韩红兵 作品数:32 被引量:73 H指数:5 供职机构: 中国农业大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 转基因生物新品种培育专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
雌激素对鸡单核巨噬细胞吞噬力的影响 目的:探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)对鸡单核巨噬细胞的影响。方法:分离小型蛋鸡的单核-巨噬细胞,分别加入不同浓度E2(62.5-1000pmol/L),用CCK8方法在8、24、48h检测细胞活力。结论:药物作用24... 王淑辉 麻慧 韩红兵 张晓 牟进菲 连正兴 李宁关键词:雌二醇 单核细胞 巨噬细胞 文献传递 应用吞噬性能选育矮小鸡的抗病群体 2016年 【目的】单核巨噬细胞在免疫系统中发挥着重要的作用,试验研究了对单核巨噬细胞吞噬性能的选择影响矮小鸡G1代抗传染性支气管炎病毒(IBV)的能力。【方法】在矮小鸡290日龄时,检测了G0代500只个体(母鸡400只,公鸡100只)的吞噬指数(PI),并根据PI的大小分为强吞噬力组(HPIG)和弱吞噬力组(LPIG)。建立2×2交配组合:HPIG♂×HPIG♀(强公强母组),LPIG♂×HPIG♀(弱公强母组),HPIG♂×LPIG♀(强公弱母组),LPIG♂×LPIG♀(弱公弱母组)。随机选择400只1日龄G1代雏鸡(每组100只,公母各半),其中360只采用滴鼻方式人工接种含IBV M41病毒的鸡胚尿囊液,40只作为对照,连续观察14d,记录死亡数,制作石蜡切片进行H.E.染色,并通过红细胞凝集抑制试验(HI)测定15 d时存活鸡只的抗体效价。G1代鸡20周龄时,选择母鸡12只,其中强组母鸡后代6只,弱组母鸡后代6只,以病毒模拟物Poly I:C刺激体外培养的单核巨噬细胞,采用荧光定量PCR的方法测定细胞因子及主要组织相容性复合体(MHC)m RNA的表达水平。【结果】G0代不同个体对异源红细胞的吞噬能力差异显著,通过测定G0代个体的吞噬指数,建立交配组合,孵育得到G1代鸡。对G1代鸡的IBV攻毒试验的结果为强公强母组后代的死亡率(33.3±0.05)%显著低于弱公弱母组(55.6±0.05)%,其他两个组合后代的死亡率介于上述值之间,弱公强母组为(43.3±0.05)%,强公弱母组为(47.8±0.05)%;母鸡对后代的影响大于公鸡,强母组后代的死亡率(38.3±0.04)%显著低于弱母组(51.7±0.04)%。攻毒组在接种IBV M41病毒3 d后表现出咳嗽、呼吸困难、食欲减退、精神沉郁等临床症状,对病死鸡的气管及肾脏的H.E.染色结果可见典型的病灶,气管上皮细胞坏死脱落,肾小管上皮细胞发生空泡变性等,而对照组均无临床症状及组织病变。对198只攻毒后存活个体抗体滴度的测定结果显示强组母鸡后代抗体滴度(8.45±0.07)� 麻慧 韩红兵 宁中华 连正兴关键词:单核细胞 巨噬细胞 抗病性能 矮小鸡 抗鸡传染性支气管炎病毒shRNA转基因鸡的研究 本试验构建了M蛋白保守区基因的shRNA,利用慢病毒转染法生产了表达此shRNA的转基因鸡。Tg单核巨噬细胞在IBV感染后,产生了对病毒mRNA与蛋白的抑制作用,表明构建的RNAi对IBV感染有抑制作用。IBV的侵染并未... 于坤 汪海 呼锐 韩红兵 连正兴关键词:转基因鸡 支气管炎病毒 基因工程抗体 蛋白表达 文献传递 绿头鸭RIG-I cDNA克隆与慢病毒载体构建 本实验以绿头鸭血为材料,利用细胞分离方法结合RT-PCR技术从绿头鸭的总RNA中成功的克隆出RIG-IcDNA,与以往实验比减少了对动物的伤害。与NCBI已发表的序列比对,一致性为99%,这可能是地方个体生长发育过程中或... 王克君 韩红兵 于坤 李萌 吴芳芳 曹之晨 李文婷 连正兴关键词:转染 RIG-I 克隆 慢病毒 鸡类囊胚获得及其生物学特性研究 被引量:5 2005年 鸡胚是研究胚胎发育、组织分化、基因表达与调控良好的实验模型, 是动物功能基因组学研究的重要材料. 实验选取白来航蛋鸡所产新鲜种蛋, 采用纸环法收集胚盘, 机械打碎后进行悬浮培养, 获得了哺乳动物囊胚样结构, 命名为类囊胚. 体外培养12~24 h是类囊胚发育的高峰期, 其直径显著增加近1倍. FBS可促进类囊胚的发育, 而卵黄在12 h前对类囊胚发育没有明显影响, 但到24 h时可促进类囊胚的贴壁生长. 经碱性磷酸酶(AKP)染色初步显示类囊胚中含有大量碱性磷酸酶活性的胚胎干细胞, 胚胎干细胞特异性表面标志SSEA-1免疫荧光染色后呈阳性, 进一步肯定了类囊胚中ES细胞的存在, 最终从贴壁类囊胚中分化出神经样和成纤维样等多种类型细胞. 由此可以得出: 悬浮培养鸡胚盘细胞可以形成含有胚胎干细胞的、类似哺乳动物囊胚样的结构, 并能保持其内胚胎干细胞的特性和分化潜能. 