薛方明
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省高校高新技术产业发展项目教育部高校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- CTAB选择性沉淀和纯化质粒DNA工艺的建立被引量：2
- 2008年
- 通过直接在大肠杆菌碱裂解上清中加入十六烷基三甲基溴化铵（CTAB），优化CTAB与质粒DNA量的比例、质粒DNA选择性释放溶液的选择和TritonX－114的使用，建立了简单、易行的大规模质粒DNA纯化工艺。纯化质粒DNA的质量检测结果显示，CTAB纯化的质粒DNA无菌体RNA污染，菌体基因组DNA、内毒素和蛋白含量分别小于100ng／mg、50EU／mg和10μg／mg质粒DNA，OD260／OD280比值介于1．75－1．85之间，超螺旋质粒DNA的比例大于80％，该工艺纯化的质粒DNA能达到或接近FDA规定的人用质粒DNA的各项指标，整个过程不使用动物源性酶和苯酚、氯仿、无水乙醇等有毒或易燃、易爆试剂，成本低廉，工艺环保。
- 张泉于可响袁维峰薛方明孙怀昌朱鸿飞
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵质粒DNA纯化
- 重组大肠杆菌碱裂解方法的改进被引量：3
- 2007年
- 为了降低质粒DNA的生产成本,对经典碱裂解法中的溶液III进行了改进,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为指示菌,用标准碱裂解和改进碱裂解法提取质粒pcDNKLYZ,以提取的质粒产量和质量为指标,判断优化碱性裂解法的性价比,结果显示,用改进后的碱裂解法裂解重组菌,提取的pcDNKLYZ质粒产量和质量等指标与标准方法接近,而成本仅为标准方法的1/4,可用于重组质粒的大规模制备。
- 张泉朱鸿飞于可响薛方明孙怀昌
- 关键词：重组大肠杆菌碱裂解法
- 用表达人溶菌酶基因的重组质粒防治干乳期奶牛乳腺炎被引量：3
- 2007年
- 将人溶菌酶(human lysozyme,hLYZ)cDNA插入由pcDNA3改造而成的pcDNAK表达载体,用获得的重组载体pcDNAKLYZ转染COS-1细胞,经免疫荧光试验证明能进行正确表达。将重组载体注射于哺乳母鼠,取其乳汁进行溶菌酶活性测定,结果显示,分泌在乳汁中的重组hLYZ高达139mg/L。根据乳汁体细胞检测结果,选择健康奶牛和乳腺炎阳性奶牛,分别在干奶时和产犊前2周2次注射重组质粒pcDNAKLYZ,注射途径为乳腺基部穿刺,注射剂量为300μg/乳区,于产犊后1个月采集奶样进行体细胞检测,结果显示,对前一泌乳期发生的奶牛乳腺炎的治愈率为91.5%,对下一泌乳期奶牛乳腺炎的预防有效率至少为96.97%。由此认为,构建的表达hLYZ基因的重组表达质粒,可以替代抗菌素类油乳剂用于干乳期乳腺炎的防治。
- 薛方明孙怀昌钱科仇华磊吴春华尹召华
- 关键词：人溶菌酶乳腺炎干乳期奶牛
- 三种乳腺特异表达载体表达特性的比较被引量：3
- 2004年
- 为了比较不同来源乳腺特异表达载体的表达特性 ,将人溶菌酶 (hLYZ)cDNA分别克隆入自行构建的p2 0 5C3载体和国外引进的pBJ41和pBC1载体。重组载体p2 0 5C3LYZ、pBJLYZ和pBCLYZ分别用 2 5kDaPEI包裹后 ,通过尾静脉途径注射哺乳期小鼠。注射后 72h采集乳样 ,经微球菌溶解实验证明 ,3组小鼠乳汁中hLYZ的表达量分别为 87、69、60mg L ;从每组小鼠的 1 2种组织提取总RNA ,经Dotblotting检测证明 ,三种重组载体除在乳腺中表达外 ,p2 0 5C3LYZ还在小鼠的脾和肠、pBJLYZ在脾、pBCLYZ在脾和肾中具有一定的异位表达 ;在有hLYZmRNA转录的上述脏器中用微球菌溶解试验均可检测到hLYZ活性。这些实验结果表明 ,自行构建的乳腺特异表达载体的表达特性与从国外引进的表达载体无明显差别。
- 李国才孙怀昌朱秋菊张泉居杏珠陈刚薛方明于可响
- 关键词：乳腺注射体表静脉途径特异表达异位表达
- 防治奶牛乳房炎基因药物的安全性试验
- 用乳腺特异表达人溶菌酶(hLYZ)基因的重组质粒作为防治奶牛乳房炎的基因药物,初步试验结果表明具有良好的治疗效果.为了证明该基因药物临床使用的安全性,本研究用纯化的重组质粒注射小鼠、奶牛犊和奶牛,对质粒注射动物的临床表现...
