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TREK—1双孔钾离子通道的门控机制研究: 【研究目的】:离子选择器构象的变化是钾离子通道控制钾离子流出的最有效策略,是门控机制研究的重要内容。TREK—1属于双孔钾离子通道,在生理条件下可以产生自发的外向整流型背景电流,通过维持可兴奋细胞静息膜电位决定产生动作电...; 马晓芸华南于金梅张树卓刘晓燕吴宝红郑建全; 文献传递

稳定表达CRFR1的HEK293细胞株建立与功能鉴定被引量：3: 2014年; 目的建立稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并鉴定cAMP评价体系构建是否成功。方法采用Lipofectamine2000将CRFR1质粒转染至HEK293细胞中,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术、RT-PCR法、免疫荧光法证实稳定表达CRFR1细胞株构建成功。并用CRF刺激稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,绘制CRF刺激HEK293-CRFR1细胞释放cAMP的量效曲线。结果 Western blot、RT-PCR、免疫荧光结果表明,CRFR1受体在HEK293细胞系中成功表达。cAMP释放量效实验显示,CRF刺激HEK293-CRFR1细胞释放cAMP的EC50为(5.64±0.05)×10-10mol·L-1。结论成功建立了稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并且cAMP含量评价体系构建成功,为研究CRFR1的生物学功能及筛选CRFR1受体靶向药物奠定了基础。; 葛治娟于金梅马晓芸刘晓燕郑建全; 关键词：促肾上腺皮质激素释放因子 HEK293细胞 CAMP G蛋白偶联受体

cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建被引量：1: 2014年; 目的:构建含有cAMP反应元件(CRE)的萤光素酶报告基因载体。方法:以含有gal4位点的萤光素酶报告基因质粒为模板,利用PCR方法,在去除gal4位点的同时,连入4个CRE元件得到pCRE-luc;将该载体与G蛋白偶联受体(GPCR)共转染人胚肾细胞HEK293,测定萤光素酶活性;应用蛋白激酶A(PKA)抑制剂确认CRE的活性是否与Gs通路相关。结果:pCRE-luc的活性直接相关于GPCR的激活程度,并依赖Gs信号通路。结论:CRE萤光素酶报告基因载体构建成功,可用于检测Gs偶联GPCR的活性,为基于GPCR的高通量药物筛选奠定了基础。; 马晓芸于金梅卓仁恭张康郑建全; 关键词：报告基因萤光素酶 G蛋白偶联受体

能拮抗促肾上腺皮质激素释放因子受体1的多肽及其用途: 本发明涉及能拮抗促肾上腺皮质激素释放因子受体1的多肽及其用途。本发明的多肽具有如下氨基酸序列：WLPVDWH、NPAFELM、FWGDDGY、LLWLDWH、YLDAWENEVINF、DGYNGEPWIWQQ或YAGDF...; 郑建全马晓芸于金梅闫海涛魏晓莉; 文献传递

具有增强酸感受离子通道1a电流作用的多肽及其用途: 本发明公开了一组与酸感受离子通道1a(ASIC1a)亚基具有特异性结合能力及生物学活性的多肽类分子的序列。使用细胞电生理技术证明，其中一个多肽P13能明显增加胞外pH值下降诱发的ASIC1a同聚体电流。本发明还涉及编码这...; 郑建全马晓芸刘晓燕张树卓于金梅吴宝红闫海涛李昕魏晓莉; 文献传递

人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体EC1片段在原核系统中的可溶性表达被引量：1: 2011年; 目的:研究人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体(hCRFR1)EC1区蛋白片段在原核表达系统中可溶性表达的影响因素。方法:以pcDNA3.1-hCRFR1全长质粒为模板,PCR扩增EC1区分别编码118和88个氨基酸残基(分别对应融合蛋白GST-EC1118和GST-EC188)的片段,将其插入pGEX-4T2载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目标蛋白表达;采用GSTrap FF亲和纯化柱对目标蛋白进行纯化,并用Western印迹证实。结果:与GST-EC1118相比,GST-EC188可溶性表达增加,为下一步hCRFR1相关研究的开展奠定了基础。结论:hCRFR1的EC1区M1～N19及N108～V118两个片段影响该区域在原核系统中表达的可溶性,推测可能与富含疏水性氨基酸有关。; 于金梅马晓芸孙洪良闫海涛郑建全; 关键词：可溶性原核表达

能拮抗促肾上腺皮质激素释放因子受体1的多肽及其用途: 本发明涉及能拮抗促肾上腺皮质激素释放因子受体1的多肽及其用途。本发明的多肽具有如下氨基酸序列：WLPVDWH、NPAFELM、FWGDDGY、LLWLDWH、YLDAWENEVINF、DGYNGEPWIWQQ或YAGDF...; 郑建全马晓芸于金梅闫海涛魏晓莉; 文献传递

TREK-1双孔钾离子通道的门控机制研究: 2011年; 【研究目的】：离子选择器构象的变化是钾离子通道控制钾离子流出的最有效策略，是门控机制研究的重要内容。TREK-1属于双孔钾离子通道，在生理条件下可以产生自发的外向整流型背景电流，通过维持可兴奋细胞静息膜电位决定产生动作电位的阈值，参与神经保护、; 马晓芸华南于金梅张树卓刘晓燕吴宝红郑建全; 关键词：钾离子通道离子选择动作电位

利用噬菌体展示技术筛选CRFR1肽类拮抗剂: 促肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin-releasing Factor,CRF)是由41个氨基酸组成的神经肽。是机体应激反应的关键因子,协调应激相关的自主神经、免疫、生理和行为反应。CRF是应激反应轴下丘...; 于金梅; 关键词：噬菌体展示技术抑郁症拮抗剂; 文献传递

从噬菌体随机七肽库中筛选hERG钾通道亲和肽的研究: 2011年; 目的获得与hERG钾通道特异性结合的功能性亲和肽。方法以hERG1a亚基第3个细胞外环(L3)为靶蛋白分子,对噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,ELISA法检测噬菌体克隆与靶蛋白的亲和性,使用全自动膜片钳技术观察亲和肽的活性。结果与结论经过3轮亲和筛选后,随机挑选15个噬菌体克隆对其亲和性做ELISA鉴定,均显示较强的阳性结果。将上述阳性克隆进行DNA测序得到3种不同小肽序列。电生理学研究表明,合成的3个小肽均能显著抑制hERG钾电流,为靶向hERG钾通道抗肿瘤研究提供了新的研究思路。; 孙洪良魏晓莉于金梅华南刘晓燕郑建全; 关键词：HERG钾通道噬菌体展示肽库

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于金梅