陈巧云
- 作品数：43 被引量：138H指数：7
- 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生重大课题基金江苏省医学重点人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- YB-1对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达和细胞侵袭及成球能力的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达及细胞迁移、成球能力的影响。方法:应用基因重组技术将YB-1基因及其siRNA构建于腺病毒载体pADeasy-1,重组腺病毒及腺病毒空载体转染乳腺癌细胞株MCF-7;通过蛋白质印迹法,RT-PCR和免疫荧光的方法检测YB-1和CD44的表达;MTT法检测转染后细胞生长速度,并绘制生长曲线;并通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力;细胞使用无血清培养基培养,并加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察YB-1对细胞成球能力的影响。结果:蛋白质印迹法和RT-PCR结果显示,转染YB-1重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44的表达明显高于转染腺病毒空载体组和未转染组;相反,转染YB-1 siRNA重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44表达明显低于对照腺病毒空载体组和未转染组;免疫荧光也证实CD44蛋白水平与YB-1表达正相关。细胞生长曲线表明,转染YB-1重组腺病毒载体组的细胞生长速度最快,而且其侵袭、迁移和成球能力最强。结论:YB-1可能通过调控CD44的表达影响人乳腺癌细胞MCF-7的侵袭及成球能力。
- 吴晓君许文林冷加燕龙璐璐朱小兰李皓姚俊徐红美陈巧云惠璐璐
- 关键词：YB-1CD44乳腺癌MCF-7细胞株
- 塞来昔布预防MCF-7细胞获得性耐药发生被引量：5
- 2009年
- 目的:观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对乳腺癌细胞株MCF-7获得性耐药的预防作用,并对其机制进行初步探讨。方法:采用小剂量多柔比星(doxorubicin,Doxo)对MCF-7细胞进行诱导,建立获得性耐药诱导模型,同时以此模型,联合应用塞来昔布进行耐药预防研究。MTT法检测多柔比星对MCF-7细胞的生长抑制效应及半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)值;RT-PCR方法检测MDR1、MRP1、GST及TopoⅡ等多药耐药相关基因的变化;Western印迹法检测蛋白的变化;FCM法检测细胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达及功能。结果:多柔比星(0.05μg/mL)作用7d,MCF-7细胞内MDR1及MRP1在mRNA及蛋白水平均上调,而GST及TopoⅡ未见明显变化;联合塞来昔布(10和20μmol/L)进行干预,可有效抑制多柔比星诱导的MDR1及MRP1在mRNA及蛋白水平的上调,细胞膜P-gp功能均降低。多柔比星与塞来昔布(10μmol/L)联合作用组,MCF-7细胞对多柔比星的IC50值为(0.38±0.04)μg/mL与多柔比星单药组的(0.67±0.03)μg/mL相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:选择性Cox-2抑制剂塞来昔布可有效预防MCF-7细胞获得性耐药的发生,且具有明显的化疗增敏作用,其初步作用机制部分涉及塞来昔布抑制多柔比星引起的P-gp及MRP1的上调。
- 陈琛许文林方莉莉房新建杨靖陈巧云
- 关键词：乳腺肿瘤抗药性肿瘤环氧化酶2MCF-7细胞
- 类风湿性关节炎患者microRNA-21的表达与Th17/Treg细胞失衡的关系研究
- <正>研究背景:Th17/Treg细胞失衡参与类风湿性关节炎(RA)患者的发病,但其具体的机制未明。近年来的研究显示,microRNA(miRRNA)是免疫反应的重要调节因子,参与多种炎症性疾病的调控,包括RA。目的:研...
- 汪雪峰董利阳林新刘月琴谢婵娟包婷郡李浩陈巧云
- 文献传递
- 雷公藤甲素对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在探讨雷公藤甲素(TPL)对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响。采用MTT法检测TPL细胞毒性和阿霉素药物敏感性;流式细胞术检测P-糖蛋白表达和细胞内阿霉素浓度;双荧光素酶报告基因系统检测MDR1启动子活性。结果表明:TPL增强K562/A02细胞阿霉素敏感性。TPL作用后,K562/A02细胞P-糖蛋白表达相关平均荧光强度(MFI)由123±13下降到39±13(P<0.05);K562/A02细胞内阿霉素相关MFI由18±5上升到34±6(P<0.05),TPL能够有效抑制K562/A02细胞的药物外排。TPL降低MDR1启动子转录活性约75%。结论:TPL通过下调P-糖蛋白表达增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,其有可能成为一种耐药逆转剂。
- 惠璐璐许文林陈巧云朱小兰龙璐璐徐颖秦蓉
- 关键词：雷公藤甲素K562/A02细胞株阿霉素多药耐药
- 食管癌患者外周血CD4^+CD25^+Foxp^(3+)调节性T细胞检测及其临床意义被引量：11
- 2008年
- 目的:通过检测食管癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化,观察其与临床及病理特征之间的关系,探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术检测30例食管癌患者及16例健康志愿者外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例;收集食管癌患者的临床及病理资料,分析研究Treg细胞变化与临床及病理特征之间的关系。结果:流式细胞术检测显示食管癌患者外周血PBMC中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例为(3.72±1.39)%,高于对照组(1.15±0.36)%,P<0.01;食癌管患者外周血中Treg细胞比例与患者的年龄、性别、肿瘤的位置无明显相关性(P>0.05),而与淋巴结转移情况及TNM分期有明显的相关性(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能在食管癌免疫耐受中发挥重要作用,检测其比例对于判断食管癌的病期及预后有一定价值。
