朱明洁
- 作品数：24 被引量：31H指数：4
- 供职机构：上海市肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市科委纳米专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 豌豆凝集素化载多西他赛聚羟基丁酸酯纳米粒对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞摄取实验及抑制作用
- 2016年
- 目的:考察豌豆凝集素化载多西他赛聚羟基丁酸酯纳米粒[pisum sativum agglutinin-anchored docetaxel poly(β-hydroxybutyrate)nanoparticles,PSA-DTX-PHB NPs]对人乳腺癌MCF-7细胞的摄取情况和抑制作用。方法:通过激光共聚焦显微镜观察纳米粒与MCF-7细胞共孵育4h后纳米粒的摄取情况。用MTT法测定纳米粒与MCF-7细胞共孵育24、48和72h后MCF-7细胞的存活率。结果:激光共聚焦显微镜观察显示,豌豆凝集素的修饰能够显著提高MCF-7细胞对纳米粒的摄取量。MTT法发现,载体材料聚羟基丁酸酯对MCF-7细胞无明显细胞毒性。72h时,DTX、DTX-PHB NPs和PSA-DTX-PHB NPs的半数抑制浓度(IC50)分别为(70.24±1.85)、(56.93±1.76)和(9.37±0.97)μg/ml。结论:与空白纳米粒相比,豌豆凝集素化修饰能够显著提高多西他赛纳米粒向MCF-7细胞的递药效率,从而增加其体外细胞毒性。
- 李波朱明洁段友容徐希明李凤前
- 关键词：多西他赛豌豆凝集素MTT法
- 五行汤经钙离子/溶酶体途径介导的SGC-7901细胞凋亡
- 2011年
- 目的探索五行汤经钙离子/溶酶体途径介导的SGC-7901细胞凋亡机制。方法吖啶橙染色检测溶酶体膜完整性,胞浆蛋白免疫印迹法检测凋亡途径蛋白变化,Annexin V结合实验和CCK-8法检测不同抑制剂对细胞凋亡和存活的影响。结果凋亡细胞的溶酶体膜渗漏,溶酶体释放蛋白酶Cathepsin D和Cathepsin B至胞浆。天冬氨酸蛋白酶Cathepsin D抑制剂对五行汤诱导的细胞凋亡无影响;半胱氨酸蛋白酶Cathepsin B、L、S抑制剂可明显减少细胞凋亡(P<0.05),且对细胞的保护作用呈浓度依赖性。结论五行汤经钙离子/溶酶体途径介导SGC-7901细胞凋亡。
- 莫非胡晶莹甘愉赵仰星朱明洁赵新泰段友容
- 关键词：细胞凋亡钙离子溶酶体
- 抗人小细胞肺癌T细胞受体嵌合基因的克隆
- 1997年
- 目的克隆人小细胞肺癌抗体／Ｔ细胞受体嵌合基因。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术将人小细胞肺癌单克隆抗体的变区ＶＨ、ＶＫ与Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）恒区Ｃα、Ｃβ进行拼接，构建成ＶＨＣβ、ＶＫＣα嵌合ＴＣＲ，并分别克隆至ｐＭＡＭ、ｐＸＴ１真核表达载体。结果应用ＰＣＲ中重叠延伸剪接（ＳＯＥ）方法，能简化基因拼接步骤；该嵌合基因的克隆有助于对肿瘤免疫治疗新途径的探索。
- 曹晓运朱明洁张中华王斌黄震宇李斯德
- 关键词：T细胞聚合酶链反应肺肿瘤嵌合基因
- 抗人整合素β3亚基单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中表达
- 2006年
- 目的:构建抗人整合素β3亚基单链抗体(ScFv)基因,在大肠杆菌中表达并获得具有活性的ScFv。方法:从分泌抗人整合素β3亚基单抗(mAb)的杂交瘤细胞4F12中提取总RNA,RTPCR扩增VH和VL基因,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,并将其克隆至原核表达载体pQE中,获得含β3抗体基因的高效表达载体pQEβ3ScFv。将重组子转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和凝胶柱上在位复性。结果:获得抗β3单抗的VH和VL基因,构建了pQEβ3ScFv,并在大肠杆菌中获得了表达,表达蛋白相对分子质量约为26×103,以包涵体形式存在,纯化和复性后,ELISA证实其具有良好的抗原结合活性。结论:成功构建、表达了抗人整合素β3亚基的ScFv基因,并获得了有活性的ScFv。
