张兰
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 西罗莫司对肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的抑制作用被引量：2
- 2008年
- 目的:在细胞水平探讨西罗莫司[sirolimus,又名雷帕霉素(rapamycin)]的抗肾纤维化作用。方法:采用原代培养的大鼠肾皮质肌成纤维细胞(myofibroblast,MyoF)。实验各时间点分别设对照组和用西罗莫司40mg/L处理组。将细胞培养12h,24h,48h后分别收集细胞和细胞培养上清液,用Western blot方法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ-)和上清液中FN,ColⅠ-蛋白水平的表达;用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)法检测细胞培养1h,2h,4h,6h各时间点前胶原Ⅰ(procollagenⅠ-)mRNA表达的变化;用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性。实验结果分别以各时间点对照组作为基线1,计算与对照组的比值。结果:(1)西罗莫司于各个时间点对细胞内α-SMA的表达均无影响。(2)用西罗莫司处理后,于24h对细胞内ColⅠ-蛋白表达量明显少于对照组,并持续至48h,分别为各时间点对照组的(0.58±0.05)倍和(0.63±0.18)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)与各时间点对照组相比,细胞内procollagen-ⅠmRNA在1h,2h时表达均减少,分别为(0.38±0.05)倍和(0.55±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.05),于4h恢复到基础水平。(4)培养细胞上清液中12h即有ColⅠ-基础表达,经西罗莫司处理24h其表达量较对照组明显减少,为对照组的(0.59±0.25)倍,差异有统计学意义(P<0.05),持续至48h仍呈减少趋势,为对照组的(0.52±0.21)倍,P<0.05。(5)细胞内FN蛋白表达趋势与上清液中一致,24h其表达量较对照组明显减少,分别为对照组的(0.44±0.09)倍和(0.40±0.15)倍,差异均具有统计学意义(P<0.05),48h西罗莫司对FN的抑制作用消失。(6)经西罗莫司处理12h,24h和48h,上清液中MMP-2和MMP-9的活性均无明显变化。结论:西罗莫司可以通
- 张兰黄海长李惊子刘颖
- 关键词：西罗莫司成纤维细胞纤连蛋白类