李佳 潘求真 李俊英 韩红兵 孙书锋 杨君 徐曙光 田亮 连正兴 杨宁 李宁关键词:基因表达与调控 碱性磷酸酶活性 鸡类 细胞特异性 组织分化 ES细胞 藏灵菇嗜热链球菌胞外多糖对人结肠癌细胞的增殖抑制 被引量:13 2008年 探讨从藏灵菇中筛选的嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)所产胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对人结肠癌HCT-8细胞增殖的影响。采用CCK-8法测定EPS对HCT-8细胞生长的抑制率;形态学观察EPS对HCT-8细胞的杀伤作用;流式细胞术检测EPS对HCT-8细胞周期的影响。结果显示:EPS对HCT-8细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;倒置显微镜下观察部分细胞脱壁、核碎裂、固缩,细胞悬浮坏死;细胞周期分析显示G1期细胞百分率增大。说明EPS通过直接杀伤人结肠癌HCT-8细胞,使细胞周期阻滞于G1期而抑制细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用。 马杉姗 王世平 连正兴 韩红兵 刘慧关键词:嗜热链球菌 胞外多糖 人结肠癌细胞 增殖抑制 细胞周期 褪黑素合成酶ASMT基因过表达奶山羊生物安全评价研究 被引量:1 2020年 为了研究乳腺过表达褪黑素合成限速酶乙酰血清素甲基转移酶(ASMT,HIOMT)基因奶山羊的生物安全性,试验针对乳腺过表达褪黑素合成酶ASMT基因奶山羊模型,记录了转基因山羊的生长发育数据、检测了血液及尿液中生理生化指标,并对肠道微生物、乳成分及褪黑素含量进行分析。结果表明:1)转基因阳性羊0,3,6,12月龄体重、体长、身高和胸围四项生长指标和对照羊均无显著差异(P>0.05);2)转基因阳性羊体温、胆固醇、血糖、总蛋白和各类型细胞含量及尿液中蛋白质、葡萄糖含量等指标与对照羊无显著差异(P>0.05);3)16S r DNA菌群测序结果表明,转基因阳性羊与对照羊肠道微生物群落组成及优势菌群均无显著差异(P>0.05);4)转基因阳性羊褪黑素含量显著高于对照羊(P<0.05),且乳中褪黑素含量显著高于血液(P<0.05),转基因阳性羊乳中乳蛋白和干物质含量显著高于对照羊(P<0.05),转基因阳性羊体细胞数显著低于对照羊(P<0.05)。说明乳腺过表达褪黑素合成限速酶ASMT基因不影响转基因奶山羊健康,而且会提高奶山羊乳品质。 吴昊 崔绪代 李云翔 杨海 张金龙 张效生 马文奎 张鲁 韩红兵 吴英杰 刘海军 袁三平 连正兴 刘国世关键词:奶山羊 褪黑素 鸡胚胎干细胞能量代谢的特点 2010年 细胞能量代谢与细胞生命活动紧密相关,但目前对于鸡胎干细胞能量代谢特的研究较少.本研究利用前期建的chES细胞模型,通过电子显微发现未分化的chES细胞胞质内储存大量糖原颗和卵黄颗.逆转录-聚合酶链反应对能量代谢途中的要限速酶的基因表达分析显,未分化的chES细胞不表达丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶,与鸡胎成纤维细胞相比低表达葡萄糖转运蛋白1和磷酸果糖激酶,高表达己糖激酶1和糖原合成酶;分化中的chES细胞与成年母鸡肝脏相比少量表达PCX和PCK2,与CEF细胞相比高表达GLUT1,HK1,PFK,而GYS的表达没有显性差异.过酸希夫氏染色显,细胞养过程中未分化chES细胞中储存的糖原颗未见减少,而分化中的chES细胞的糖原颗逐渐减少.此外,通过赫斯特荧光染料33342和化丙啶双染色发现,大量未分化的chES细胞在体外养过程中死亡,而添加外源性6-磷酸葡萄糖显减少细胞死亡.上述果说明,未分化chES细胞要以糖原合成为,无糖异生代谢,而分化中的chES细胞以糖酵代谢为.未分化的chES细胞以大量消耗代谢中间产物G6P为代价进行糖原合成,造成细胞内源性G6P相对不足引起细胞死亡.因此,细胞内糖原的含量反映了chES细胞的分化程度.chES细胞在体外养时可通过添加G6P来提高生存率. 李佳 张宝路 韩红兵 曹之辰 连正兴 李宁关键词:能量代谢 糖原 细胞命运 中国人白细胞介素-12(hIL-12)cDNA克隆及序列分析 IL-12是调节体内产生免疫反应的一个重要细胞因子,是目前所有发现的细胞因子中对体内免疫活性细胞的诱导作用和调节作用最强、范围最广的一类。IL-12由35kDa(P40)和40kDa(P40)两个亚基通过二硫键相连组成异... 韩红兵 徐署光 连正兴 陆泉枝 李宁关键词:CDNA克隆 文献传递 绵羊sTLR4基因的克隆表达及定位 被引量:2 2011年 采用RT-PCR方法克隆绵羊TLR4基因的一种新型剪接体形式sTLR4,将sTLR4与EGFP构建融合蛋白表达载体。用EcoR I和Sma I分别双酶切质粒pEGFP-N1和sTLR4基因的PCR产物,采用T4连接酶进行连接,将质粒转化TOP10菌株,挑取阳性克隆采用AgeI和VspI对质粒进行双酶切鉴定。经鉴定的质粒采用电击方法转染胎儿成纤维细胞,在激光共聚焦显微镜下观察sTLR4蛋白在成纤维细胞中的定位情况。结果表明:构建的融合蛋白pEGFP-N1-sTLR4能够在成纤维细胞中正常工作,且sTLR4-EGFP融合蛋白可以在细胞膜上表达。 杜金苓 韩红兵 张宝路 连正兴关键词:转染 绵羊