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培养条件对HBsAg转基因人参细胞的生长及表达量的影响: 1.方法1.1 HBsAg转基因人参细胞的培养选用不含植物激素的67-V培养基为基本培养基,分别用葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖作为碳源;硝酸钾、硫酸铵作为氮源;乳清蛋白酵母浸出物和谷氨酸作为有机成分;并设计了; 李娟盛维瑾刘大为刘丹盛军; 文献传递

人参愈伤组织细胞冻干及超低温保存方法: 本发明提供了人参愈伤组织细胞冻干及超低温保存的方法，其中使用海藻糖作为人参细胞冻干及超低温保存保护剂组分。本发明还涉及一种保存的人参愈伤组织细胞。采用本发明的方法，保护人参愈伤组织细胞的效果明显。; 盛军刘晓宇李娟刘丹回悦君郭桥于海鹏王志武张雪梅蔡伟明; 文献传递

培养条件对HBsAg转基因人参细胞的生长及表达量的影响被引量：2: 2007年; 目的研究培养条件对HBsAg转基因人参细胞生长及HBsAg表达量的影响。方法通过单因子实验,分别考察碳源、氮源、有机成分对HBsAg转基因人参细胞生长和HBsAg表达量的影响,并通过不同组合实验,探索氮源浓度、有机成分和起始pH的最佳组合。结果在3%蔗糖、10mmol/L氮源、0·25%乳清蛋白和起始pH6·2的情况下,细胞生长量略有增加,HBsAg的表达量增加1倍。结论通过改善培养条件,可以提高HBsAg转基因人参细胞的生长速度和抗原表达量。; 李娟盛维瑾刘大为刘丹刘晓宇高正伦富锐丽高平徐彦红盛军; 关键词：乙型肝炎表面抗原

霍乱毒素B亚单位植物细胞表达载体的构建及其在人参细胞中的表达: 2009年; 目的构建霍乱毒素B亚单位(CTB)植物细胞表达载体,并在人参细胞中进行表达。方法根据人参偏爱密码子,采用引物延伸PCR法合成CTB基因,连入pBI121质粒,构建植物细胞表达载体,转化人参细胞后,采用PCR、RT-PCR和Western blot进行鉴定。结果测序结果表明,PCR法合成的目的基因序列与设计完全一致,构建的植物细胞表达载体经双酶切鉴定显示,所含基因片段大小与预期相符。提取转基因人参细胞基因组DNA和mRNA,分别进行PCR和RT-PCR鉴定,均可见约400 bp的特异性片段。Western blot分析可见相对分子质量约12 000的特异性条带。结论已成功构建了含霍乱毒素B亚单位的植物细胞表达载体,并在人参细胞中获得表达。; 任琦宋之明刘丹孙洋于海鹏李娟富锐丽刘英盛军; 关键词：转基因

应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量被引量：283: 2000年; 目的　应用考马斯亮蓝法检测总蛋白含量。方法　应用考马斯亮蓝法与凯氏法和Ｌｏｗｒｙ法同时进行不同生物制品的总蛋含量检测。结果　考马斯亮蓝法操作简便，灵敏度高，重复性好，测定蛋白的线性范围为５～２５ｕｇ，ｒ＝０．９９９５，ｎ＝５，平均回收率为１０１．３％。结论　考马斯亮蓝法是检测生物制品总蛋白含量的理想方法。; 李娟张耀庭曾伟罗璇廖长春; 关键词：考马斯亮蓝生物制品

表达乙肝病毒表面抗原人参细胞系统的建立被引量：2: 2005年; 目的建立乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统。方法构建含有HBsAg基因的植物细胞表达载体质粒pBIBSb。采用农杆菌感染人参细胞的方法,经农杆菌培养、农杆菌与受体细胞共培养、受体细胞的脱菌培养以及转化体细胞的选择培养后,筛选在G418抗生素培养基上正常生长的细胞株。应用ELISA方法检测抗性细胞株的HBsAg表达;提取基因组DNA进行PCR扩增反应。结果质粒pBIBSb的酶切结果正确。经G418抗生素筛选得到8株正常生长的细胞株,其中5株能够表达HBsAg,提取基因组DNA进行PCR扩增反应,得到大小约700 bp的扩增片段。结论获得了整合HBsAg基因,并能够稳定表达HBsAg的人参细胞表达系统。; 刘丹盛军刘晓宇于海鹏王志武李娟姚为民杨贵贞; 关键词：基因转化乙肝病毒表面抗原抗生素细胞培养

乙肝基因的植物表达载体质粒、乙肝基因转基因细胞系及其工业化生产应用: 本发明涉及表达乙肝病毒表面抗原的转基因植物细胞系以及植物细胞表达系统。本发明还涉及制备上述细胞系或表达系统的方法，以及上述细胞系或表达系统在制备乙肝病毒表面抗原蛋白中的应用。本发明所公开的细胞系或表达系统可用于制备乙肝病...; 盛军刘丹刘晓宇郭桥于海鹏李娟回悦君王志武张雪梅; 文献传递

转基因人参细胞中HBsAg的表达及稳定性研究被引量：1: 2006年; 目的对转基因人参CS83细胞系表达HBsAg的特异性、稳定性及表达效率进行分析。方法提取CS83细胞表达蛋白,分别以Lowry法和ELISA法检测总蛋白含量和HBsAg含量,SDS-PAGE和Western blot分析表达蛋白的HBsAg特异性。采用冷冻干燥、干燥和低温处理方法检测CS83细胞中HBsAg的稳定性。结果CS83细胞表达产物中总蛋白含量为2·024mg/g,HBsAg含量为504ng/g,占总蛋白含量的0·025%。表达的目的蛋白相对分子质量约为25000,具有HBsAg特异性。经不同方法处理后的保存结果表明,冻干保存稳定性最好。结论所建立的CS83细胞系能够稳定地表达特异性HBsAg。; 吉海滨刘丹刘黎红李娟于海鹏富锐丽李铮盛军; 关键词：HBSAG 稳定性

表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株的建立被引量：1: 2009年; 目的建立表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。方法采用PCR方法分别扩增HBsAg及rhIFNα2b基因,以GS linker连接后,克隆入表达质粒pBI121,构建植物细胞表达质粒pBISI,转化农杆菌LBA4404,感染人参愈伤组织细胞。经G418筛选抗性细胞株,提取细胞基因组DNA,进行PCR检测;应用ELISA法检测HBsAg及rhIFNα2b的表达;通过Western blot分析表达蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pBISI经酶切鉴定,表明构建正确。筛选得到3株正常生长的人参细胞株,基因组DNA扩增得到约1200bp的融合基因片段;经ELISA检测,其中1株能够表达HBsAg及rhIFNα2b;表达的蛋白与鼠抗HBsAg血清在相对分子质量35000处出现特异条带。结论已获得了表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。; 于海鹏刘丹薛雁任琦李娟富锐丽李铮姚为民盛军; 关键词：HBSAG 重组人干扰素Α2B 融合蛋白

应用植物组织培养技术表达重组蛋白的研究: 盛军刘晓宇李娟金立杰刘丹于海鹏回悦君刘英; 建立无激素培养人参愈伤组织细胞的工艺体系，为利用组织培养人参细胞表达和生产药用重组蛋白提供了一个我国独有的技术平台。同时，为天然药物及其有效活性成分的工业化生产开辟一条新的有效途径。获得无激素人参愈伤组织细胞系。建立起转...; 关键词：; 关键词：植物基因工程

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李娟