魏弘宜
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：北京林业大学生物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 毛果杨腺苷酸合成酶基因ACS-1的克隆和酶学分析
- 2014年
- 乙酰辅酶A连接酶(ACS)属于腺苷酸合成酶超基因家族,与4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)有着紧密的进化关系。通过对毛果杨数据库中4CL基因的同源检索,克隆获得了毛果杨基因Prt4CL8的序列(命名ACS-1,Genebank登录号XM_002329288.1)。序列分析表明,ACS-1具有ACS的关键残基以及C端末尾的PTS1序列;而4CL的高度保守结构域boxⅠ和boxⅡ在该蛋白中不保守。利用PCR技术克隆序列,构建表达载体pET30a,转化大肠杆菌并表达重组蛋白。对其进行酶学活性分析,结果证明该蛋白不能催化4CL常见底物,而对ACS底物乙酸钠具有明显催化活性:Km为(0.25±0.02)mmol·L-1;Vm为(8.63±0.63)mmol·L-1。结果表明,ACS-1是ACS家族成员,为腺苷酸合成酶超基因家族成员的鉴定与功能分析提供了一定的理论基础。
- 王昱堃魏弘宜陆海
- 关键词：ACS
- 毛白杨抗坏血酸过氧化物酶基因PtAPX2的克隆表达及分析被引量：3
- 2013年
- 以毛白杨总RNA为模板反转录得到cDNA,克隆获得抗坏血酸过氧化物酶基因家族中的一个成员PtAPX2 864bp的编码序列。该基因编码的蛋白包含287个氨基酸,理论分子质量为31.78ku,C末端包含锚定于过氧化物酶体跨膜结构域,推断其为过氧化物酶体定位蛋白。构建了PtAPX2原核表达载体,在大肠杆菌中表达获得了纯化的重组蛋白,并对其进行了酶学性质分析。PtAPX2对抗坏血酸的Km值为(1.37±0.22)mmol/L,Vmax值为(3.95±0.46)mmol/(L·min·mg);对H2O2的Km值为(0.026±0.003)mmol/L,Vmax值为(1.27±0.03)mmol/(L·min·mg);该酶在28℃,pH7.0～7.4时活性最高。实时荧光定量PCR分析表明,PtAPX2在杨树老叶叶肉中表达量最高。对PtAPX2亚细胞定位、底物结合特征、酶学性质及组织特异性表达的分析加深了对木本植物抗氧化机理的认识。
- 潘翔李娜李印军魏弘宜张蕾陆海
- 关键词：毛白杨抗坏血酸过氧化物酶克隆酶学性质
- 3个腺苷酸合成酶超基因家族成员(ACS-1,ACS-2,ACS-3)的克隆与性质分析
- 乙酰辅酶A连接酶(ACS)属于腺苷酸合成酶超基因家族，与4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)有着紧密的进化关系。本实验室已成功从植物毛白杨中克隆得到5个4CL基因，并从植物毛果杨中克隆得到13个4CL相似基因。
本次实...
- 魏弘宜
- 关键词：毛白杨
- 毛白杨4-香豆酸：辅酶A连接酶(4CL3)的酶学特征研究被引量：5
- 2013年
- 为了进一步研究杨树4CL基因,以毛白杨为材料克隆到一个新的毛白杨4CL3基因。生物信息学分析结果显示:该基因和其他4CL基因一样含有4CL基因家族2个保守框Box I和Box II。将4CL3基因连接至原核表达载体pQE30,表达纯化后测定其蛋白的比活力,结果显示:4CL3基因对不同底物表现出了不同的催化效率。对该基因的最适温度和最适pH值测定后发现:4CL蛋白的最适温度为40℃,最适pH值为8.5,且在pH=9.0时有60%的活力。采用HPLC-MS的方法,分析了4CL3蛋白对混合底物的催化情况,结果显示:在混合底物下,4CL3蛋白对4-香豆酸、阿魏酸和肉桂酸都表现较高的活力,而对芥子酸和咖啡酸没有活力。
- 饶国栋张永卓魏弘宜蒋湘宁陆海张建国
- 关键词：4-香豆酸HPLC-MS原核表达毛白杨
- 毛白杨4CL-like基因的克隆与原核表达分析被引量：1
- 2013年
- 为得到毛白杨4CL-like基因并对其原核表达特性进行分析,利用毛白杨叶片的总RNA反转录得到的总cDNA为模板,利用PCR技术克隆得到毛白杨4CL-like基因(登录号:XP_002315339.1)。利用MEGA软件对4CL-like基因及其他9个来自不同物种的4CL基因进行进化树分析。最后通过构建pET30-4CL-like原核表达载体对该基因进行原核表达分析。结果显示,克隆得到的4CL-like基因CDS区全长为1 758 bp,编码585个氨基酸。系统进化分析表明,该基因与葡萄中的4CL-like5有很高的同源性。另外,SDS-PAGE分析表明,4CL-like基因在大肠杆菌BL21中成功表达,所表达融合蛋白的分子量约为60 ku。
- 曹山饶国栋魏弘宜蒋湘宁陆海
- 关键词：毛白杨克隆原核表达