- 马艳春朱明洁张毅胡晶莹杨瑶琴赵新泰
- 关键词：抗肿瘤药抗体基因表达
- 抗人整合素β3亚基单克隆抗体的制备及其抗肿瘤活性的研究被引量：2
- 2007年
- 目的制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),研究其对肿瘤治疗的作用。方法用RT-PCR方法扩增人β3胞膜外基因,将其克隆至原核表达载体pQE30中,获得含β3胞膜外基因的高效表达载体pQE30-β3,将其转化大肠杆菌M15,通过诱导表达及纯化,获得β3蛋白。将此蛋白免疫BALB/c小鼠,应用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗β3亚基mAb,Western blot鉴定mAb的特异性。通过小鼠体内抑制黑色素瘤生长实验筛选出具有抑制肿瘤生长作用的mAb。进一步用MTT法及流式细胞术观察该mAb体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及诱导其凋亡的作用。结果扩增获得了β3胞膜外基因,构建了β3蛋白的原核表达载体,表达纯化了β3蛋白,成功制备了8株mAb,Western blot证明了其特异性。经过体内抑瘤实验筛选出一株具有显著抑制肿瘤生长的mAb4F12。该mAb可抑制HUVEC细胞增殖并诱导其凋亡。结论成功表达了β3蛋白,并制备了有活性的mAb,抗体具有抑制肿瘤生长的作用,这可能是通过抑制血管内皮细胞的增殖和诱发凋亡实现的。
- 马淑花甘愉张毅朱明洁胡晶莹杨瑶琴赵新泰
- 关键词：整合素Β3单克隆抗体肿瘤治疗
- 小细胞肺癌2F7单抗ScFv的高效表达及复性研究被引量：4
- 2003年
- 目的在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体(ScFv),并获得具有生物学活性的ScFv。方法利用:PCR方法将2F7单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一人工设计的柔性连接肽(Linker)连接,再将单链抗体基因重组到原核表达载体pQE31中,构建单链抗体高效表达载体pQE-2F7-ScFv。将pQE-2F7-ScFv质粒转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和稀释复性。结果 获得了2F7单链抗体的高效表达,表达蛋白大小约27.4kD,以包涵体形式存在。包涵体蛋白在经过变性、纯化和稀释复性后,获得了有功能的单链抗体。结论 成功地构建和表达了小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体,并对其进行了纯化和复性,将进一步促进2F7单抗小分子抗体的应用。
- 马钢张毅胡晶莹朱明洁赵新泰
- 关键词：SCFV复性小细胞肺癌单链抗体
- 抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体（mAb），对其进行特性鉴定，为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480bp的原核表达载体pQE30ANXI，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，并用Ni—NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白I作为抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化，制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体，用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ImAb的杂交瘤细胞，分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3，所产抗体，均为IgGl亚型，轻链均为K链，亲和力为（2．3～3．03）×10^8L／mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs，为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。
