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利用钙离子通道阻断剂基因构建高效广谱杀虫工程菌: 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)能产生具有由特异杀虫蛋白组成的伴胞晶体,该种环境友好杀虫剂占据了生物杀虫剂90%的市场。但Bt在应用中存在杀虫毒力较化学杀虫剂弱、杀虫谱较窄和易导致...; 李文萍张祥丽夏立秋丁学知孙运军胡胜标罗玉双吕媛黄璠唐滢; 关键词：钙离子基因构建

通过两种糖多孢菌属菌株原生质体融合提高多杀菌素产量研究被引量：6: 2019年; 多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌产生的一种新型绿色环保杀虫剂,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性。本研究通过将红色糖多孢菌和刺糖多孢菌两种菌株做原生质体融合探究来得到高产多杀菌素的菌株。首先构建了不产红霉素的红色糖多孢菌工程菌株,然后将其与刺糖多孢菌做原生质体融合,经加有抗生素平板培养基及发酵液HPLC分析筛选,得到了产多杀菌素的4株融合菌株。基于4株融合菌株多杀菌素产量都不及起始菌株高,接着采用不加抗生素直接筛选的方法,成功筛选到若干高产多杀菌素的融合菌株,其中菌株B-2多杀菌素产量提高最为明显,较原始菌株增加了331%,并用质谱分析做了进一步的验证。融合菌株B-2后续传代培养多杀菌素产量稳定,表明遗传稳定性较好。本文对红色糖多孢菌和刺糖多孢菌原生质体融合进行了探究并且成功提高了多杀菌素的产量,这为具有优良发酵特性的红色糖多孢菌和刺糖多孢菌融合菌株的构建提供了重要基础。; 易卓夏立秋丁学知胡胜标罗玉双王海龙唐滢黄鑫; 关键词：多杀菌素生物农药原生质体融合质谱分析

多杀菌素研究进展: @@本实验室从436份土壤中分离出的两株放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa).经对多杀菌素成分分析和杀虫生物活性测定，呈现了较高的杀虫毒力，其中一株已成为国家发明专利菌种(CCTCC M...; 夏立秋唐滢杨尉寇笑笑张友明黄科学余子全胡胜标罗玉双黄瑶易勇全梅芳; 关键词：多杀菌素刺糖多孢菌原生质体; 文献传递

聚酮化合物β-酮酰-ACP合酶的计算机对比分析与组合生物合成: 2010年; 为了合理地设计新的聚酮化合物提高组合生物合成的效率,本文使用ClustalW、Mega4.0分析了26种来自不同聚酮合酶的β-酮酰-ACP合酶结构域的序列特征,并用ProtParam、Phdsec、Swiss-Model等工具对其中9种具有不同底物专一性的β-酮酰-ACP合酶的一级结构、二级结构和三级结构及活性位点进行了分析与预测。发现它们结构上的相似性大于序列上的相似性;活性位点都富含丝氨酸;底物含有2个羧酸基团的β-酮酰-ACP合酶的理论pI均小于5.0且其形式电荷总量也偏低;序列V303ELHGTGTPLGDPIEAGA320是这26种β-酮酰-ACP合酶的一段保守序列,但它并不与活性位点相邻。这些研究对进行聚酮合酶的模块或结构域替换以及定点突变具有重要的指导意义,也为探讨其的进化机制提供了参考。; 唐滢夏立秋王海龙胡胜标余子全孙运军; 关键词：组合生物合成底物专一性

