薛琳
- 作品数：10 被引量：45H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- H5N1虎源流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：7
- 2006年
- 根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果。结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析。选择保守序列区作为扩增区域，利用Primer5．0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用成本较低、不需要特异探针引物、优化周期短。能区分病毒变异株的SYBR GreenⅠ随机掺入法建立定量PCR反应体系，并对反应条件进行优化。试验结果表明应用该方法对虎源H5流感病毒的检测具有高度的特异性，检测的灵敏度为10^1-10^2拷贝数。对20份病死老虎临床病料和24份人工感染的小鼠脏器病料用荧光定量RT-PCR方法、常规RT-PCR方法和病毒分离方法进行检测。荧光定量RT-PCR方法检测结果略高于常规RT-PCR方法，但与病毒分离方法结果相一致。这说明荧光定量RT—PCR方法可以对临床上H5N1虎源流感病毒检测提供参考。
- 侯小强夏咸柱高玉伟薛琳王铁成
- 关键词：荧光定量RT-PCR
- 狂犬病病毒和犬瘟热病毒疫苗株混合感染Vero细胞的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究狂犬病病毒(RV)及犬瘟热病毒(CDV)共同感染Vero细胞及混合感染对产毒量的影响,比较病毒检测方法的敏感性。方法将单独培养的RV、CDV及RV-CDV混合培养物进行连续10倍稀释后同步接种Vero细胞,37℃5%CO2培养5d,分别以直接免疫荧光(DFA)、RT-PCR及荧光定量RT-PCR方法检测病毒的半数细胞感染量,并对各病毒检测方法进行比较。结果RV和CDV可同时感染Vero细胞,并在其中增殖。CDV单独感染Vero细胞的TCID50为10-5.8/0.05ml,RV和CDV混合感染Vero细胞的TCID50为10-5.5/0.05ml。DFA、RT-PCR和荧光定量RT-PCR阳性的RV-CDV感染最大稀释度分别为10-6、10-5和10-6。结论混合培养对RV和CDV的感染滴度及产毒量影响很小。免疫荧光灶检测与RT-PCR及荧光定量RT-PCR方法检测的敏感性相当。犬瘟热-狂犬病毒联合疫苗的病毒滴度检测可不经中和其中的一个病毒直接将联合疫苗接种Vero细胞,然后分别进行免疫荧光检测。
- 王化磊杨松涛郑学星苏建青王承宇赵柏林岳妙姝薛琳夏咸柱
- 关键词：犬瘟热病毒狂犬病毒病毒滴度
- 狂犬病毒荧光抗体的制备及初步应用
- 荧光抗体实验是狂犬病毒(Rabies virus,RV)实验室诊断的一种最精确、快速、可靠的方法。本实验旨在通过制备RV荧光抗体,结合直接免疫荧光实验(dFAT)和荧光抗体病毒中和实验(FAVN)建立RV抗原、抗体检测方...
- 薛琳
- 关键词：单克隆抗体荧光抗体
- 文献传递
- 抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：6
- 2007年
- 将狂犬病病毒ERA株纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为C7、C4和H3。经过鉴定:其腹水效价分别为1∶1×105、1∶5×104及1∶1×104;且与犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)不发生交叉反应;3株单抗均为IgG类型。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化,将纯化后的单抗腹水用FITC(异硫氰酸荧光素)标记制备荧光抗体,建立了检测狂犬病病毒的荧光染色法。结果表明,该方法对狂犬病的实验室诊断具有快速和特异性高的特点。
- 薛琳夏咸柱高明华高玉伟侯小强
- 关键词：单克隆抗体免疫荧光
- 虎血清犬腺病毒抗体调查被引量：6
- 2005年
- 贺文琦夏咸柱高玉伟孙贺廷王立刚刘丹薛琳黄耕
- 关键词：犬腺病毒血凝抑制抗体
- 犬狂犬病病毒抗体胶体金免疫层析检测试纸条及制备工艺
- 本发明提供一种犬狂犬病病毒抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备工艺，根据抗原抗体能特异结合的免疫学基本原理，将羊抗犬免疫球蛋白(IgG)用胶体金标记，包被在玻璃纤维膜上作为结合垫，将纯化的狂犬病毒抗原或基因工程表达的抗原(...
- 夏咸柱黄耕杨松涛王承宇高玉伟侯小强高明华王铁成薛琳
- 文献传递
- 狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：16
- 2007年
- 目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间。通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法。结果扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h。重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8%,并能与RV阳性血清发生特异性反应。用表达的狂犬病重组N蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法。结论成功表达了狂犬病核蛋白,用表达的狂犬病核蛋白建立的间接ELISA方法可以用于RV抗体的检测。
- 高明华夏咸柱薛琳
- 关键词：核蛋白基因原核表达间接ELISA
- 狂犬病毒ERA株疫苗弱毒对犬的安全性实验研究
- 犬五联弱毒疫苗中的狂犬病毒ERA株第15代Vero细胞培养毒Rb/E3-15，经乳鼠脑内连续传5代后，在Vero细胞中再传2代，获得Rb/E3-15-5。经形态学观察、核酸检测、TCID50、LD50测定比较所获传代毒株...
- 刘林立薛琳王泽王铁成黄海楠高玉伟夏成柱杨松涛夏志平邹啸环王承宇高明华王化磊郑学星郭利
- 关键词：狂犬病毒弱毒疫苗基因组测序
- 文献传递
- 狂犬病病毒核蛋白基因的克隆序列分析及其在E.coli中的高效表达被引量：1
- 2006年
- 对狂犬病病毒(RV)ERA株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列分析。根据GenBank中已发表的RVN基因序列,设计合成了1对特异性引物,对RVERA株N基因进行了RT-PCR扩增。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接得到重组质粒pMD-N,并进行核苷酸序列测定。结果该基因全长1353bp,编码450个氨基酸。RVERA株与CVS-11、PV-11、SRV9和SAD-B19株相比,核苷酸的同源性分别为98%、98.3%、99%、99.6%,推导的氨基酸的同源性分别为98%、99%、99%、99.6%。将pMD-N双酶切,回收目的基因片段并克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N;将其转化表达菌BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达。结果重组菌裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为53kDa的重组蛋白,经凝胶薄层扫描分析,重组蛋白表达量占菌体蛋白的56.8%,Western-blot结果显示该重组蛋白能与RV多克隆抗体发生特异性反应。
- 高明华夏咸柱薛琳
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白基因克隆
- 犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：7
- 2009年
- 用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用间接ELISA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性。结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别命名为AD7、AE2、CE3、EH5、GG6和GF1。交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,6株单抗的特异性良好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单抗。培养上清液及小鼠腹水ELISA效价分别为26~211和104~107。相加试验表明:单抗AE2、CE3、GG6和GF1具有共同的表位,而单抗AD7和EH5识别的位点与其他4株不同。
- 苏建青岳妙姝王化磊薛琳夏咸柱
- 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体间接酶联免疫吸附试验