- 蔡幸胡晶莹莫忠根朱明洁赵新泰
- 关键词：杂交瘤
- 抗人肺腺鳞癌单克隆抗体的研制被引量：2
- 1995年
- 将人肺腺癌细胞ＳＰＣ、Ａ５４９、Ａ４２７序贯免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。获得一株稳定分泌抗肺腺鳞癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株──Ｓ５Ａ１０─２，制备了小鼠腹水抗体并进行了纯化，腹水效价为１．０２×１０７，亚型测定为ＩｇＧ１．免疫组化分析ｓ５Ａ１０－２单抗与肺腺、鳞癌和肺鳞癌有较好的选择反应性，与正常组织无交叉反应，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ测定Ｓ５Ａｌ０─２在ＳＰＣ细胞膜上的抗原分子量为４０Ｋｄ、５０Ｋｄ和８０Ｋｄ，在Ａ５４９，细胞膜上的抗原分子量为４３Ｋｄ，而与Ａ４２７细胞膜蛋白无明显反应。该抗体的亲和常数为８．４３×１０１０Ｍ－１，Ｓ５Ａ１０－２杂交瘤细胞株，经液氮冻存后复苏，其分泌抗体能力不受影响。
- 沈琼杨瑶琴郭虹汾莫忠根朱明洁李斯德
- 关键词：腺癌鳞癌杂交瘤抗体单克隆抗体
- 抗人小细胞肺癌单抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的构建和表达
- 2003年
- 目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带有人恒定区基因的表达载体pSW1 Fab中 ,构建得到pSW1 2F7Fab ,转化受体菌E .coilXL1 Blue ,IPTG诱导表达 ,经Westernblot和ELISA鉴定表达蛋白的活性。结果 :从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆获得了抗体重、轻链可变区基因。测序证实 2F7单抗的重链 (VH)可变区基因全长 36 2bp ,编码 12 0个氨基酸 ;轻链 (VL)可变区基因全长 319bp ,编码10 5个氨基酸。构建的 2F7人 鼠嵌合Fab表达载体诱导后获得了目的蛋白的表达 ,主要分泌在菌液的上清中 ,表达量较高且稳定 ,具有与NCI H1 2 8细胞特异性结合的活性。结论 :构建和表达了抗人小细胞肺癌单抗 2F7人 鼠嵌合Fab片段 ,表达产物具有与抗原结合的特异性 ,为进一步研究和应用打下了基础。
- 林琳鲁驰朱明洁胡晶莹赵新泰
- 关键词：人-鼠嵌合抗体FAB片段基因工程
- 正鑫一消贴对癌症小鼠疼痛的缓解作用及临床疗效观察被引量：5
- 2010年
- 目的观察正鑫一消贴对癌症疼痛的镇痛作用并初步评价其抗肿瘤效果。方法建立小鼠肿瘤模型,温水浴测尾和痛针刺激足跖,从热和机械力刺激两方面检测正鑫一消贴对小鼠痛阈的影响。临床观察中随机选择临床影像学和病理检查确诊的中、晚期肿瘤伴轻、中、重度疼痛患者60例。患者按NRS疼痛程度评分分为两组,NRS疼痛评分1-6分者(轻度、中度疼痛)为A组,共38例,以正鑫一消贴治疗或贴剂联合非甾体类抗炎止痛药或弱阿片类止痛药。NRS疼痛评分为7～10分者(重度疼痛)为B组,共22例,采用正鑫一消贴剂联合口服吗啡止痛治疗。所有患者均自测疼痛强度、一般状况及药物不良反应。结果动物试验温水浴测尾法显示,正鑫一消贴使用30min后受试动物痛阈有提高趋势,2h镇痛效果确切,24h仍有镇痛效果;痛针试验显示,正鑫一消贴能有效提高小鼠耐痛克数(本实验以耐受痛针克数反映耐痛程度),有一定的镇痛作用,效果略弱于芬太尼。临床观察结果,A组与B组止痛有效率分别为94.7%(36例/38例)、59.1%(13例/22例);两组均未见与贴剂相关的毒副反应。结论正鑫一消贴有一定的抑制肿瘤疼痛的作用。临床应用有望改善中晚期肿瘤患者的一般状况。
- 王琪万智勇朱明洁周显勇段友容
- 关键词：癌痛止痛
