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肝癌细胞系中SP及CD133+细胞的特性分析被引量：4: 2011年; 近年的研究表明体外培养的肝癌细胞系中存在着少量具有肝癌干细胞功能的细胞群。有研究指出肝癌干细胞存在于侧群细胞(sidepopulation,SP)中,另有研究则发现CD133+细胞是肝癌干细胞的特征。本研究以三种肝癌细胞系(Hep3B、Huh-7和PLC/PRF/5)为对象,利用流式细胞术对其中的SP细胞与CD133+细胞进行了分析,并进一步检测了它们的增殖能力、表型及耐药性等特性。结果显示,肝癌细胞系中存在不同比例的SP细胞和CD133+细胞,且大部分SP细胞呈CD133阳性表达。表型特征分析显示SP细胞表达CK7和CK19,不表达AFP,而CD133+细胞则表达AFP和CK19,却不表达CK7。SP与CD133+细胞都具有较强的增殖能力。另外,相比于其它细胞,SP细胞具有最强的化疗药物抗性。结果表明,肝癌细胞系中SP细胞与CD133+细胞整体特征有一定的区别,提示了它们不同的分化途径。; 陈侃田雪君陈兴华贾晓渊钱程李恭楚; 关键词：肝癌干细胞 SP细胞 CD133 肿瘤耐药

人端粒酶RNA突变对HeLa细胞作用: 2012年; 端粒存在于真核生物染色体末端,由特定的DNA重复序列及与之特异性结合的蛋白质构成。在正常人体细胞中,每一次细胞分裂,由于DNA复制时的方向必须是从5′到3′端,因而伴随着染色体末端的端粒逐渐缩短。当端粒缩短到一定程度时,细胞开始走向凋亡。同时,端粒能在端粒酶作用下延伸,利用自身的RNA为模板合成端粒DNA。文章通过突变端粒酶RNA靠近模板的序列碱基A61 A62/GG以及G63 G64/AA,构建穿梭质粒,转染HeLa细胞,研究端粒酶位点突变对细胞生长的影响。研究结果显示不同的突变位点对HeLa细胞分裂活性有明显影响,这为深入研究肿瘤的分子遗传机制提供参考。; 翁钰璟李恭楚田晓平刘红彦刘莉刘小川; 关键词：端粒端粒酶 HELA细胞定点突变转染

理工类院校《分子生物学》双语教学的实践与思考被引量：1: 2013年; 分子生物学是理工类院校生物技术理论与实际应用紧密联系的主要专业基础课,也是生命科学领域的带头学科。分子生物学双语教学对于提高人才培养质量和学生的专业兴趣具有重要意义。本文简要总结了理工类院校生物技术专业分子生物学双语教学过程中的一些实践和思考,分析了教学过程中存在的一些问题以及相应的改进对策。; 王毅刚李恭楚; 关键词：分子生物学双语教学

融合蛋白EGFP-PPA原核表达及标记肿瘤细胞研究被引量：2: 2010年; 肿瘤细胞糖基化改变是非常普遍的现象,与恶性肿瘤的发生发展有着密切的关系。掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA)是一种甘露糖特异性结合凝集素,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein EGFP),通过基因工程技术形成融合基因,并在大肠杆菌中表达纯化了EGFP-PPA融合蛋白。实验结果表明,此融合蛋白可以识别实体肿瘤细胞表面的一部分标志,如Hep3B、Hu7、PLC、BEL-7404以及A549,而不能识别肝正常细胞L02,提示实体瘤细胞表面显露的甘露糖残基被此融合蛋白所识别,说明PPA识别具有甘露糖表型的实体瘤细胞表面的一部分,这些实验结果为进一步阐明甘露糖显露细胞在肿瘤发生发展中的作用提供了新的研究手段。; 李新牛娜李娜陈磊路巧然席璐李恭楚; 关键词：融合蛋白甘露糖肿瘤

蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究: 2011年; 研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-κB与凋亡蛋白PARP表达的影响。采用CCK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-κB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况。CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-κB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白。以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关。; 陈磊范丽李新谢国良何国清路巧然吴欣欣李恭楚; 关键词：蛋白酶体抑制剂细胞凋亡 NF-ΚB PARP

一种对羟基磷灰石进行荧光标记的方法: 本发明公开了一种对羟基磷灰石进行荧光标记的方法。该方法是将生物荧光素-异硫氰酸荧光素通过吸附或共价键等方法连接到羟基磷灰石颗粒上，使羟基磷灰石颗粒被标记上荧光。本发明采用的标记物异硫氰酸荧光素，是一种生物荧光素，具有较好...; 蔡玉荣姚菊明李恭楚王秀华; 文献传递

sCAR-PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化: 2010年; 为获得腺病毒受体sCAR与掌叶半夏蛋白(PPA)的亚基B(PPAb)的融合蛋白,将PPAb基因克隆入已构建的原核表达载体pQE30-sCAR中,经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pQE30-sCAR-PPAb,转化大肠杆菌M15后获得工程菌。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-PPAb。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,在42 kD左右有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-PPAb能提高Ad-EGFP对Kasumi-1的感染效率。; 李娜王双辉岳学田张艳红仰毅武玉梅李新牛娜李恭楚; 关键词：PPA

脱毒半夏抗肿瘤蛋白及半夏品质系列研究: 丁先锋刘小川吕正兵徐涛李恭楚杨东风梁宗锁胡秀芳; 脱病毒半夏由于生长迅速、产量高、品质优、规格均一，发展前途很大，在浙江等地已有种植。该研究成果致力于对脱病毒组织培养半夏中所含的毒蛋白类成分进行分离纯化、结构研究、半夏蛋白基因克隆及结构改造、抗肿瘤效果等进行研究分析，结...; 关键词：; 关键词：半夏中药抗肿瘤活性生物反应器

靶向白血病干细胞作为治疗的新策略被引量：1: 2008年; 白血病干细胞被认为是白血病发生、发展及治疗后复发的根源,具有其特异的性状特征,以及自我更新、增殖和分化等能力。近年来以白血病干细胞作为治疗靶点已成为白血病治疗的一种新策略,目前的研究主要针对白血病干细胞表面分子、细胞内信号通路及与微环境的相互作用这三方面展开。对白血病干细胞的进一步认识将有助于提供新的更为有效的治疗靶点。; 张艳红李恭楚; 关键词：白血病干细胞靶向

靶向CD123的溶瘤腺病毒在体内外抑制急性髓性白血病细胞增殖: 临床研究已经发现IL-3受体a链(CD123)在急性髓性白血病细胞上高表达,而且与低生存率相关.本研究通过在溶瘤腺病毒基因组内插入腺病毒受体CAR和白介素3融合蛋白(sCAR-IL3)的表达框,构建出通过CD123感染白...; 李恭楚

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李恭楚