透明颤菌血红蛋白基因在刺糖多孢菌中整合表达促进多杀菌素的生物合成被引量：2: 2012年; 为解决刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)高密度深层培养过程中的供氧不足问题,促进多杀菌素的生物合成,采用重叠PCR技术将透明颤菌(Vitreoscillastercoraria)血红蛋白基因(vgb)可读框(ORF)置于红霉素抗性基因启动子(PermE)之下,并将其克隆到整合型载体pSET152上,构建成vgb表达载体pSET152EVHB;通过接合转移方式将其导入刺糖多孢菌SP06081中,利用载体上ΦC31整合性位点通过位点特异性重组将vgb定点整合到SP06081菌株染色体上,获得一株遗传性能稳定的重组菌株S078-1101;重组工程菌的PCR与Southern blotting检测显示vgb已整合到染色体上,一氧化碳结合差光谱分析表明在S078-1101工程菌中表达了有活性的透明颤菌血红蛋白(VHb);摇瓶发酵结果显示,在正常溶氧与中度限氧状态下,vgb的表达均可显著促进多杀菌素的生物合成(P<0.01).这说明vgb在刺糖多孢菌中的整合表达改善了菌体对溶氧的吸收性能,是一种有效的定向遗传改良手段.; 罗玉双寇笑笑丁学知胡胜标唐滢李文萍黄璠杨琦陈汉娜夏立秋; 关键词：刺糖多孢菌多杀菌素透明颤菌血红蛋白同源重组

刺糖多孢菌中铵载体蛋白基因amtS的克隆及功能研究被引量：2: 2015年; 目的:铵离子是细胞内合成各种核酸、氨基酸和辅助因子等含氮化合物的重要原料之一。微生物细胞膜上的铵载体蛋白介导了铵离子的转运。通过异源表达刺糖多孢菌中铵载体蛋白基因,研究其对链霉菌产孢能力和次级代谢产物产量的影响。方法:从刺糖多孢菌S04-41菌株中克隆铵载体蛋白基因amt S,通过接合转移导入天蓝色链霉菌M145和变铅青链霉菌TK24中,分析比较amt S基因的异源表达对其产孢能力和次级代谢产物产量的影响。结果:天蓝色链霉菌重组菌株M145/p MF-amt S和变铅青链霉菌重组菌株TK24/p MF-amt S中放线紫红素的产量分别提高了2.85倍和30.02倍。结论:刺糖多孢菌中的铵载体蛋白能够提高链霉菌中次生代谢产物的产量,为进一步研究该基因的功能与对刺糖多孢菌中多杀菌素合成的作用奠定了重要基础。; 陶文娜夏立秋丁学知唐滢; 关键词：链霉菌异源表达

多杀菌素生产菌原生质体的制备条件及其再生菌株生理特性被引量：6: 2009年; 为了改良多杀菌素生产菌种,提高多杀菌素产量,研究了甘氨酸添加浓度、溶菌酶作用时间、温度和浓度对多杀菌素生产菌刺糖多胞菌Saccharopolyspora spinosaSP06081菌株原生质体制备和再生的影响,并考察了不同再生培养基和渗透压稳定剂对其再生的影响,确定了该菌株原生质体制备和再生的最佳条件。同时,对原生质体再生菌株的形态与多杀菌素产量变化进行了比较研究。结果表明:菌体在添加0.2%的甘氨酸的TSB培养基中培养48h收集,0.1mg/mL溶菌酶,28oC作用20min制备原生质体,将原生质体涂布于以蔗糖为渗透压稳定剂的R2YE培养基中,原生质体再生数目最多,达108个/mL以上;原生质体再生菌株在形态和抗生素产量上产生分化,29.3%的再生菌株形态上保持与亲本菌株一致,具有菌丝松散,断裂分枝多的特点,其中53.2%的再生菌株多杀菌素产量变异向正方向移动,最高产量达到582.0mg/L,比亲本菌株提高85.6%。原生质体再生菌株的形态分化与多杀菌素产量具有重要相关性。; 罗玉双丁学知夏立秋王海龙黄璠唐滢; 关键词：多杀菌素原生质体再生菌株形态分化

DNA克隆修饰新技术研究及其应用: 目前主要的DNA克隆和修饰技术包括体外进化(DNA shuffling),位点特异性重组和Red/ET同源重组等。这些DNA克隆和修饰技术被广泛应用于功能基因组学和代谢工程研究。位点特异性重组和Red/ET同源重组尤其适...; 王海龙张友明张允雷黄璠唐滢单世平吴风颜富贾亮丁学知胡胜标夏立秋; 关键词：DNA克隆功能基因组学代谢工程; 文献传递

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唐滢