- 薛方明房浩霞张泉孙怀昌
- 关键词：乳房炎重组质粒基因药物奶牛疾病药物安全
- 文献传递
- 人溶菌酶cDNA在COS-1细胞及小鼠乳腺的暂态表达被引量：1
- 2005年
- 目的研究自行克隆的1.5kb hLYZ双链cDNA的表达特性。方法将此cDNA亚克隆入真核表达载体pcDNA3及乳腺特异表达载体p205C3,重组载体pcDNA3LYZ转染COS-1细胞,用间接免疫荧光法检测转染细胞中hLYZcDNA的表达;重组载体p205C3LYZ注射哺乳期小鼠,用微球菌溶解试验和斑点杂交试验检测hLYZ cDNA在小鼠体内的表达。结果hLYZ cDNA在转染的COS-1细胞中得到了正确表达;小鼠体内表达并分泌到乳汁中的hLYZ达87μg/ml,且目的基因的表达具有较好的组织特异性。结论hLYZ cDNA可在COS-1细胞中有效表达,基因构件p205C3LYZ可以用于动物乳腺生物反应器研制。
- 李国才张泉黄永生薛方明陈兵孙怀昌李厚达
- 关键词：人溶菌酶动物乳腺生物反应器PCDNA3小鼠真核表达载体间接免疫荧光法
- 人巨细胞病毒pp150抗原区基因片段的克隆与表达
- 2003年
- 为了研制人巨细胞病毒(HCMV)核酸疫苗,根据HCMV基质磷蛋白pp150基因序列设计引物,利用高保真PCR从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码pp150抗原决定簇区域的基因片段。序列分析结果显示其与发表的该段序列同源性为100%。将此基因片段克隆进原核表达质粒pET30a,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达后经SDS-PAGE及Western blotting检测到约35 ku的外源蛋白。表达产物免疫小鼠,所得抗体具有低滴度中和作用。
- 李国才季明春薛方明严华申厚凤
- 关键词：人巨细胞病毒核酸疫苗抗原决定簇原核表达
- 新鲜牛乳酸度增高的原因分析被引量：7
- 2003年
- 正常牛乳的酸度为16～18°T.这种酸度主要由乳中蛋白质、柠檬酸盐、磷酸盐及二氧化碳等酸性物质所构成.该酸度通常称自然酸度.牛乳挤出后在存放过程中,由于微生物的作用,分解乳糖产生乳酸,而使牛乳酸度升高,这种因发酵产酸而升高的酸度称为发酵酸度.自然酸度和发酵酸度之和称总酸度,即通常所表示的酸度.高酸度或酒精阳性乳不利于加工.因此,乳品加工部门已将酸度和酒精试验作为检测牛乳品质好坏的重要指标.凡是酸度18°T以上或酒精试验阳性的牛乳,皆按不合格乳处理,算等外乳或者拒收.笔者曾对两个牛场鲜乳质量进行了测定比较,并就酸度增高的原因作了初步分析和探讨.
- 王杏龙毛永江薛方明侯道荣
- 关键词：牛乳酸度酒精试验临床型乳房炎产奶量
