周宏敏
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：安徽大学更多>>
- 发文基金：安徽省优秀青年科技基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Trametessp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5′-端调控区的克隆与分析被引量：9
- 2005年
- Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71·0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36·4倍。邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA)。竞争性RT_PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平。lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性。采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA5′_端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等。这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律。
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- 关键词：真菌漆酶定量RT-PCR顺式作用元件
- 栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质被引量：10
- 2007年
- 栓菌420（Trametes sp．420）漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）进行异源表达，产生两种重组漆酶：rLacDx（具有天然N-末端）和rLacDe（N-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d，rLacDx和rLacDe的产量分别为1．21×10^5u／L、7、38×10^4u／L[以2，2＇-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（ABTS）为底物]。在高密度发酵条件下，rLacDx的产量增加到2．39×10^5u／L，同时其生产周期降至7．5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似，且在50℃和pH3～10的范围内均稳定。然而，rLacDx对底物ABTS的比活力（1761u／mg）高于rLacDe（1122u／mg），其表观Km值（427μmol／L）低于rLacDe（604μmol／L）。
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- 关键词：异源表达高密度发酵漆酶毕赤酵母
- 栓菌420漆酶基因的克隆及其在Pichia pastoris的高效表达
- 采用简并引物和长距离反向PCR(LD-IPCR),以栓菌420(Trametes sp．420)的基因组为模板,克隆得到一新的漆酶同工酶基因lacD。该基因开放读码框长2052bp,含有8个内含子。lacD序列与其它担子...
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- 文献传递
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法，由申请人自主构建的基因工程菌株酵母Pp420D制备种液后接种在培养基上于25～31℃条件培养20～30小时，维持溶氧25～35％，然后按每升发酵培养基每小时添加12～25mL营养液...
- 肖亚中洪宇植周宏敏李剑凤
- 文献传递
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法
- 一种重组酵母Pp420D生产漆酶的方法，由申请人自主构建的基因工程菌株酵母Pp420D制备种液后接种在培养基上于25～31℃条件培养20～30小时，维持溶氧25～35％，然后按每升发酵培养基每小时添加12～25mL营养液...
- 肖亚中洪宇植周宏敏李剑凤
- 文献传递
