刘元
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：海南大学环境与植物保护学院更多>>
- 发文基金：海南省重点科技项目更多>>
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- 结核分枝杆菌TB15.3与TB16.3蛋白的原核表达与血清学诊断价值研究
- 由结核分枝杆菌感染引起的结核病，是当今世界致死率最高的传染病之一。预防和控制结核病最关键的环节在于及早发现，准确用药，这就给结核病的早期诊断提出了迫切的要求。近年来，血清学诊断的方法越来越多的应用在了结核病的早期实验室诊...
- 刘元
- 关键词：结核分枝杆菌血清学诊断特异性抗原原核表达
- TB16.3重组蛋白在结核感染中的诊断价值研究被引量：3
- 2013年
- 目的通过构建结核分枝杆菌蛋白TB16.3的原核表达载体并表达纯化,对其检测抗体的性能进行评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA扩增TB16.3基因,连接到表达载体PET-30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签镍柱层析纯化重组蛋白。结果建立ELISA方法检测116份TB患者和96份健康对照者血清中的抗结核菌TB16.3抗体。构建了表达TB16.3的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在。诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,37℃培养5h可获得最大量表达。而在28℃时重组蛋白为可溶形式表达。用重组TB16.3蛋白,ELISA方法检测118份TB患者和96份健康者血清,敏感性、特异性和调整一致率分别为72.9%、86.5%和79.6%。抗TB15.3抗体的敏感性、特异性和调整一致率分别为46.6%、99.0%和76.0%。抗CFP-10的敏感性、特异性和调整一致率分别为75.4%、55.2%和65.7%。结核病患者抗Rv2626C抗体阳性率(44.1%)显著低于其在正常对照的阳性率(75.0%,χ2=20.8,P<0.01)。TB15.3和TB16.3等量包被检测,敏感性、特异性和一致率分别达69.4%、96.9%和83.7%,检测非TB肺部疾病患者,其抗体阳性率仅为9.6%,特异性为90.4%。TB15.3和TB16.3混合后同时包被检测,结合TB15.3单独检测的结果,则敏感性、特异性和一致率分别达82.2%、95.9%和88.9%,一致率为最高。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,获得制备上述4种蛋白的最适条件。获得的重组TB16.3、CFP-10和TB15.3蛋白可能成为结核病血清学诊断的抗原或者抗原组合。Rv2626C抗体可能被用于结核患者恢复期的评估。
- 朱中元刘元王海波肖劲逐邱一帆颜磊陈德刘爱国杨欣
- 关键词：结核分枝杆菌血清学诊断
- 结核分枝杆菌TB15.3蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的通过原核表达及亲和层析技术,得到纯化的重组TB15.3蛋白。方法通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv菌株的基因组中扩增出TB15.3蛋白的编码基因,再将其连接入PET-30a表达载体中,以E.coli BL21(DE3)菌株为宿主菌通过IPTG诱导表达,并通过亲和层析法纯化目的蛋白。结果通过IPTG诱导后得到目的蛋白,并且目的蛋白以可溶性蛋白形式表达。结论成功得到纯化的目的蛋白,为以后的实验奠定基础。
- 刘元朱中元王海波
- 关键词：原核表达蛋白纯化
