李悦
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 外源性Apoptin蛋白过表达对裸鼠乳腺癌MCF-7移植瘤凋亡活性的影响及机制被引量：1
- 2010年
- 目的 构建表达重组凋亡素（VP3）基因的重组逆转录病毒,探讨其对人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型的凋亡诱导活性及机制.方法 克隆VP3基因,重组法构成逆转录病毒载体pLP-LNCX-VP3（pLLVP3）,转染PT67细胞进行病毒包装;雌激素皮贴刺激法建立去卵巢裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,观察pLLVP3对肿瘤的生长抑制情况,TUNEL法检测肿瘤凋亡,Western blot印迹法检测VP3、Caspase-3和bcl-2蛋白表达.结果 重组载体pLLVP3鉴定正确,滴度为1×10^7 pfu/ml;裸鼠实验pLLVP3组抑瘤率分别为65.52%和68.23%,显著高于对照组（t=4.06,P〈0.01）,48 h可见VP3蛋白高表达.TUNEL见各组凋亡指数无差异（t1=1.05,t2=0.84,均为P〉0.05）.VP3蛋白高表达组Caspase-3表达亦升高,但bcl-2未见差异.结论 VP3基因能够诱导人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡,可能是激活Caspase-3而发生作用.
- 李悦杜杰纪凤颖
- 关键词：乳腺癌逆转录病毒脱噬作用
- 重组凋亡素腺病毒基因诱导人类乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用被引量：2
- 2010年
- 目的 构建重组vp3基因腺病毒pAD-vp3,观察其体内外对人乳腺癌细胞MCF-7的诱导凋亡作用.方法 克隆vp3基因,loxP法同源重组构建重组腺病毒载体pLP-AD-vp3（pAD-vp3）,转染293A细胞进行病毒包装,然后NIH3T3细胞测定病毒滴度;将腺病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7,蛋白免疫印迹（Western blot）检测Apoptin蛋白表达,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制,48 h后流式细胞仪（FCM）法检测肿瘤细胞的凋亡,并应用表面增强激光解析电离-蛋白质飞行时间质谱仪（SELDI-TOF-MS）检测乳腺癌细胞MCF-7标志蛋白变化.建立乳腺癌细胞MCF-7裸鼠模型,分组给予vp3病毒治疗后测定抑瘤率,实时定量聚合酶链反应技术（real-time PCR）检测vp3基因表达,原位凋亡（TUNEL法）检测肿瘤细胞的凋亡情况,并检测肿瘤组织vp3基因表达.结果 重组腺病毒载体pAD-vp3经鉴定连接正确,转染293A后上清液中病毒滴度可达到3×108 pfu;MTT检测48 h细胞抑制率（62.3%）,明显高于正常对照组（P＜0.05）,转染48 h后Western blot可见Apoptin蛋白高表达.FCM检测出现凋亡峰,其凋亡百分率高达31.87%.SELDI检测可见2个蛋白质峰M_5480.8＋H和M_4967.4＋H在两组之间表达量差异有统计学意义（P＜0.05）.裸鼠实验可见pAD-vp3组抑瘤率分别为56.82%和69.53%,明显高于空白对照组（t=4.82,P＜0.01）,且vp3基因高表达,TUNEL检测可见pAD-vp3组和5-氟脲嘧啶（5-Fu）组细胞核呈棕黄色,低剂量和高剂量组凋亡指数与5-Fu组比较差异无统计学意义（t1=1.25,t2=0.86,均为P＞0.05）.结论 成功构建了pAD-vp3腺病毒,vp3基因在体内外均能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡.
- 李悦李珍于雁
- 关键词：乳腺肿瘤基因治疗