- 付白清吴朝阳许亚平王法春陈巧云
- 关键词：调节性T细胞食管癌流式细胞术
- 血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响
- 2010年
- 目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。
- 李娟许文林弓晋灵杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：多药耐药相关蛋白1血管内皮生长因子荧光素酶报告基因启动子活性
- CD44v17在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系
- 2011年
- 目的 探讨一种新的CD44变异体（CD44v17）在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系.方法根据本实验室在MCF-7／Adr中新发现的1种CD44剪切拼接变异体CD44v17设计特异性引物,应用SYBR Green I荧光染料,采用实时PCR法检测87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 Mrna的表达,根据标准曲线计算CD44v17mRNA的表达量,分析CD44v17mRNA表达与胃癌临床生物学特性之间的关系.结果胃癌组织CD44v17 Mrna表达明显高于相应癌旁正常组织（P〈0.05）;肿瘤〉5 cm组CD44v17 Mrna表达与肿瘤≤5 cm组表达比较差异无显著性（P〉0.05）;未分化腺癌组表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组（P〈0.05）,乳头状腺癌组CD44v17 Mrna表达与管状腺癌组比较差异无显著性（P〉0.05）;肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 Mrna表达显著高于侵及黏膜、黏膜下层及肌层组（P〈0.05）,而肿瘤侵及黏膜及黏膜下层组的CD44v17 Mrna表达与侵犯肌层组表达比较差异无显著性（P〉0.05）.淋巴结转移组CD44v17 Mrna表达明显高于淋巴结无转移组（P〈0.05）;有肝脏转移组CD44v17 Mrna表达显著高于无肝脏转移组（P〈0.05）.结论CD44v17 Mrna在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的侵袭、转移及预后有关.
- 姚俊许文林冷加燕徐红美吴晓君陈巧云
- 关键词：实时荧光定量PCR胃癌
- Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控
- 2008年
- 目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。
- 罗文娟许文林吕旭晶邱志远陈巧云王法春
- 关键词：多药耐药基因-1多药耐药转录调节
- shRNA干扰VEGF表达对白血病细胞多药耐药的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的关系及其机制。方法:针对VEGF基因设计合成3条干扰片段shRNA1,2,3,采用脂质体2000分别将其转染入K562/A02细胞,RT-PCR法检测VEGF和多药耐药相关基因MDR1,MRP1,topoⅡ,GST的mRNA水平;蛋白质印迹法检测VEGF蛋白水平;MTT法检测各组细胞对多柔比星的半数抑制浓度(IC50值)。结果:K562/A02细胞VEGFmRNA表达水平显著高于敏感株K562细胞,差异有统计学意义(P<0.01),且VEGF蛋白水平也显著高于K562细胞;转染shRNA后,K562/A02细胞中VEGFmRNA水平出现不同程度下调,其中shRNA2组和shRNA3组与转染随机片段组比较差异有统计学意义(P<0.05),以shRNA3组下调最显著,并且VEGF蛋白水平也出现相应的下调;转染48 h后K562/A02细胞中MDR1,MRP1及topoⅡ的mRNA水平均出现不同程度下调,以shRNA3组下调最显著,分别下调(39.7±1.21)%,(29.1±0.97)%,(28.2±1.04)%,GST基因表达则无明显变化;阳性转染组细胞对多柔比星的敏感性明显增加,其中以shRNA3组最显著。结论:VEGFshRNA可以抑制K562/A02细胞VEGF基因与蛋白的表达,不同干扰片段的沉默效果不同,并增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,其机制可能与MDR1,MRP1及topoⅡ的表达下调有一定的关系。
- 方莉莉许文林陈琛房新建陈巧云李娟
- 关键词：RNA干扰K562/A02细胞多药耐药
- YB-1蛋白对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响
- 2011年
- 本研究探讨YB-1基因表达下调后对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响及其机制。采用脂质体介导的方法将已构建的人YB-1基因特异性shRNA及随机片段HK的真核表达载体转染进白血病细胞K562/A02中,RT-PCR和免疫印迹反应检测YB-1 mRNA和蛋白表达量的改变;采用MTT法和细胞周期测定分析对白血病细胞增殖的影响;用AnnexinⅤ检测白血病细胞的凋亡程度;采用MTT法检测细胞IC50值变化;RT-PCR和流式细胞术检测基因转染前后细胞中的MDR1 mRNA和P-gp表达的变化。结果表明,阳性转染的3组细胞YB-1基因和蛋白的表达量明显低于随机片段组和未转染细胞;生长曲线提示阳性转染组细胞生长缓慢,细胞周期动力学分析显示阳性转染组G1期细胞增多,G2期与S期细胞显著减少;在小剂量As2O3作用下,阳性转染组细胞的凋亡数量明显高于对照组细胞;阳性转染细胞的阿霉素IC50明显低于随机片段组和阴性对照组;阳性转染细胞MDR1 mRNA水平明显降低,P-gp的峰值较对照组明显左移。结论:YB-1特异性shRNA能有效降低白血病细胞中YB-1的表达,减慢细胞生长,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,加速细胞凋亡。
- 沈慧玲周磊磊陈巧云陈琛方丽丽房新建许文林
- 关键词：YB-1蛋白白血病细胞细胞增殖细胞凋亡
