目的研究p53 249编码子突变对小鼠EF细胞p53功能和信号传导的影响。方法利用基因打靶技术在小鼠ES细胞p53基因249编码子中引入点突变，使编码子249由Arg变成Ser，根据同源重组规律采用PCR或Southern方法筛选带有p53 249突变的阳性ES细胞，并通过测序确定该ES细胞的p53 249编码子已经由Arg变成Ser，然后将含突变而不含筛选标记的ES细胞微注射到从Hprt-／-小鼠收集的囊胚中，将注射过的囊胚植入假孕的雌性小鼠子宫，到第14天取小鼠胚胎EF细胞，用含HAT的培养液EDMEM含10％FCS，glutamine，antibiotics，50 mM mecaptoethanol，和HAT（0．016mg of hypoxanthine／ml，0．01 mM aminopterin，0．0048mg of thymidine／m1）]筛选出从ES细胞分化而成的MEF细胞，经测序证实该细胞含有249Arg到Ser的突变后，该细胞用于研究。利用细胞流式仪检测该突变对MEF细胞周期及凋亡的影响，并利用Western检测相关蛋白的表达。结果（1）用uV处理EF细胞后，含p53249编码子突变的EF细胞凋亡百分数，较含野生型p53的EF细胞凋亡百分数明显减少（P〈0．05）。（2）用UV处理EF细胞后，含p53 249编码子突变的EF细胞对UV诱导的G1／G0细胞周期阻滞作用减弱。（3）用UV处理细胞后，含p53 249编码子突变EF细胞的p53的表达，与含野生型p53EF细胞p53的表达没有差别，但含p53249编码子突变EF细胞的BAX和p21的表达，较含野生型p53EF细胞的BAX和P21的表达减少。结论p53 249编码子突变可以减弱p53在UV诱导MEF细胞周期阻滞和凋亡过程中的作用，但对p53的表达没有影响。
