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慢病毒介导LIGHT基因在结直肠癌细胞HCT116中的表达被引量：2: 2013年; 目的观察慢病毒介导的LIGHT基因对结直肠癌细胞HCTll6的作用。方法将LIGHT基因克隆至慢病毒表达载体中，在293T细胞中进行病毒的包装。慢病毒以不同的感染复数（MOI）感染HCT116细胞，通过绿色荧光蛋白的表达和细胞活性筛选最适MOI。重组慢病毒感染HCT116细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（Real—timePCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞中LIGHT基因和蛋白的表达。噻唑蓝（MTT）实验检测细胞的生长活性。结果经酶切和测序鉴定证实重组慢病毒载体构建成功。重组慢病毒的滴度为1．96x10^8TU／ml。慢病毒MOI为2感染HCT116，转染效率可达92％。慢病毒感染24、48、72、120h后，细胞中LIGHTmRNA的表达量分别是空白对照组的19．03、68．59、94．35和q1．71倍，明显高于空白对照组和慢病毒对照组（P〈0．05）；并且重组慢病毒组细胞中LIGHT蛋白含量从12h的0增加到72h的11.36μg／L，其相对生长增殖率也显著低于慢病毒对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论成功构建LIGHT基因过表达慢病毒载体；重组慢病毒可有效转染结直肠癌细胞HCT116，高效表达LIGHT蛋白，并对HCT116细胞有明显抑制作用。; 王海波隋爱华刘世海骆铮李传智刘相萍; 关键词：结直肠癌慢病毒基因转染

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骆铮