木聚糖酶(XynB-DT)和Xln-DT协同酶解木聚糖,在添加Xln-DT后,榉木、桦木、玉米芯、燕麦和甘蔗渣5种木聚糖的酶解率分别为84.4%、90.2%、79.6%、77.3%和64.7%,相较于仅添加XynB-DT的酶解率有了显著的提高。
- 李琦朱文慧姜云鹏赵林果
- 关键词：Β-木糖苷酶分子伴侣可溶性表达木聚糖
- Thermoanaerobacterium saccharolyticum JW/SL-YS485来源的GH11家族木聚糖酶的克隆表达及其应用被引量：2
- 2018年
- 对Thermoanaerobacterium saccharolyticum JW/SL-YS485来源的GH11家族木聚糖酶基因xyn11进行了克隆表达研究。xyn11基因全长636bp,编码211氨基酸。通过构建重组质粒,使其在大肠杆菌中实现了活性表达,酶活达到13.8U/mL。重组酶通过热处理和Ni亲和层析达到电泳纯,SDS-PAGE显示其分子量为20000,与理论分子量吻合。重组酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH为4.5,在pH 3.5~6.0范围内保持较高的稳定性,60℃保温1h,酶活还残存60%,Cu^(2+)对该酶有激活作用。重组酶底物特异性强,且不能降解木二糖和木三糖。重组酶以榉木木聚糖为底物,其V_(max)和K_m分别为9809U/mg和5.9mg/mL。榉木木聚糖质量浓度为25g/L,重组木聚糖酶用量为20U/g,在50℃、pH 4.5条件下水解12h低聚木糖的得率为27.8%,水解产物主要由木二糖和木三糖组成,且不产生任何木糖。结果表明,该木聚糖酶催化特性优异,可用于低聚木糖的制备。
- 裴建军李杰李琦李琦
- 关键词：木聚糖酶低聚木糖
- 耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在酶解玉米芯木聚糖中的应用被引量：7
- 2017年
- 为寻求具有耐热性能的木聚糖酶,笔者以嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)DSM3960的基因组为模板,克隆得到木聚糖酶基因xyn B-DT,该基因全长1 083 bp,共编码361个氨基酸,蛋白的理论分子量约为40ku。通过NCBI数据库比对发现该基因编码的蛋白质属于糖苷水解酶G11家族。实现大肠杆菌异源表达重组木聚糖酶Xyn B-DT,通过IPTG诱导,酶活达到30.6 U/mL。该重组木聚糖酶的最适温度为85℃,在60~80℃范围内均有较好温度稳定性,在60℃条件下保温2 h,酶活维持在90%以上,在90℃下保温2 h,酶活尚残余约50%;最适pH为6.5,在pH为5.0~7.5范围内保温24 h仍可保留约90%剩余酶活力。该酶以Beechwood木聚糖为底物,米氏常数(K_m)和最大反应速率(V_(max))值分别为5.63 mg/mL和1.572 mmol/(L·min^(-1))。以玉米芯木聚糖为底物,研究XynB-DT水解玉米芯木聚糖的条件及产物,结果显示在温度70℃、pH 6.0条件下酶解12 h,加酶量为400 U/g,最终酶解得率为44.3%,玉米芯木聚糖的水解产物主要以木二糖和木三糖为主,表明该木聚糖酶在低聚木糖制备方面具有较大应用潜能。
- 李琦陈明真赵林果
- 关键词：木聚糖酶克隆
- 一种α‑鼠李糖苷酶及其制备方法和应用
- 一种α‑鼠李糖苷酶及其制备方法和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；该重组酶最适反应温度高、热稳定性好，在优选条件下可高效表达目的蛋白，因此可在选择性水解芦丁、橘皮苷、柚皮苷、樱桃苷、柴胡皂苷及其它连接α‑鼠李...
- 赵林果解静聪李琦裴建军葛林
- 文献传递
- 一种生物催化转化槲皮素或芦丁生成柽柳黄素的方法
- 本发明公开了一种生物催化转化槲皮素或芦丁生成柽柳黄素的方法，涉及酶工程及生物工程技术领域。本发明首次通过挖掘和鉴定，获得新型O‑甲基转移酶AaOMT，并通过菌酶催化耦合高效转化芦丁生成柽柳黄素，其生物催化剂独特、特异性强...
- 赵林果张海燕李琦张小濛裴建军沈天裕
- 一种耐高温复合酶及其应用
- 一种耐高温复合酶及其应用，由β‑葡萄糖苷酶与β‑木糖苷酶组成。本发明提供的复合酶专一性强，且能够完全转化黄芪甲苷，使得环黄芪醇的转化回收率提高。本发明整个工艺完成时间不超过3 h，大大缩短了环黄芪醇的制备工艺，提高了生产...
- 赵林果李琦裴建军王佳宏苏二正吴涛
